去年秋天，在蘇州，于一家生物科技公司的實(shí)驗(yàn)室里，我的朋友張工，盯著酶標(biāo)儀上跳動(dòng)的數(shù)字，其額頭上的汗珠，比窗外太湖的水紋還要密集。他剛剛負(fù)責(zé)一個(gè)淀粉酶活性檢測(cè)項(xiàng)目，使用了三種不同品牌的試劑盒，然而結(jié)果硬是對(duì)不上。這件事，讓我意識(shí)到，選對(duì)酶活性檢測(cè)試劑盒，有時(shí)候比做實(shí)驗(yàn)本身還要考驗(yàn)人。
酶活性檢測(cè)試劑盒怎么選
張工本科就讀的專業(yè)是生物工程，畢業(yè)后在第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)工作了五年，去年換工作去了一家從事發(fā)酵食品添加劑生產(chǎn)的工廠，這家工廠主要生產(chǎn)的產(chǎn)品是麥芽糖漿，在品控環(huán)節(jié)，糖化酶活性檢測(cè)操作較為頻繁，剛到工廠時(shí)，他采用的是實(shí)驗(yàn)室老一輩師傅遺留下來(lái)的老方法，自己來(lái)配制緩沖液、底物以及顯色劑，整個(gè)完整流程全部完成需要耗費(fèi)四個(gè)小時(shí)。
今年三月，公司承接?xùn)|南亞一大訂單，要求每批產(chǎn)品附上酶活性檢測(cè)報(bào)告。張工一日需測(cè)十幾個(gè)樣品，手工配試劑非但慢，且易出錯(cuò)。有批樣品還原糖檢測(cè)值忽高忽低，他經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，方發(fā)覺(jué)是顯色劑保存不當(dāng)致其失效。那批貨險(xiǎn)些延誤交期，廠長(zhǎng)于會(huì)上拍了桌子。
那段時(shí)期，張工四處尋覓解難題的辦法。四月的中旬時(shí)分，他前往上海的一場(chǎng)分析儀器展會(huì)參與 ，于展會(huì)上聽(tīng)聞同行談及商品化的酶活性檢測(cè)試劑盒。回來(lái)后與我撥通電話講道：“老哥 ，我先前認(rèn)為購(gòu)買試劑盒僅僅是掏錢換取便利 ，而后進(jìn)行核算 ，手工配制試劑所造成的樣品以及人力的浪費(fèi) ，出乎意料地更加 costly?！?。
他著手對(duì)市面上林林總總承包涵著各類酶活性的檢測(cè)試劑盒展開(kāi)研究，首先令他感到頭疼不已的問(wèn)題便是該通過(guò)怎樣的方式去進(jìn)行選擇，他向我講述，在選擇試劑盒之際，并非單單只依據(jù)價(jià)格來(lái)考量，而是必須率先明晰三個(gè)指標(biāo)，分別是線性范圍、檢測(cè)限以及精密度，他以糖化酶檢測(cè)作為實(shí)例進(jìn)行說(shuō)明，當(dāng)他自行配制試劑之時(shí)，線性范圍僅僅只能達(dá)成每毫升處于0.5至10個(gè)單位的區(qū)間，然而在購(gòu)置了某一品牌的試劑盒之后，其線性范圍拓展開(kāi)來(lái)，達(dá)到了0.1至50個(gè)單位，與此同時(shí)，精密度也得到了顯著的提升，呈上升態(tài)勢(shì)。
酶活性檢測(cè)試劑盒使用注意事項(xiàng)
張工頭一回買的是個(gè)價(jià)格低廉的盒子，其價(jià)格不到五百塊錢，卻能夠檢測(cè)96個(gè)樣本。然而，做出來(lái)的結(jié)果卻是，空白孔處的吸光度對(duì)比樣品孔而言更高，他再三進(jìn)行清洗酶標(biāo)板，可都沒(méi)有起到作用。隨后，他與廠家的技術(shù)支撐取得聯(lián)系，人家一番詢問(wèn)后，他才知曉——試劑盒所附帶的終止液是硫酸，他將其放置在常溫的柜子里，使用了三個(gè)月都未曾更換。
五月端午之際，我前往他的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行參觀，彼時(shí)他正蹲于地面整理試劑盒 ，他指向紙盒之上的標(biāo)簽并對(duì)我說(shuō)：“你瞧這個(gè)盒子 ，到貨之時(shí)是以干冰運(yùn)輸?shù)?，其中包藏著好幾管酶粉以及底物粉。我先前未曾?xì)致查看說(shuō)明書 ，徑直取用溶液型的底物來(lái)進(jìn)行配制 ，結(jié)果活性全然喪失了?！?。
