我認(rèn)識(shí)一個(gè)朋友，叫老周，在一家生物技術(shù)公司做研發(fā)負(fù)責(zé)人。
有一個(gè)團(tuán)隊(duì)，團(tuán)隊(duì)中的六個(gè)人歸他管理，這個(gè)團(tuán)隊(duì)專(zhuān)門(mén)做與細(xì)胞模型構(gòu)建相關(guān)的工作，也專(zhuān)門(mén)做和藥物篩選相關(guān)的工作。
老周從事這一行業(yè)將近十年時(shí)間，其技術(shù)功底十分扎實(shí)，在行業(yè)圈子內(nèi)部也算是有一定的名氣，然而就在去年的時(shí)候，他險(xiǎn)些在一個(gè)表面看上去毫不起眼的環(huán)節(jié)上面出現(xiàn)問(wèn)題——也就是科研細(xì)胞庫(kù)的挑選方面。
要是你同樣在進(jìn)行與細(xì)胞有關(guān)的實(shí)驗(yàn)，或者正著手打造自身的細(xì)胞平臺(tái)，那么這篇文章是值得你將其讀完的。
老周經(jīng)歷了三年時(shí)間，期間有起有伏，最終換來(lái)了一段完整經(jīng)歷，這段經(jīng)歷是從對(duì)科研細(xì)胞庫(kù)信任，到產(chǎn)生懷疑，再到徹底弄明白。
這里面有教訓(xùn)，也有方法，我會(huì)原原本本講給你聽(tīng)。
細(xì)胞污染反復(fù)出現(xiàn)，他差點(diǎn)懷疑自己操作有問(wèn)題
2024年春天，老周的團(tuán)隊(duì)接到一個(gè)新項(xiàng)目的細(xì)胞培養(yǎng)任務(wù)。
他們從一家科研細(xì)胞庫(kù)訂購(gòu)數(shù)目為三株的細(xì)胞，該細(xì)胞庫(kù)是他們經(jīng)常合作的，所訂購(gòu)的三株細(xì)胞分別是HEK293、HepG2以及A549。
按照標(biāo)準(zhǔn)流程，到達(dá)的細(xì)胞，首先要做形態(tài)觀察，之后要開(kāi)展支原體檢測(cè)，還要進(jìn)行短串聯(lián)重復(fù)序列也就是STR鑒定。
細(xì)胞形態(tài)正常的前兩株，支原體呈陰性，于是老周吩咐手下直接著手展開(kāi)擴(kuò)增培養(yǎng)。
問(wèn)題出在A549上。
傳代至第二代之際，培養(yǎng)液出現(xiàn)了變得渾濁的情況，于顯微鏡之下，可以看到呈現(xiàn)為細(xì)小顆粒狀的物質(zhì)。
一開(kāi)始，老周的反應(yīng)是操作存在污染情況，隨后，他親自去監(jiān)督，重新復(fù)蘇了一支處于凍存狀態(tài)的管子，整個(gè)過(guò)程，都是在生物安全柜里，進(jìn)行嚴(yán)格的操作。
三天后，同樣的渾濁再次出現(xiàn)。
他更換了一批培養(yǎng)基，還更換了一批血清，甚至將培養(yǎng)箱徹徹底底地進(jìn)行了一次消毒，然而出現(xiàn)的結(jié)果卻是第三次依舊發(fā)生了污染。
老周當(dāng)時(shí)很郁悶。
他身為這個(gè)級(jí)別的技術(shù)人員，其操作時(shí)出現(xiàn)污染的概率是極低極低的，然而，連續(xù)三次遭遇失敗這種情況，致使他不得不對(duì)自身的水平產(chǎn)生懷疑了。
團(tuán)隊(duì)里有年輕技術(shù)員小聲嘀咕，說(shuō)會(huì)不會(huì)是細(xì)胞本身帶菌。
那家科研細(xì)胞庫(kù)，老周用了兩年，從來(lái)沒(méi)出過(guò)問(wèn)題，所以老周沒(méi)當(dāng)回事。
他把那遭受污染的培養(yǎng)液送去進(jìn)行細(xì)菌真菌鑒定，一直到鑒定結(jié)果出來(lái)的時(shí)候，他整個(gè)人愣住了，因?yàn)殍b定結(jié)果顯示是藤黃微球菌。
這種菌于平常環(huán)境里頗為常見(jiàn)，然而，最為顯著的疑點(diǎn)在于，它對(duì)用于抗拒生命特定部位感染的藥物不具備敏感反應(yīng)。
用于老周的培養(yǎng)基之中添加了雙抗（青霉素 - 鏈霉素）情形下，正常狀況通常能夠抑制大部分常見(jiàn)細(xì)菌。
藤黃微球菌具備對(duì)鏈霉素天然耐藥的特性，于是它能夠直接于含有抗生素的培養(yǎng)基當(dāng)中進(jìn)行繁殖。
老周立刻聯(lián)系了那家科研細(xì)胞庫(kù)。
