ELISA試劑盒原理是什么
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒的核心原理，是借助抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，在檢測(cè)進(jìn)程里，目標(biāo)分析物被固定于微孔板表面，待加入酶標(biāo)記的抗體后形成復(fù)合物，最終經(jīng)由顯色底物生成可測(cè)量的信號(hào)，這種具備高特異性的反應(yīng)，使得研究人員能夠于復(fù)雜樣本中精準(zhǔn)地對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行定量，像細(xì)胞因子、激素或者食品中的殘留物質(zhì)等，領(lǐng)會(huì)這一基礎(chǔ)原理，是正確運(yùn)用試劑盒的前提條件，也是后續(xù)排除實(shí)驗(yàn)干擾的基礎(chǔ)所在。
如何選擇ELISA檢測(cè)試劑盒
挑選適宜的檢測(cè)試劑盒，需留意多個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)，首先得確認(rèn)試劑盒的檢測(cè)物種，是否契合您的樣本來源，像鼠源或人源樣本，是不能混合使用的；其次要查看靈敏度與檢測(cè)范圍，靈敏度過低的話，可能會(huì)漏檢低濃度樣本，范圍過窄的話，就沒辦法覆蓋高值樣品；還要掂量試劑盒的批間差和批內(nèi)差，一般優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的變異系數(shù)，是控制在10%以內(nèi)的；另外，說明書標(biāo)注的交叉反應(yīng)率，會(huì)直接對(duì)特異性產(chǎn)生影響，應(yīng)優(yōu)先挑選與其他物質(zhì)沒有干擾的型號(hào)；正規(guī)的供應(yīng)商提供的驗(yàn)證數(shù)據(jù)越詳盡，所需試劑盒的可靠性就越高。
ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題處理
實(shí)際操作期間，常常會(huì)碰到背景過分高或者顯色不均勻的狀況，背景偏高常常是由于洗滌不夠徹底成的，建議增添洗滌的次數(shù)，并且要確保每次都把孔內(nèi)的液體拍干，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，可能跟加樣存在誤差或者孵育時(shí)間不一致有關(guān)系，運(yùn)用多通道移液器，并且嚴(yán)格按照時(shí)間來操作，能夠明顯改善這種情況，要是樣本檢測(cè)的值超過了標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍，需要先預(yù)估濃度，之后進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，并且重新?jì)算最終的結(jié)果，另外還有一種情形，就是顯色液發(fā)生變質(zhì)從而導(dǎo)致沒有信號(hào)，檢查底物溶液是不是變成淡藍(lán)色，就能夠快速做出判斷。每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照和陽性對(duì)照，便于追溯問題根源。
ELISA試劑盒保存要點(diǎn)
放在2至8攝氏度冷藏的是未開封的但切莫冷凍防止抗體失活的試劑盒，已開封的濃縮洗滌液和顯色液能短期保存，不過酶標(biāo)抗體和標(biāo)準(zhǔn)品建議分裝后在零下二十度凍存且避免反復(fù)凍融，不同組分穩(wěn)定性差異極大，像終止液常溫存放就行，而底物液必須避光防潮，每次用完馬上蓋緊試劑瓶，把微孔板條密封放回鋁箔袋，放入干燥劑能延續(xù)剩余板條使用期限，要注意核對(duì)標(biāo)簽上的生產(chǎn)日期，超過有效期即便保存完好的試劑盒也不應(yīng)再用。
