在分子生物學(xué)實驗里，PCR檢測試劑盒屬于那種絕對不能缺少的工具，它的性能跟實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性以及可重復(fù)性直接關(guān)聯(lián)著。市面上有著好多的品牌以及型號，對于初學(xué)者而言，要挑選出契合自身實驗需求的試劑盒，常常會覺得特別困惑。在這篇文章當(dāng)中，會從實際應(yīng)用的角度出發(fā)，去分享四個核心的選擇要點。
如何判斷擴(kuò)增效率
用于衡量PCR檢測試劑盒性能的關(guān)鍵指標(biāo)是擴(kuò)增效率，在理想情形下，擴(kuò)增效率應(yīng)當(dāng)接近100%，這所代表的含義是每個循環(huán)模板量實現(xiàn)翻倍，你能夠借助標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率予以計算，其公式為(10^(-1/斜率)-1)×100%，通常對擴(kuò)增效率的要求是處于90%-110%之間，要是效率偏低，那就表明試劑有可能存在抑制劑或者酶活性不足的狀況，效率過高的話則有可能形成引物二聚體，在購買之前可以查看產(chǎn)品說明書里的驗證數(shù)據(jù)，或者向供應(yīng)商索要典型擴(kuò)增曲線圖。
靈敏度夠不夠用
靈敏程度決定了試劑盒能夠檢測到的最低模板數(shù)量，一般是以檢測限來進(jìn)行表示的。不同的實驗場景對于靈敏度的要求存在著很大差異，比如說環(huán)境樣本檢測或許需要達(dá)到10拷貝/反應(yīng)，然而轉(zhuǎn)基因成分篩查所要求的則更低。你能夠通過梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品去驗證試劑盒的實際靈敏程度。要注意查看產(chǎn)品是不是提供低濃度樣本的重復(fù)性數(shù)據(jù)，穩(wěn)定的檢出率相較于單純追求極低檢測限而言更為重要。
抗干擾能力強(qiáng)不強(qiáng)
各類常存在于實際樣本里的抑制物，像腐殖酸、多糖、血紅蛋白等，優(yōu)秀的PCR檢測試劑盒會配備專門用于應(yīng)對的抗抑制緩沖液，或者借助熱啟動酶、優(yōu)化離子濃度來增強(qiáng)耐受性。選擇時能夠留意產(chǎn)品是不是經(jīng)過了諸如土壤、糞便或食品提取核酸這類復(fù)雜樣本的驗證。要是實驗樣本類型較為特殊，建議先去測試加標(biāo)回收率，以此保證基質(zhì)不會對擴(kuò)增效率產(chǎn)生影響。
試劑盒如何正確保存
酶，引物探針，dNTPs以及緩沖液等這些組分一般是PCR檢測試劑盒所包含的，大多試劑盒要求在-20℃避光保存，反復(fù)凍融的話會致使酶活性降低，建議把試劑分裝成單次使用量，并且記錄每次取用的時間，有些廠家推出了凍干或室溫穩(wěn)定的預(yù)混液，這能夠大幅降低對冷鏈的依賴，收到試劑盒之后先檢查運輸溫度是不是符合要求，依照說明書指引開展首次性能驗證。
當(dāng)你處于選購PCR檢測試劑盒之時，你究竟是更加看重靈敏度所對應(yīng)的數(shù)值呢，還是更加看重實際樣本當(dāng)中的穩(wěn)定性所呈現(xiàn)出來的表現(xiàn)呢？歡迎于評論區(qū)去分享你自身的經(jīng)驗。