所言之人態(tài)度著實(shí)不錯(cuò)，表明能夠補(bǔ)發(fā)來(lái)一棵全新的A549，不過(guò)呢，得讓老周自行支付運(yùn)輸所需的費(fèi)用。
老周沒(méi)多想就同意了，畢竟合作多年。
補(bǔ)發(fā)的細(xì)胞到貨后，老周留了個(gè)心眼，先做無(wú)菌檢測(cè)再上培養(yǎng)。
檢測(cè)得出的結(jié)果，使得他猛地倒吸了一口涼氣，支原體呈現(xiàn)陽(yáng)性，不止如此，藥敏試驗(yàn)顯示出，對(duì)環(huán)丙沙星存在耐藥情況。
這下老周徹底坐不住了。
他著手去翻查往昔從這家?guī)焖嗁?gòu)的全部細(xì)胞記錄，發(fā)覺(jué)在過(guò)去的一年當(dāng)中，存在三株細(xì)胞，它們于不同程度上呈現(xiàn)出過(guò)生長(zhǎng)遲緩或者傳代之后狀態(tài)變差的狀況。
只是當(dāng)時(shí)都被歸結(jié)為操作問(wèn)題或者試劑批次差異，沒(méi)有深究。
老周跟我講了個(gè)事兒，就在那個(gè)時(shí)候，他才忽然發(fā)覺(jué)，要是科研細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)控體系處于不透明的狀態(tài)，其用戶(hù)根本就沒(méi)辦法在事先進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)判。
科研細(xì)胞庫(kù)的認(rèn)證資質(zhì)到底怎么看
兩個(gè)星期啊，老周付諸了時(shí)間，將國(guó)內(nèi)幾家占據(jù)主流地位的科研細(xì)胞庫(kù)的資料都徹徹底底地翻了個(gè)遍。
他先前僅僅在意細(xì)胞株是否正確、價(jià)格是否低廉，從來(lái)都不瞧背后的認(rèn)證體系。
經(jīng)過(guò)這次教訓(xùn)，他總結(jié)出幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。
細(xì)胞庫(kù)有沒(méi)有STR鑒定報(bào)告
STR鑒定是驗(yàn)證細(xì)胞身份的金標(biāo)準(zhǔn)。
老周察覺(jué)到，那家出現(xiàn)問(wèn)題的細(xì)胞庫(kù)，盡管給出了COA（分析證書(shū)），然而其上的STR數(shù)據(jù)，是在兩年之前所做的。
而且報(bào)告里只寫(xiě)了“符合預(yù)期”，沒(méi)有給出具體的等位基因圖譜。
嚴(yán)格意義上的規(guī)范舉措是，針對(duì)每一批次的細(xì)胞，在復(fù)蘇凍存之前以及之后，均需開(kāi)展STR鑒定，而且要附上完整的圖譜，以便用戶(hù)能夠自行進(jìn)行比對(duì)。
老周隨即更換至另外一家科研細(xì)胞庫(kù)，自此庫(kù)提交所提供的COA可見(jiàn)其中不僅含有STR圖譜，并且還標(biāo)記出了與ATCC數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)結(jié)果，只有在匹配度超過(guò)95%的情況下才予以放行。
有些細(xì)胞于傳代進(jìn)程里會(huì)出現(xiàn)交叉污染或者基因漂變情況，所以這個(gè)細(xì)節(jié)相當(dāng)關(guān)鍵，若不作批次間比對(duì)，那就如同埋下隱患。
支原體檢測(cè)是不是每批次都做
支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中最隱蔽的問(wèn)題。
它不會(huì)致使培養(yǎng)液變得渾濁，也不會(huì)對(duì)pH值予以改變，然而會(huì)消耗營(yíng)養(yǎng)，會(huì)抑制細(xì)胞代謝，會(huì)改變基因表達(dá)。
諸多研究人員開(kāi)展了為期半年的實(shí)驗(yàn)，卻發(fā)現(xiàn)所獲數(shù)據(jù)呈現(xiàn)不穩(wěn)定狀態(tài)，而他們根本無(wú)法想到，這竟是細(xì)胞存在的支原體所引發(fā)的問(wèn)題。
老周問(wèn)那家出問(wèn)題的庫(kù)，補(bǔ)發(fā)的細(xì)胞支原體檢測(cè)是多久之前做的。
對(duì)方客服支支吾吾說(shuō)大概是三個(gè)月前，用的是PCR法。
