在生命科學(xué)范疇里的基礎(chǔ)技術(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)，其重點(diǎn)是模擬體內(nèi)的環(huán)境，以使細(xì)胞在體外持續(xù)保持生長(zhǎng)以及增殖，把控規(guī)范的操作流程還有關(guān)鍵的控制點(diǎn)在于能夠得到可靠實(shí)驗(yàn)結(jié)果的保障，本文會(huì)依據(jù)設(shè)備準(zhǔn)備、污染防控以及培養(yǎng)基選擇這三個(gè)方面，對(duì)實(shí)際操作之中的注意事項(xiàng)去進(jìn)行梳理。
細(xì)胞培養(yǎng)需要哪些基本設(shè)備
操作細(xì)胞培養(yǎng)工作時(shí)，超凈工作臺(tái)屬于核心操作區(qū)域，它可提供局部百級(jí)潔凈環(huán)境。二氧化碳培養(yǎng)箱起到維持恒定溫度、濕度以及5%二氧化碳濃度的作用，這是多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)所需的必要條件。倒置顯微鏡利于每天對(duì)細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度加以觀察，而離心機(jī)、移液器和細(xì)胞計(jì)數(shù)板是傳代與凍存操作里不可缺少的工具之一。所有設(shè)備都要定時(shí)校準(zhǔn)和維護(hù)，以此保證參數(shù)穩(wěn)定。
如何避免細(xì)胞培養(yǎng)中的污染問(wèn)題
細(xì)胞培養(yǎng)最常見(jiàn)致使失敗的原因是污染，污染其性質(zhì)主要?jiǎng)澐殖杉?xì)菌污染、真菌污染以及支原體污染這幾種類(lèi)型。在進(jìn)行操作以前，應(yīng)當(dāng)開(kāi)啟超凈臺(tái)的紫外燈去照射30分鐘時(shí)長(zhǎng)，并且要使用75%濃度的酒精來(lái)擦拭相關(guān)臺(tái)面。所有會(huì)接觸到細(xì)胞的那些耗材都必然得經(jīng)過(guò)滅菌處理才行，試劑則需要分開(kāi)來(lái)進(jìn)行使用，目的是避免出現(xiàn)反復(fù)去打開(kāi)蓋子的情況。操作的時(shí)候動(dòng)作務(wù)必應(yīng)當(dāng)做到輕柔狀態(tài)，移液管絕對(duì)不可以去觸碰瓶口的外側(cè)部分，與此同時(shí)建議在培養(yǎng)基里面添加雙抗以此作為預(yù)防方面的措施。一旦察覺(jué)到培養(yǎng)液呈現(xiàn)渾濁或者pH出現(xiàn)異常狀況，就應(yīng)該馬上展開(kāi)隔離并且查找到污染源。
細(xì)胞培養(yǎng)基怎么選更合適
細(xì)胞類(lèi)型決定選擇培養(yǎng)基，DMEM適用于多種貼壁細(xì)胞，像成纖維細(xì)胞，RPMI - 1640常用于懸浮生長(zhǎng)的淋巴細(xì)胞，血清濃度通常為5%至20%，胎牛血清因營(yíng)養(yǎng)全面被廣泛使用，還需注意補(bǔ)充谷氨酰胺和丙酮酸鈉等成分，部分細(xì)胞需要添加生長(zhǎng)因子，建議查閱細(xì)胞供應(yīng)商的說(shuō)明書(shū)，或參考相關(guān)文獻(xiàn)中的成熟配方，首次培養(yǎng)時(shí)可先做小規(guī)模測(cè)試。
細(xì)胞培養(yǎng)的日常觀察要點(diǎn)
每日都要在顯微鏡之下對(duì)細(xì)胞狀態(tài)予以檢查，留意其形態(tài)是不是規(guī)則，貼壁是不是牢固，還有胞質(zhì)有沒(méi)有顆粒。正常生長(zhǎng)著的細(xì)胞折光性很強(qiáng)，分裂相十分明顯；要是出現(xiàn)了空泡，變圓，或者脫落的情況，這意味著沒(méi)準(zhǔn)存在問(wèn)題。與此同時(shí)還要記錄培養(yǎng)基顏色的變化，酚紅指示劑從紅變?yōu)辄S說(shuō)明pH降低了，需要及時(shí)更換培養(yǎng)液。培養(yǎng)密度達(dá)到80%到90%的時(shí)候應(yīng)當(dāng)開(kāi)展傳代，太過(guò)密集會(huì)致使接觸抑制甚至細(xì)胞老化。
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