在生命科學(xué)研究以及質(zhì)檢領(lǐng)域之中，作為基礎(chǔ)檢測工具的ELISA試劑盒，其檢測之后結(jié)果具備的準(zhǔn)確性，會直接對實(shí)驗(yàn)結(jié)論產(chǎn)生影響。從試劑盒進(jìn)行選型開始，一直到操作方面的細(xì)節(jié)，再到數(shù)據(jù)的處理，每一個環(huán)節(jié)都存在著需要去留意的技術(shù)要點(diǎn)。以下是結(jié)合著實(shí)踐當(dāng)中獲得的經(jīng)驗(yàn)，去梳理三個核心步驟。
ELISA試劑盒如何選型
進(jìn)行選型時，首先得明確檢測的靶標(biāo)，以及樣本的類型。不同品牌試劑盒里的抗體，其特異性是存在差異的，這就需要去核對說明書當(dāng)中的交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)。比如說在檢測細(xì)胞上清以及血清樣本的時候，推薦選擇那種經(jīng)過基質(zhì)效應(yīng)驗(yàn)證的試劑盒，以此來避免樣本本底產(chǎn)生干擾。另外，靈敏度指標(biāo)并非是越高就越好的，應(yīng)當(dāng)依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜ミx動態(tài)范圍合適的試劑盒，過高的靈敏度反倒有可能會放大背景噪音。
ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)
操作里，加樣以及洗板屬于最容易出現(xiàn)差錯的環(huán)節(jié)，加樣之際，建議運(yùn)用多通道移液器，讓槍頭維持垂直狀態(tài)且勻速地加入，防止產(chǎn)生氣泡，洗板這個過程，要嚴(yán)格把控浸泡時間以及洗液體積，手工洗板時，每一個孔都需要注滿洗液之后靜置30秒，洗板機(jī)就得定期校準(zhǔn)殘留量，孵育階段要確保恒溫箱溫度波動不超過±0.5℃，并且封好板膜以防止邊緣效應(yīng)。
ELISA試劑盒結(jié)果怎樣判定
判定結(jié)果是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方式的，推薦采用四參數(shù)邏輯回歸擬合，且在每一個檢測批次里面同步去做兩份復(fù)孔，計(jì)算的時候要把變異系數(shù)超過20%的孔位給剔除。在OD值處于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)以及最高點(diǎn)之外的樣本，要經(jīng)過稀釋之后重新進(jìn)行檢測，注意設(shè)置好空白對照與陽性對照，要是空白孔吸光度高于0.1就得排查底物污染或者洗板不徹底的問題。標(biāo)點(diǎn)。