在三個(gè)月的這段時(shí)間當(dāng)中，細(xì)胞是有可能經(jīng)歷多次傳代的，而支原體感染的風(fēng)險(xiǎn)就會(huì)明顯顯著地增加。
規(guī)范的科研細(xì)胞庫(kù)應(yīng)該對(duì)每一支凍存管做留樣復(fù)檢，而不是抽檢。
每次老周入庫(kù)新細(xì)胞時(shí)，頭一件事便是，使用自身的支原體檢測(cè)試劑盒去重新測(cè)量一回，絕對(duì)不會(huì)依靠供應(yīng)商所提供的報(bào)告。
細(xì)胞庫(kù)的凍存和復(fù)蘇記錄是否可追溯
2024年8月，老周去參加了一個(gè)細(xì)胞生物學(xué)會(huì)議。
開(kāi)會(huì)期間，有一名來(lái)自中科院細(xì)胞庫(kù)的專(zhuān)家進(jìn)行報(bào)告，其指出，合格的科研細(xì)胞庫(kù)，一定要擁有完整的凍存歷史記錄，以及復(fù)蘇歷史記錄。
涵蓋凍存的日期，包含凍存液的配方，涉及凍存時(shí)候的細(xì)胞代數(shù)，有復(fù)蘇的日期，還有復(fù)蘇過(guò)后的存活率等等。
這些數(shù)據(jù)，能夠?qū)τ脩?hù)起到協(xié)助作用，用以判斷細(xì)胞，在運(yùn)輸期間，以及復(fù)蘇過(guò)程當(dāng)中，是不是經(jīng)歷過(guò)溫度波動(dòng)。
老周聽(tīng)完報(bào)告回到原處，馬上要求參與合作的所有科研細(xì)胞庫(kù)去準(zhǔn)備提供那些記錄。
結(jié)果有兩家直接說(shuō)“不方便提供”，老周果斷終止了合作。
隨后，他跟我講，實(shí)際上，具備真正扎實(shí)底氣的庫(kù)，并不會(huì)因你的調(diào)查而產(chǎn)生被冒犯之感，相反，會(huì)欣然接納你去進(jìn)行核查，原因在于，這本身就是一種對(duì)自身質(zhì)量控制充滿(mǎn)信心的呈現(xiàn)。
一次意外的細(xì)胞“叛變”讓他徹底重建了細(xì)胞庫(kù)管理體系
老周以為換了一家靠譜的科研細(xì)胞庫(kù)就萬(wàn)事大吉了。
然而，在2024年11月份的時(shí)候，發(fā)生了一件事情，這件事情致使他關(guān)于細(xì)胞庫(kù)的管理方面，出現(xiàn)了又一次的全新認(rèn)知。
當(dāng)時(shí)他正在做一個(gè)基因敲除細(xì)胞的功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。
采用的是，一株，從新庫(kù)那兒購(gòu)置的，HCT116細(xì)胞，STR鑒定不存在問(wèn)題，支原體呈現(xiàn)陰性，凍存記錄是完整的。
三次進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果一次比一次糟糕，關(guān)鍵性的表型數(shù)據(jù)與前期預(yù)實(shí)驗(yàn)的規(guī)律全然對(duì)不上。
老周百思不得其解，甚至懷疑是CRISPR編輯出了脫靶。
他耗費(fèi)了一整個(gè)星期的時(shí)間，再次進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)靶向點(diǎn)編輯那是正確無(wú)誤的，然而細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線以及藥物敏感性，跟文獻(xiàn)所報(bào)道的HCT116呢，存在著顯著的不同之處。
老周把細(xì)胞送去做全外顯子測(cè)序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這株細(xì)胞，STR匹配度達(dá)到98%，然而，在TP53基因上，有一個(gè)他之前沒(méi)注意到的突變。
原先，這株細(xì)胞于過(guò)往的傳代進(jìn)程里自然積攢了一個(gè)新的突變，此突變對(duì)p53信號(hào)通路產(chǎn)生了影響，因而致使藥物表型發(fā)生了改變。
這次經(jīng)歷，使得老周領(lǐng)悟出了一個(gè)道理，科研細(xì)胞庫(kù)所提供的細(xì)胞，就算是身份無(wú)誤，并且不存在污染的情況，那也無(wú)法確保它于功能方面跟原始細(xì)胞全然相同。