他后來(lái)有了這樣的習(xí)慣，每盒新的酶活性檢測(cè)試劑盒一到貨，當(dāng)務(wù)之急便是依照說(shuō)明書，將不同組分的保存條件標(biāo)于盒蓋上，像那顯色劑需負(fù)二十度避光存放，緩沖液能在四度留存兩周，標(biāo)準(zhǔn)品絕對(duì)禁止反復(fù)凍融，他還制作了一張表格貼于冰箱門上，詳記下哪天拆封的，剩余還有幾次用量。
酶活性檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析技巧
六月份時(shí)，張工給我打電話，其聲音極為興奮。他講他們工廠新研發(fā)了一款復(fù)合糖化酶制劑，自己運(yùn)用手工法測(cè)活性為每毫升220個(gè)單位，然而客戶用自身方法測(cè)出來(lái)僅有185個(gè)單位，雙方險(xiǎn)些鬧翻。
隨后，他運(yùn)用新買的那個(gè)酶活性檢測(cè)試劑盒再次進(jìn)行測(cè)量，依照說(shuō)明書的要求繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線，所測(cè)量得到的值竟然是每毫升205個(gè)單位。緊接著，他又將同一樣品郵寄到了第三方實(shí)驗(yàn)室，人家借助同樣的試劑盒測(cè)量出的結(jié)果是208個(gè)單位。如此這般，這下他心里算是有底了。
用試劑盒分析結(jié)果之中，有相應(yīng)門道被他跟我總結(jié)出來(lái)：其一，標(biāo)準(zhǔn)曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品，得是試劑盒自帶的，或者是同批次的，而不能采用自己之前所配的。其二，每個(gè)樣品最好去做雙復(fù)孔，甚至是三復(fù)孔，然后取平均值。其三，樣本空白以及試劑空白需要扣除。他之前結(jié)果偏高，原因就在于沒(méi)扣樣本空白呀。
他最為得意的是，他察覺(jué)到了試劑盒說(shuō)明書上一個(gè)公式存在小問(wèn)題。在做脂肪酶活性檢測(cè)之際，說(shuō)明書所給出的摩爾消光系數(shù)是針對(duì)特定波長(zhǎng)的。然而，他實(shí)驗(yàn)室的酶標(biāo)儀波長(zhǎng)存在正負(fù)兩納米的偏差。隨后，他自行重新校準(zhǔn)，使得檢測(cè)結(jié)果與參考實(shí)驗(yàn)室的偏差從百分之八降低到了百分之二以內(nèi)。
酶活性檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題解決
現(xiàn)在張工所在工位上放置著一個(gè)筆記本，此筆記本是專門用于記錄在酶活性檢測(cè)試劑盒使用期間所碰到的故障的，我翻閱了其中幾頁(yè)，上面滿滿當(dāng)當(dāng)寫滿了案例。
比如說(shuō)在今年的七月份，存在著這樣一次情況，他對(duì)蛋白酶活性展開(kāi)測(cè)定，所有孔呈現(xiàn)出的顏色均十分淺淡。他針對(duì)底物濃度進(jìn)行了排查，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，又對(duì)反應(yīng)時(shí)間予以排查，依舊沒(méi)有問(wèn)題，還對(duì)pH值進(jìn)行排查，同樣沒(méi)有問(wèn)題。最后他察覺(jué)到原來(lái)是試劑盒里面的酶稀釋液遭受了污染，原因是有個(gè)實(shí)習(xí)生使用完畢后沒(méi)有將蓋子蓋上，致使灰塵落入其中。隨后他采用微孔濾膜對(duì)稀釋液過(guò)濾了一回，再次進(jìn)行測(cè)定時(shí)就恢復(fù)正常了。
