在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究里頭，ATCC細(xì)胞身為標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)胞資源，給實(shí)驗(yàn)供給了能夠重復(fù)的可靠根基。從構(gòu)建實(shí)驗(yàn)體系起始，一直到發(fā)表高質(zhì)量論文，挑選并運(yùn)用適宜的細(xì)胞株，那可是決定研究成敗的關(guān)鍵一步呀。
如何選擇合適的ATCC細(xì)胞株
面對ATCC極為龐大的細(xì)胞庫，首先得明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康模粢_展藥物篩選，那就應(yīng)優(yōu)先去選擇貼壁生長、倍增時(shí)間穩(wěn)定的上皮細(xì)胞系，若進(jìn)行信號通路研究，那么就要考慮細(xì)胞來源是不是與靶點(diǎn)組織相匹配，查閱細(xì)胞說明書的時(shí)候，重點(diǎn)去關(guān)注種屬、組織來源、形態(tài)特征以及是否經(jīng)過STR鑒定，以此確保細(xì)胞身份準(zhǔn)確無誤，建議在訂購之前檢索同行發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，瞧瞧該細(xì)胞株在類似研究中的應(yīng)用頻率以及效果。
ATCC細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
復(fù)蘇細(xì)胞之后，需嚴(yán)格依照供應(yīng)商給出的培養(yǎng)條件，涵蓋基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清濃度、氣相環(huán)境等。眾多ATCC細(xì)胞株對于胰酶消化時(shí)間十分敏感，時(shí)間過長會損害膜表面蛋白，時(shí)間過短則聚團(tuán)狀況嚴(yán)重，會直接對后續(xù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造成影響。建議在首次開展培養(yǎng)時(shí)，先實(shí)施小規(guī)模預(yù)實(shí)驗(yàn)，探尋最佳的傳代比例以及操作窗口期。定期開展支原體檢測同樣是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理里不可缺少的一個(gè)環(huán)節(jié)，能夠有效防止交叉污染引發(fā)的數(shù)據(jù)偏差。
如何確保ATCC細(xì)胞活性與純度
將凍存管從液氮里取出之后，迅速解凍并且馬上稀釋DMSO，此過程要在1至2分鐘之內(nèi)搞定，復(fù)蘇率能夠提高30%以上。平常培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%左右的時(shí)候就應(yīng)當(dāng)傳代，千萬不要讓細(xì)胞生長得過于密集，不然會引發(fā)接觸抑制或者出現(xiàn)表型漂移。為了維持遺傳穩(wěn)定性，建議在凍存的時(shí)候采用低代次（復(fù)蘇后傳代不超過10次）的細(xì)胞來進(jìn)行保種，每次實(shí)驗(yàn)之前都重新復(fù)蘇一支新細(xì)胞，防止長期連續(xù)培養(yǎng)積累的基因突變對結(jié)論的嚴(yán)謹(jǐn)性產(chǎn)生影響。
ATCC細(xì)胞污染常見原因
微生物混入細(xì)胞致使實(shí)驗(yàn)室面臨極為棘手困難情境，其根源常常取決于操作時(shí)的細(xì)微環(huán)節(jié)，像是生物安全柜并無按照恰當(dāng)周期去開展高效過濾器質(zhì)量檢驗(yàn)工作可能引發(fā)問題，或者移液管在使用期間不小心碰到并非無菌的區(qū)域也會成為隱患。細(xì)菌造成的污染常常體現(xiàn)為培養(yǎng)基很快就變成黃顏色且呈現(xiàn)渾濁狀態(tài)，然而真菌所導(dǎo)致的污染則會生成能夠憑借肉眼觀察到的菌絲狀聚合體。更為難以察覺的是支原體引發(fā)的污染狀況，它不會讓培養(yǎng)基外在表現(xiàn)發(fā)生改變，卻會悄然無聲地致使處在生長進(jìn)程的細(xì)胞代謝過程出現(xiàn)變化并且抑制細(xì)胞數(shù)量的增長甚至繁衍，最終使得實(shí)驗(yàn)所獲取到的結(jié)果呈現(xiàn)出虛假的陽性或者虛假的陰性現(xiàn)象。構(gòu)建起符合規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)的無菌操作具體流程以及定期針對實(shí)驗(yàn)環(huán)境開展監(jiān)測工作這般舉措，乃是預(yù)防此類問題發(fā)生保證實(shí)驗(yàn)不出差錯(cuò)的關(guān)鍵所在。