細(xì)胞在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)中會(huì)發(fā)生遺傳漂變，這是客觀規(guī)律。
細(xì)胞被用戶(hù)拿到之后，就一定要依據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系展開(kāi)重新的功能驗(yàn)證工作，絕對(duì)不可以盲目地去相信產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)當(dāng)中所呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)。
從2025年1月起，老周在公司內(nèi)部推行了一套管理體系，這套體系是關(guān)于細(xì)胞庫(kù)的，是新的。
他把這套體系分成三個(gè)層級(jí)：
第一層：入庫(kù)前的嚴(yán)格篩選
所有自外部科研細(xì)胞庫(kù)購(gòu)入的細(xì)胞，到貨之后，都得完成三項(xiàng)檢測(cè)，分別是：STR鑒定，支原體檢測(cè)，細(xì)菌真菌檢測(cè)。
三項(xiàng)全過(guò)才能進(jìn)入液氮罐的“待觀察區(qū)”。
放入待觀察區(qū)兩周，存放期間進(jìn)行兩次傳代，每次傳代之后開(kāi)展一次形態(tài)記錄以及進(jìn)行一次生長(zhǎng)曲線測(cè)定。
任何一項(xiàng)指標(biāo)偏離歷史范圍，整批次廢棄。
第二層：使用時(shí)的工作種子庫(kù)
老周作出規(guī)定，每一株細(xì)胞，在被確認(rèn)合格以后，都要一次性進(jìn)行擴(kuò)增，使其達(dá)到足夠數(shù)量的凍存管，以此作為“工作種子庫(kù)”。
往后所有參與實(shí)驗(yàn)的物品，皆自工作種子庫(kù)當(dāng)中去取用，每隔三個(gè)月復(fù)蘇一支嶄新的用于實(shí)驗(yàn)的物品，一旦使用完畢便隨之直接丟棄。
采取如此做法所具備的益處在于，處于同一批次工作種子庫(kù)當(dāng)中的細(xì)胞狀態(tài)呈現(xiàn)出高度的一致性，進(jìn)而規(guī)避了因不同批次細(xì)胞而引發(fā)的實(shí)驗(yàn)變異性。
老周進(jìn)行舉例表明，以往他們所開(kāi)展的一個(gè)趨化實(shí)驗(yàn)，采用了同一株細(xì)胞，不過(guò)是在不同時(shí)間進(jìn)行復(fù)蘇的，最終得出的結(jié)果是，IC50值相差了將近三倍。
把細(xì)胞批次統(tǒng)一后，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性從60%提高到了90%以上。
第三層：定期抽檢和留樣回溯
每個(gè)季度，老周會(huì)從液氮罐里隨機(jī)抽取三支凍存管做復(fù)檢。
復(fù)檢內(nèi)容包括活力檢測(cè)、STR驗(yàn)證和支原體篩查。
同時(shí)，所有用過(guò)的工作種子庫(kù)細(xì)胞都要留樣保存，至少保留五年。
倘若后續(xù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常狀況，如此一來(lái)，能夠回溯至當(dāng)時(shí)所使用那一批次，借此進(jìn)行對(duì)比分析。
老周講到，此套體系施行之后的半年期間，其所帶領(lǐng)的團(tuán)隊(duì)，在實(shí)驗(yàn)重復(fù)方面的成功率，由之前的百分之六十五，提升到了百分之八十八。
節(jié)省下來(lái)的時(shí)間和試劑成本，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了前期檢測(cè)投入的費(fèi)用。
科研細(xì)胞庫(kù)行業(yè)的不透明，逼著用戶(hù)自己變專(zhuān)家
老周跟我聊天時(shí)感嘆，現(xiàn)在市面上的科研細(xì)胞庫(kù)良莠不齊。
擁有一些號(hào)稱(chēng)具備上萬(wàn)株細(xì)胞數(shù)量的庫(kù)，然而當(dāng)仔細(xì)查看時(shí)，其中大部分是從別的庫(kù)購(gòu)回后自行進(jìn)行擴(kuò)增的，至于在這中間究竟傳了多少代，根本無(wú)法說(shuō)清楚。
