ELISA試劑盒，乃是生命科學(xué)實驗室里常常會用到的檢測工具，其能夠用來做定量或者定性分析，針對的是蛋白、細胞因子這類生物分子。挑選適宜的試劑盒，還要規(guī)范進行操作，這直接關(guān)聯(lián)到實驗數(shù)據(jù)的可靠性以及重復(fù)性。接下來，結(jié)合實際所擁有的經(jīng)驗，去聊聊在選購、操作以及問題排查方面的關(guān)鍵點。
科研ELISA試劑盒怎么選
第一步要做的是確認檢測樣本的種屬，以及靶標名稱，不同的試劑盒，在對抗原表位的識別這個環(huán)節(jié)上，存在著差異。接著要去查閱產(chǎn)品說明書里有關(guān)靈敏度、檢測范圍以及特異性的數(shù)據(jù)，優(yōu)先去選定引用文獻數(shù)量較多、批間差較小的品牌。還要注意去比較標準品的來源，以及抗體的配對方式，因為這些細節(jié)，會對標準曲線的線性范圍產(chǎn)生影響。要是面對的是稀有樣本，那么選擇檢測下限較低的試劑盒，會更加合適。
其次，要去核對試劑盒的組分是不是完整的情況，預(yù)包被板、檢測抗體、酶標試劑、洗滌液還有顯色液，這些當中缺少任何一個都是不行的。部分試劑盒是需要去額外準備稀釋液或者終止液的。在下單之前，要仔細地去閱讀組分清單。另外，要去確認板條是不是可以拆卸的，那樣方便對于不同批次的少量樣本進行檢測。運輸條件以及保存溫度，也是需要提前去規(guī)劃的，防止試劑失活。
ELISA實驗操作關(guān)鍵步驟
在加樣這個環(huán)節(jié)的時候，一定要使用校準過的移液器，槍頭要貼合孔底側(cè)壁，緩慢地加入，以此來避免產(chǎn)生氣泡。對于標準品以及樣品，建議去做復(fù)孔，并且要隨機進行排列，從而減少位置方面的誤差。在孵育的時候，要用封板膜進行密封，放置在恒溫振蕩器上，以低速進行混勻，確?？贵w與抗原能夠充分結(jié)合。洗板步驟推薦使用自動洗板機，要是手工操作的話，就需要控制拍板的力度，防止孔間出現(xiàn)交叉污染。
把顯色時間嚴格按照說明書去執(zhí)行操作，在加入終止液之后要盡快去讀取OD值。要是實驗室的環(huán)境溫度情況很高，那么可以適當把顯色時間縮短；反過來的話就要進行延長，不過需要去設(shè)置預(yù)實驗從而摸索出最佳的條件。每一次實驗都應(yīng)該包含空白對照以及陽性對照，以此用于監(jiān)控可能存在的系統(tǒng)誤差。記錄下每一塊板的批號和使用期限這兩個信息，為了便于后續(xù)能夠進行追溯。
結(jié)果異常原因排查
若標準曲線斜度很低，或者R值小于0.99，那么要先去檢查標準品稀釋過程是不是準確，還要確定有沒有冰上操作。要是顯色之后空白孔吸光度偏高，這表明洗板不充足，或者酶標試劑被污染，此時需要更換洗滌液，并且增加浸泡時間。要是樣本檢測值超出標準品范圍，建議通過預(yù)實驗來確定稀釋倍數(shù)，從而避免鉤狀效應(yīng)引發(fā)假陰性。
通常來講，批內(nèi)變異系數(shù)要是超過百分之十，那就和加樣誤差或者洗板不均存在關(guān)聯(lián)，此時需要重新去練習(xí)移液技巧并且對洗板機進行校準。板條邊緣孔出現(xiàn)因蒸發(fā)而導(dǎo)致的邊緣效應(yīng)，這種情況能夠借助在其周圍空孔添加等體積緩沖液的方式來加以緩解。要是碰到持續(xù)沒辦法解決掉的異常情形，那就得及時去聯(lián)系廠商的技術(shù)支撐，還要提供原始數(shù)據(jù)以此來幫助他們判斷問題究竟出自何處標點符號。
