我結識了一位朋友，這位朋友在生物技術公司從事研發(fā)工作，他姓陳，大家都稱其為老陳，老陳今年32歲，進入這一行已經(jīng)將近十年時間了。
他身處的實驗室，著重展開細胞生物學方面的基礎研究工作，平常與各類細胞頻繁打交道，這乃是極為平常之事。
上一周，我們一塊兒用餐，談及了他在緊挨著的大半年期間所從事的一項處于關鍵地位的工作，那就是原始代細胞的分離以及培養(yǎng)工作。
他發(fā)出一口嘆息，說道，以往認為著手去養(yǎng)傳代細胞，那不過是一項依靠體力的事情，直至開啟了原代細胞的相關操作，這才曉得究竟什么才被稱作是真正具備技術含量的工作。
有個新項目，是老陳的公司去年接到的，此項目要從動物組織里分離出特定種類的原代細胞，分離出這些細胞是為了構建體外模型。
這起始片刻他滿是信心，究其緣故乃是于實驗室里已然培養(yǎng)了長達七八年之久的細胞，諸如那293細胞、HeLa細胞，就算閉著眼睛都能夠進行傳代操作。
可真正上手后，第一個月就給了他當頭一棒。
2025年9月中旬，他依照經(jīng)典文獻之中的方法，于大鼠肝臟那里分離原代肝細胞。
進行灌注操作，開展消化工作，實施過濾流程，進行離心步驟，每一個步驟在操作時都謹慎小心，萬分留意，然而，在結果方面，當完成鋪板操作之后，到了第二天進行查看時發(fā)現(xiàn)，細胞貼壁的比率竟然達不到三成，并且細胞的形態(tài)呈現(xiàn)出皺縮的狀況，完全不存在典型的上皮樣外觀。
他當時以為是操作手法問題，又重復了兩次，結果一次比一次差。
那段時間，老陳每日加班至晚上十點多，并且周末都不敢休息，結果整個人瘦了一圈。
后來他靜下心來，開始重新梳理原代細胞分離的每一個環(huán)節(jié)。
他發(fā)覺，問題或許并非存在于操作步驟之中，而是存在于組織來源自身的個體差異這件事情上。
實驗動物存在不同批次，其年齡不一樣，性別也有差別，健康狀況亦不相同，由此分離出來的細胞活力差異達到極大程度。
他在2025年10月，專門花費了兩周功夫，針對不同周齡大鼠的肝細胞分離效果，進行了對比。
有據(jù)表明，處于6至8周齡階段的雄性大鼠，其細胞活率以及貼壁率呈現(xiàn)出最為穩(wěn)定的狀態(tài)，一旦超過12周，或者選用雌性個體，那么細胞產(chǎn)量就會徑直下降40%以上。
這個發(fā)現(xiàn)，使得他察覺到，進行原代細胞操作時，不可以依照文獻原樣照搬，而必然要依據(jù)自身具體的實驗體系，去構建一套質(zhì)量控制標準。
解決了組織來源問題，新的麻煩又來了。
原代細胞污染了怎么辦
11月初的時候，老陳分離的原代細胞分為連續(xù)的兩批，在培養(yǎng)到第三天這個時間點，都出現(xiàn)了細菌污染的情況。
培養(yǎng)基變渾濁，鏡下能看到大量游動的桿菌。
他對所有試劑進行了排查，他對所有耗材也進行了排查，甚至他把超凈工作臺徹徹底底地消毒了一回，然而污染還是出現(xiàn)了。
后來他用排除法，把問題鎖定在組織運輸環(huán)節(jié)。
，你知道嗎，動物房所處之地乃是另有一個園區(qū)，你看，每每去把組織取出來之后，緊接著就需要借助車輛來進行運輸，從而回到實驗室，而這一路上所需的時間大概是二十分鐘。
這二十分鐘期間，組織處于并非完全無菌的環(huán)境里，其表面的菌群極易向著內(nèi)部遷移。
老陳采取的解決辦法是，于運輸液里添加高倍濃度的雙抗，并且將運輸瓶密封起來后放置在冰盒之中進行低溫轉運。
同一時間，他于實驗室之內(nèi)增添了一項步驟，組織抵達之后，先是借助含有碘伏的緩沖液反復漂洗三次，接著才轉入含有雙抗的培養(yǎng)基里浸泡十分鐘。
從那以后，污染率從原來的30%降到了5%以下。
但老陳知道，原代細胞的挑戰(zhàn)遠不止這些。
原代細胞傳代后不長
2025年12月，他嘗試將分離出的原代細胞進行第一次傳代。
按照常規(guī)做法，用胰酶消化后按1:2的比例接種。
結果等了兩天，細胞不僅沒有增殖，反而大部分漂浮死亡。
查閱了無數(shù)資料的老陳察覺到有這樣一種情況，許多種類的原代細胞，其自身具備的分裂能力是本就相當受限的，要是強行進行傳代操作，便會使得細胞老化的速度加快。
他對策略做了調(diào)整，針對這類細胞，不開展傳代擴增，而是分離后徑直用于實驗，又或者運用低密度培養(yǎng)加細胞因子的方式來維系活性。
同時，他對不同消化酶的組合展開了測試，最終，他發(fā)現(xiàn)，若使用溫和的Accutase去替代胰酶，那么細胞活率能夠從65%提升到85%以上。
今歲1月時，老陳所涉之項目步入穩(wěn)定階段，他于每日之際，皆可分離出契合要求之原代細胞，其活率穩(wěn)定處于90%以上。
在我們吃飯期間，他發(fā)出感慨，說道：“開展原代細胞相關工作同炒菜毫無二致，其中火候、配方以及原料這諸多方面，只要有任何一樣出現(xiàn)差錯，那都是絕對行不通的?！薄?/p>
他講了一番給我留下極為深刻印象的話語，那便是：“別覺得依照說明書去做便能夠達成成功，每一處實驗室的水質(zhì)存在差異，培養(yǎng)箱的環(huán)境不盡相同，操作手法也各有區(qū)別，而這些變量唯有自己逐步去摸索?！?。
那老陳呢，目前是把他曾經(jīng)踩過的那些坑，給整理成了內(nèi)部操作手冊，而新來的同事呢，依照著去做，基本上兩周的時間就能夠上手了。
若你同樣在進行原代細胞相關操作，不妨尋覓一段靜謐的時光，將自身的每一項操作流程記錄下來，與成功的批次展開一番對比。
很多時候，問題的答案就藏在那些被你忽視的細節(jié)里。
這篇文章寫出來，希望老陳的經(jīng)歷能讓你少走一些彎路。
倘若你感覺所涉內(nèi)容具備用處，歡迎將其收納貯存起來，以作緩緩觀看之用，同時也歡迎把它傳遞轉發(fā)給從事細胞實驗的同行友人。