有一些庫(kù)會(huì)給出“代凍存服務(wù)”，協(xié)助客戶(hù)將細(xì)胞發(fā)送過(guò)去進(jìn)行凍存，然而，凍存條件是不是達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，是不是混入了別的細(xì)胞，全然是一個(gè)黑箱。
2025年3月份，老周為一個(gè)剛開(kāi)始創(chuàng)業(yè)起步的人在科研細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)商方面進(jìn)行把關(guān)。
朋友打算從一家報(bào)價(jià)很低的新庫(kù)買(mǎi)細(xì)胞，老周攔住了。
他讓朋友先去查這家?guī)煸谛袠I(yè)里的口碑和用戶(hù)反饋。
友人進(jìn)行了一番查找，發(fā)覺(jué)在網(wǎng)絡(luò)上基本上尋覓不到有關(guān)這家?guī)熘械牡谌浇o出的評(píng)價(jià)，僅僅存在他們自個(gè)兒的宣傳頁(yè)面呢。
老周再次給出建議，讓朋友去要求對(duì)方，提供最近三個(gè)月的出庫(kù)記錄，還要提供與之對(duì)應(yīng)的質(zhì)檢報(bào)告。
對(duì)方以“商業(yè)機(jī)密”為由拒絕。
老周徑直告知朋友，寧愿去花費(fèi)貴出一倍的價(jià)錢(qián)，從那被眾人認(rèn)可的大庫(kù)里購(gòu)買(mǎi)，也絕不去節(jié)省這一點(diǎn)兒預(yù)算。
最后，朋友聽(tīng)取了老周給出的建議，挑選了國(guó)內(nèi)的一家有著ISO認(rèn)證的老牌科研細(xì)胞庫(kù)。
盡管價(jià)錢(qián)偏高些許，然而每一棵細(xì)胞都額外附有完備的STR圖譜以及支原體檢測(cè)報(bào)告。
那批細(xì)胞，被使用了一年多，期間從來(lái)沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)污染情況，也沒(méi)有發(fā)生過(guò)身份錯(cuò)誤的狀況，后來(lái)朋友跟老周說(shuō)了這些。
反倒倒是他的另外一個(gè)同行，貪圖便宜尋覓了一家小型庫(kù)房去購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞，然而最終的結(jié)果卻是，三株細(xì)胞當(dāng)中有兩株的STR鑒定無(wú)法對(duì)上，白白耗費(fèi)了三個(gè)月的時(shí)間，還有價(jià)值幾十萬(wàn)的試劑費(fèi)用。
此刻老周遵循的原則是，將科研細(xì)胞庫(kù)視作實(shí)驗(yàn)耗材予以管理，并非當(dāng)作科研數(shù)據(jù)。
他說(shuō)，很多人覺(jué)得買(mǎi)細(xì)胞跟買(mǎi)抗體一樣，拿到手就能用。
但細(xì)胞是活的，它有自己的脾氣和變數(shù)。
你為其付出的購(gòu)買(mǎi)金額是一種考量情況 ，你針對(duì)它投入的驗(yàn)證精力是另外一種不同的情形 ，你圍繞它開(kāi)展的管理精力又是一種別樣的狀況。
后者往往比前者更重要。
如果你也在用科研細(xì)胞庫(kù)的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)，不妨問(wèn)問(wèn)自己幾個(gè)問(wèn)題：
你上次看到STR報(bào)告是什么時(shí)候？
你的細(xì)胞凍存記錄能追溯到具體的凍存日期和代數(shù)嗎？
當(dāng)前于你手頭作為使用的這一批次的工作細(xì)胞，在來(lái)源批次方面，和半年之前你用以展開(kāi)運(yùn)作的那一批次，兩者是否屬于同一情況呢？
老周用三年時(shí)間踩完了這些坑。
他希望后來(lái)者能站在他的肩膀上，不必再摔同樣的跟頭。
搞科研這事兒，最貴的壓根兒不是那試劑以及細(xì)胞的價(jià)格，而是由于細(xì)胞出現(xiàn)了狀況致使整個(gè)實(shí)驗(yàn)得重新再來(lái)的時(shí)間耗費(fèi)成本。
要挑選出正確的科研細(xì)胞庫(kù)，還要管理好自身的細(xì)胞庫(kù)，當(dāng)這兩件事情都妥善完成了，那么你的實(shí)驗(yàn)起碼能夠減少一半的彎路。
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