分子生物學(xué)實驗室里，PCR技術(shù)屬于基礎(chǔ)工具，試劑盒質(zhì)量對實驗結(jié)果準(zhǔn)確性和可重復(fù)性有著直接關(guān)系。市面上產(chǎn)品種類繁多，每個科研人員都需認真對待如何去選擇適合自己研究的試劑盒，還有如何規(guī)范使用這一問題。
如何挑選合適的PCR試劑盒
首先，挑選試劑盒得明確實驗?zāi)康?。要是進行常規(guī)基因鑒定，普通的Taq酶試劑盒便能滿足需求，且成本更可控。然而，要是涉及高保真擴增、長片段擴增或者熒光定量檢測，那就得針對性選擇帶有特殊修飾酶或緩沖體系的產(chǎn)品。仔細閱讀說明書里的擴增性能數(shù)據(jù)，評估其能不能覆蓋目標(biāo)片段長度以及GC含量范圍，這比單純比較價格更為重要。
實驗重復(fù)性差怎么辦
在碰見重復(fù)性不太好的問題之際，提議從試劑盒的分裝以及使用習(xí)慣方面查找原因。大包裝的試劑盒要是反復(fù)進行凍融，就會致使酶活下降以及組分不均勻，這是重復(fù)性差的常見緣由。把試劑盒分裝成單次使用的小份，并且嚴(yán)格依照說明書里的反應(yīng)體系配制順序來做，能夠有效降低批間差異。與此同時，要保證所使用的耗材和儀器是經(jīng)過校準(zhǔn)的，防止因設(shè)備差異而引入系統(tǒng)誤差。
試劑盒的儲存與分裝技巧
試劑盒儲存，和其有效期內(nèi)穩(wěn)定性直接相關(guān)聯(lián)。收到試劑盒之后，各組分要馬上按照說明書要求存放至零下二十?dāng)z氏度或者四攝氏度，還要做好標(biāo)記。對于如酶和dNTP這類敏感組分，建議在首次使用之際進行無菌分裝。操作的時候要在冰盒上完成分裝，使用沒有核酸酶的離心管以及濾芯吸頭，并且記錄分裝日期與體積，如此既能避免污染，又便于追溯問題源頭。
有沒有在實驗期間碰到過試劑盒里某一個組分提前就失效從而致使實驗失敗的那種情形呢？歡迎于評論區(qū)去分享自身的經(jīng)歷以及排查所積累的經(jīng)驗呀。
