PCR純化試劑盒，那可是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常常會用到的工具，它能用來把PCR反應(yīng)體系里的引物、dNTP、酶以及鹽離子給去除掉，進(jìn)而回收得到高純度的DNA片段。正確地去選擇以及使用這類試劑盒，會直接對下游克隆、測序或者酶切實(shí)驗(yàn)的成敗產(chǎn)生影響。
如何選PCR純化試劑盒
進(jìn)行選擇之際，首要關(guān)注的是回收片段的大小范圍，不同的試劑盒對于DNA片段具備特定的結(jié)合能力，一般覆蓋的范圍是從100bp到10kb，然而存在一些試劑盒對于小于100bp的短片段，其回收率是比較低的。其次要考量回收效率以及洗脫體積，具備高回收率的試劑盒能夠減少珍貴樣本的損耗，而洗脫體積低則會直接提升產(chǎn)物的濃度。另外還需要留意試劑盒的類型，離心柱型和磁珠型各有各的優(yōu)勢與劣勢，離心柱型操作較為簡單，不過需要離心設(shè)備，磁珠型則更適宜自動化平臺。
PCR純化試劑盒使用步驟
以最為常用的離心柱型作為示例，第一步是進(jìn)行結(jié)合，具體為把PCR產(chǎn)物跟結(jié)合緩沖液按照某一比例予以混合，以此讓DNA能夠選擇性地吸附至硅膠膜之上。第二步著手洗滌，也就是運(yùn)用含有乙醇的洗滌緩沖液去把雜質(zhì)盡數(shù)去除掉，在這一步特別要保證洗滌液能夠完全透過柱子，一般情況下會進(jìn)行離心操作，時(shí)長為1分鐘。第三步開展洗脫，即朝著柱子的中央加入洗脫液或者去離子水，在靜置1至2分鐘之后再次進(jìn)行離心，進(jìn)而讓DNA完完全全地溶解下來。整個(gè)的流程大約10分鐘便能夠完成。
PCR純化試劑盒注意事項(xiàng)
洗滌步驟里殘留的乙醇，是下游實(shí)驗(yàn)中常見的干擾源頭；在離心收集洗脫液之前，建議再多離心1分鐘，以此徹底去除乙醇，不然的話就會抑制后續(xù)的酶促反應(yīng)；洗脫液的pH值，同樣會對回收效率造成影響，其中選擇Tris緩沖液，在pH8.0 - 8.5時(shí)最為適宜，而用水進(jìn)行洗脫的時(shí)候，需要留意其pH是否穩(wěn)定；倘若回收的片段小于100bp，就應(yīng)該挑選專門針對短片段進(jìn)行優(yōu)化的試劑盒，普通的產(chǎn)品，可能存在結(jié)合力不夠的情況；操作期間要避免交叉污染，每次都要更換吸頭，并且使用無菌的耗材。
