首次培養(yǎng)的細胞，是從機體取出后的原代細胞，此細胞在形態(tài)方面、功能層面上，與體內(nèi)狀態(tài)是最為接近的，它是基礎研究里最常用的實驗模型。然而，這類細胞對于操作環(huán)境以及手法的要求是極高的，稍微有一點不注意，便會對活性造成影響，甚至會致使實驗失敗。那下面依據(jù)實驗室常見問題，來聊聊分離培養(yǎng)當中的幾個關鍵環(huán)節(jié)。
原代細胞是什么
有不少新手易于將原代細胞跟細胞系弄混，原代細胞是直接源自動物或者人體組織的，沒有經(jīng)過多次傳代，保留著來源組織特有的功能以及標志物，像從肝組織分離出來的肝細胞，依舊具備代謝酶活性，而從乳腺組織分離出來的上皮細胞，是保留激素響應能力的，這種特性讓其在機制研究里不可替代，不過同時也表明它更為“嬌貴”。
原代細胞如何培養(yǎng)
決定成敗的第一步是分離過程，組織剪碎后要用特定酶消化，消化時間得嚴格把控，時間過短細胞數(shù)量不夠，過長會損傷細胞膜，像胰蛋白酶，在37度水浴中消化10到15分鐘較常見，不過不同組織差異明顯，終止消化后要用完全培養(yǎng)基輕柔吹打，要注意力度，防止產(chǎn)生氣泡沖擊細胞。
原代細胞質(zhì)量怎么控
純化環(huán)節(jié)不能忽視，鑒定環(huán)節(jié)同樣不能忽視。消化后的細胞懸液里頭含有多種細胞類型，能用差速貼壁法進行富集，也能用密度梯度離心法進行富集。若要分離成纖維細胞的話，利用它貼壁快的特性，可在30分鐘之后，把未貼壁的上皮細胞給轉(zhuǎn)移到新的皿中。鑒定的時候，除了要觀察形態(tài)之外，還得用免疫熒光檢測特異性標志物，或者用流式細胞術檢測特異性標志物，以此來確保純度能夠達標。
原代細胞用在哪
培養(yǎng)進程里的環(huán)境維系屬于持續(xù)不斷的挑戰(zhàn)，這類細胞對于培養(yǎng)基成分敏感，一般需要添加百分之十至百分之二十的胎牛血清，并且補充谷氨酰胺以及生長因子，培養(yǎng)箱的二氧化碳濃度、溫度波動，還有操作臺的無菌狀態(tài)，任何一個細節(jié)出現(xiàn)問題都有可能致使細胞老化或者污染，建議構(gòu)建嚴格的質(zhì)控記錄，從培養(yǎng)基批次直至操作時間都予以追蹤。
你實驗室于培養(yǎng)原代細胞之際，最為常遇的難點是組織消化未曾徹底完成，還是傳代之后形態(tài)出現(xiàn)了變化呢？
