常用于實(shí)驗(yàn)室量化檢測(cè)蛋白靶標(biāo)的科研ELISA試劑盒，其數(shù)據(jù)質(zhì)量與研究結(jié)論可信度直接相關(guān)。在實(shí)際操作里，許多新手常常僅留意說明書上的靈敏度數(shù)值，卻忽視了決定實(shí)驗(yàn)成敗的核心細(xì)節(jié)。結(jié)合多年實(shí)驗(yàn)室一線經(jīng)驗(yàn)，我覺得從選型直至操作，有三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)值得每一位科研人員反復(fù)琢磨。
核心優(yōu)勢(shì)與特異性驗(yàn)證
挑選試劑盒之際，最為首要的并非去看它能夠檢測(cè)多少種類的樣本，而是其核心抗體的特異性究竟有沒有歷經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證，高特異性意味著抗體僅僅識(shí)別目標(biāo)蛋白，而不會(huì)跟樣本里豐度較高的類似物產(chǎn)生交叉反應(yīng)，建議于采購(gòu)之前仔細(xì)查閱供應(yīng)商所提供的驗(yàn)證數(shù)據(jù)。特別是有沒有借助敲除細(xì)胞裂解液或者質(zhì)譜法開展的特異性確認(rèn)，這就能從根本上排除假陽(yáng)性信號(hào)的干擾。
如何避免高背景與假陽(yáng)性
有關(guān)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的高背景狀況，這可是讓好多研究者頭疼不已的問題，它常常跟封閉步驟以及洗滌流程存在關(guān)聯(lián)。封閉要是不充分，就會(huì)致使抗體跟板底產(chǎn)生非特異性結(jié)合，而洗滌若不徹底，便會(huì)殘留未結(jié)合的抗體或者酶結(jié)合物。解決的策略挺簡(jiǎn)單：其一就是要去挑選跟檢測(cè)體系具有良好兼容性的封閉液，其二是在洗板之際嚴(yán)格依照推薦的洗滌次數(shù)以及浸泡時(shí)間，并且擔(dān)保洗板機(jī)管路順暢，防止氣泡殘留。
儲(chǔ)存穩(wěn)定性與效期管理
儲(chǔ)存條件對(duì)于試劑盒而言，會(huì)直接對(duì)其組分活性造成影響，其中試劑盒里特別關(guān)鍵的試劑例如像酶結(jié)合物以及標(biāo)準(zhǔn)品亦是涵蓋在內(nèi)的。當(dāng)收到試劑盒之后，一定要在第一時(shí)間依據(jù)所附帶的說明書來(lái)進(jìn)行分類存放，一般情況下抗體以及酶標(biāo)物需要在避光的條件下保存于二至八攝氏度的范圍之內(nèi)，然而呈現(xiàn)為凍干粉形式的標(biāo)準(zhǔn)品卻需要放置在零下二十?dāng)z氏度的環(huán)境之中。建議在試劑盒的外包裝之上標(biāo)注好開瓶的日期，并且建立起試劑庫(kù)存的臺(tái)賬，以此來(lái)防止使用過期的或者反復(fù)凍融超過三次的組分。
樣本預(yù)處理的關(guān)鍵細(xì)節(jié)
制備樣本的這個(gè)環(huán)節(jié)，是保障數(shù)據(jù)真實(shí)性的最后一道關(guān)鍵防線。針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清，直接采取離心操作來(lái)獲取上清就行；然而對(duì)于組織裂解液或者血清樣本而言，就得著重留意pH值以及離子強(qiáng)度，看它們是否跟試劑盒的反應(yīng)體系相匹配。高脂肪或者高血色素的樣本，極其容易造成基質(zhì)效應(yīng)，進(jìn)而致使讀數(shù)出現(xiàn)偏差。在這種情況下，可以經(jīng)由預(yù)實(shí)驗(yàn)去開展稀釋線性驗(yàn)證，找出最佳的稀釋倍數(shù)，以此保證待測(cè)物濃度處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的中段區(qū)間。
于取得一份美觀的標(biāo)曲數(shù)據(jù)之際，你有無(wú)用心核查過全部質(zhì)控品以及復(fù)孔CV值均處于可接受范圍之內(nèi)呢？
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