生命科學(xué)基礎(chǔ)研究里，腫瘤細(xì)胞株是體外模型工具中極為重要的，它能夠模擬體內(nèi)細(xì)胞的生長特性以及遺傳背景。掌握其基本特性，還有培養(yǎng)要點以及常見問題處理方法，對于保證實驗數(shù)據(jù)的可重復(fù)性有著重要意義。本文從實際應(yīng)用的角度出發(fā)，梳理了幾項關(guān)鍵考量。
腫瘤細(xì)胞株如何選擇
選取適宜的細(xì)胞株之際，得優(yōu)先留意其種屬的來源，以及組織類的型并且關(guān)鍵基因的突變狀態(tài)。各異腫瘤來源的細(xì)胞系，針對藥物抑或環(huán)境干預(yù)的響應(yīng)存有顯著差別，像肺癌來源的A549 和肝癌來源的HepG2 在代謝酶活性方面就全然不同。查找權(quán)威細(xì)胞庫的鑒定報告，查證短串聯(lián)重復(fù)序列也就是STR 圖譜是否跟原始數(shù)據(jù)相匹配，這有助于規(guī)避交叉污染。
細(xì)胞株的生長特性，這是另一個容易被忽略的因素，它涵蓋貼壁依賴性、倍增時間以及血清需求。情形是，有些細(xì)胞株于低密度狀況下生長遲緩，還需添加特定生長因子或者飼養(yǎng)層細(xì)胞。建議購買兩株以上細(xì)胞系，這些細(xì)胞系具備相似背景，然而卻有著不同突變特征，以此利于后續(xù)交叉驗證實驗結(jié)果。
腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)條件優(yōu)化
基礎(chǔ)培養(yǎng)基的挑選直接對細(xì)胞狀態(tài)產(chǎn)生影響，常用體系涵蓋DMEM、RPMI - 1640以及MEM等，不同細(xì)胞株對于葡萄糖濃度、丙酮酸鈉還有HEPES緩沖體系的耐受能力不一樣，初次復(fù)蘇的時候建議依據(jù)供應(yīng)商所提供的配方嚴(yán)格去配制，血清的質(zhì)量在批次之間存在差別，新批次需要提前開展生長曲線測試，確認(rèn)對細(xì)胞增殖沒有抑制作用。
針對培養(yǎng)環(huán)境而言，溫濕度的把控、控制同樣是十分關(guān)鍵的，多數(shù)情況下的細(xì)胞株，在37攝氏度、5%二氧化碳這樣的條件之下，進(jìn)而生長態(tài)勢良好，不過部分源自原代的那些細(xì)胞系情況存在不一樣，需要借助低氧培養(yǎng)箱，以此來模擬體內(nèi)的微環(huán)境，要定期運用溫度校準(zhǔn)儀以及二氧化碳檢測儀，去監(jiān)測設(shè)備的參數(shù)，防止因設(shè)備出現(xiàn)漂移，致使細(xì)胞形態(tài)產(chǎn)生不可逆改變，切記！
腫瘤細(xì)胞株傳代注意事項
細(xì)胞融合度達(dá)到80%至90%的時候，將傳代時機把握于此是比較恰當(dāng)?shù)?，要是過早進(jìn)行傳代，總產(chǎn)量就會降低，要是過晚傳代，細(xì)胞會接觸抑制，或者過度堆積引發(fā)分化，甚至導(dǎo)致凋亡。在消化過程里，所使用的胰蛋白酶濃度以及操作時間，要依據(jù)細(xì)胞類型精確控制，一般建議在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓但尚未脫落時，馬上終止消化。
細(xì)胞活率會受離心速度以及重懸操作的影響，常規(guī)是采用200至300g的離心速度進(jìn)行3至5分鐘的離心操作，倘若轉(zhuǎn)速過高就容易對細(xì)胞膜造成損傷。重懸的時候要使用預(yù)熱過的完全培養(yǎng)基，并且采取輕柔吹打這種方式，以此來避免產(chǎn)生過多的氣泡。每進(jìn)行十次左右的傳代操作，就應(yīng)當(dāng)重新凍存一批原始種子細(xì)胞，目的是防止因長時間培養(yǎng)而帶來的遺傳漂變。
腫瘤細(xì)胞株污染識別與處理
肉眼可見，細(xì)菌污染致使培養(yǎng)基迅速變黃且渾濁，于顯微鏡下觀察，能看到細(xì)小顆粒在快速運動；真菌污染，會出現(xiàn)絲狀或球狀菌落，其培養(yǎng)基顏色變化較為緩慢。支原體污染極為隱蔽，細(xì)胞形態(tài)和生長速度或許并無明顯改變，不過，轉(zhuǎn)染效率或代謝數(shù)據(jù)會呈現(xiàn)異常波動。每月運用支原體檢測試劑盒對培養(yǎng)上清進(jìn)行抽檢一次，這是比較穩(wěn)妥的做法。
一旦確定存在污染情況，那些未被污染的細(xì)胞，應(yīng)當(dāng)馬上轉(zhuǎn)移至備用的培養(yǎng)箱，還要更換全新的耗材以及試劑；對于已經(jīng)被污染的細(xì)胞來講，原則上是建議將其丟棄，并且要對孵育箱進(jìn)行徹底清潔。要是細(xì)胞資源很珍貴而無法丟棄掉，那么可以try使用商用清除試劑來進(jìn)行聯(lián)合處理，不過在處理之后，依舊需要經(jīng)過多次驗證，看看是否已經(jīng)徹底清除干凈。定期采用紫外照射以及過氧化氫熏蒸的方式來凈化培養(yǎng)間的環(huán)境，這樣能夠有效地降低交叉污染的風(fēng)險。
