微板法生化檢測(cè)設(shè)備
實(shí)施微板法生化檢測(cè)時(shí)，一開始要準(zhǔn)備96孔或者384孔的微孔板，還要準(zhǔn)備多通道移液器，以及酶標(biāo)儀，再有就是恒溫孵育器。微孔板屬于反應(yīng)載體，其表面處理工藝會(huì)直接對(duì)樣本吸附均勻性產(chǎn)生影響。多通道移液器能夠大幅度提高加樣效率，推薦挑選量程可以調(diào)節(jié)的型號(hào)。酶標(biāo)儀需要具備對(duì)應(yīng)波長的濾光片，日常使用之前拿空白板校準(zhǔn)基線，以此保證讀數(shù)穩(wěn)定。恒溫孵育器是用來控制反應(yīng)溫度的，多數(shù)生化反應(yīng)是在37℃下開展的，溫度波動(dòng)超過±0.5℃會(huì)對(duì)結(jié)果造成顯著影響。
微板法生化檢測(cè)步驟
親，實(shí)際操作之時(shí)，要先依照試劑盒說明書去配制工作液，還要留意避光保存。然后，使用多通道移液器朝著微孔板各個(gè)孔依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及待測(cè)樣本，每孔體積一般是50 - 200μL。接下來加反應(yīng)底物的，輕拍板壁混勻之后放進(jìn)37℃孵育箱反應(yīng)10 - 30分鐘。反應(yīng)結(jié)束以后，馬上用酶標(biāo)儀讀取吸光度值，讀取模式選終點(diǎn)法或者動(dòng)力學(xué)法。每一步加樣順序得保持一致的，防止因時(shí)間差致使系統(tǒng)誤差。建議每塊板設(shè)置空白對(duì)照以及重復(fù)孔的，方便后續(xù)數(shù)據(jù)修正。
微板法生化檢測(cè)結(jié)果判讀
讀取的原始數(shù)據(jù)，要先減掉空白孔均值，之后再去計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。借助酶標(biāo)儀配套軟件或者Excel，把標(biāo)準(zhǔn)品濃度當(dāng)作橫坐標(biāo)、吸光度作為縱坐標(biāo)來擬合四參數(shù)或者線性回歸方程，相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)當(dāng)大于0.99。把待測(cè)樣本的校正吸光度代入方程，從而得出具體濃度值。要是樣本濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，那就需要稀釋后重新進(jìn)行檢測(cè)。留意檢查重復(fù)孔之間的變異系數(shù)，要是超過10%那就需要排查加樣或者溫育環(huán)節(jié)的問題。判斷解讀結(jié)果之際，還需要留意那些異常的高值或者負(fù)值，而這些情況一般是在提示孔里面存在氣泡或者洗滌不夠充分！
微板法生化檢測(cè)常見問題
加樣時(shí)產(chǎn)生氣泡，這是致使數(shù)據(jù)出現(xiàn)波動(dòng)的最為常見的緣由。其解決辦法是，把移液器槍頭緊緊貼著孔壁，緩慢地打出液體，防止直接對(duì)孔底形成沖擊。邊緣效應(yīng)同樣是值得予以關(guān)注的，靠邊的孔蒸發(fā)速率更快，建議使用封板膜密封，并且在孵育的時(shí)候適度進(jìn)行加濕。另外一個(gè)高頻出現(xiàn)的問題是，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性表現(xiàn)較差，這常常是由于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不夠精確，或者混勻不夠充分所導(dǎo)致的。一定要運(yùn)用同一支移液器完成所有的稀釋步驟，而且每稀釋一個(gè)級(jí)別都要充分地進(jìn)行渦旋。最后，酶標(biāo)儀的濾光片老化也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)發(fā)生漂移改變，應(yīng)當(dāng)每月運(yùn)用專用標(biāo)準(zhǔn)板對(duì)儀器狀態(tài)驗(yàn)證一回。
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