又有一回情況截然相反，空白孔的顏色格外深。他將酶標(biāo)板取出來(lái)沖著光亮去瞧，有一個(gè)孔的液體流溢出來(lái)了，把相鄰處的孔給污染了。自那之后他進(jìn)行加樣時(shí)都先使用排槍添加并非關(guān)鍵的組分，最后才添加顯色劑，而且每添加完一排就使用無(wú)塵紙擦拭一下槍頭。
在八月份的時(shí)候，他承接了一項(xiàng)緊急任務(wù)，這項(xiàng)任務(wù)是檢測(cè)一批進(jìn)口原料之中的植酸酶活性，客戶要求的是要在六個(gè)小時(shí)之內(nèi)出具報(bào)告，他采用常規(guī)方法做了一回，結(jié)果發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)波動(dòng)極為顯著，之后他打電話詢問(wèn)試劑盒廠家的應(yīng)用工程師，對(duì)方建議他把樣品稀釋倍數(shù)從二十倍調(diào)整為五十倍，他進(jìn)行了嘗試，結(jié)果線性變得特別好，他這才弄明白，有些原料基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)，進(jìn)行不充分的稀釋情況下會(huì)抑制酶反應(yīng)。
酶活性檢測(cè)試劑盒性價(jià)比分析
做工的張師傅在工廠這兒已經(jīng)工作快一年了，經(jīng)由他經(jīng)手去購(gòu)買的酶活性檢測(cè)試劑盒數(shù)量不少于二十種類別。他手上持有一個(gè)電子表格，這個(gè)表格統(tǒng)計(jì)了每一種盒子的單孔耗費(fèi)成本量、檢測(cè)能夠達(dá)到的通量數(shù)值、具體操作所需時(shí)光以及數(shù)據(jù)呈現(xiàn)之后所具備的穩(wěn)定程度。
他向我講說(shuō)，最便宜的不見(jiàn)得就最能節(jié)省費(fèi)用。有一款國(guó)產(chǎn)盒子，單孔成本僅僅三塊五，然而每個(gè)樣品都得做空白對(duì)照、陰性對(duì)照以及陽(yáng)性對(duì)照，再加上復(fù)孔，一個(gè)樣品實(shí)際上要占據(jù)八個(gè)孔。而另外一款價(jià)格稍貴一點(diǎn)的盒子，單孔是十二塊錢，不過(guò)所有對(duì)照全都集成在試劑盒的質(zhì)控品當(dāng)中，一個(gè)樣品只占用兩個(gè)孔。計(jì)算下來(lái)，貴的那個(gè)盒子反倒更加節(jié)省。
上個(gè)月，他整理出一份報(bào)告，交給了采購(gòu)部，建議統(tǒng)一采購(gòu)兩款酶活性檢測(cè)試劑盒，一款是用于多數(shù)常規(guī)檢測(cè)的，其性價(jià)比高，另一款是用于疑難樣品或仲裁檢測(cè)的，它的靈敏度更高。采購(gòu)經(jīng)理當(dāng)時(shí)還處于猶豫狀態(tài)，他直接拿出三組對(duì)比數(shù)據(jù)，用便宜盒子測(cè)了十次，變異系數(shù)是百分之五點(diǎn)三，用貴盒子測(cè)，變異系數(shù)是百分之一點(diǎn)八。聽(tīng)完這些，采購(gòu)經(jīng)理當(dāng)場(chǎng)就簽了字。
如今，張工于廠內(nèi)已然成為了酶活性檢測(cè)方面的專家，周邊諸多同行碰到問(wèn)題都會(huì)向他求取建議。上周，他宴請(qǐng)我吃飯，酒興正酣之際對(duì)我講：“往昔以為做檢測(cè)僅是依照步驟去操作，直至如今才領(lǐng)悟到，挑選并運(yùn)用好酶活性檢測(cè)試劑盒，整個(gè)實(shí)驗(yàn)的可靠性便能得以提升了?！彪S后，他掏出手機(jī)展示其保存的標(biāo)準(zhǔn)操作流程，從試劑盒的驗(yàn)收之處，歷經(jīng)儲(chǔ)存環(huán)節(jié)、使用過(guò)程，一直到數(shù)據(jù)分析部分，足足撰寫了二十六頁(yè)之多。
我將這些撰寫出來(lái)，并非是為了給任何一個(gè)牌子進(jìn)行廣告宣傳，而是要把張工歷經(jīng)十個(gè)月摸爬滾打所積累的經(jīng)驗(yàn)予以梳理。要是你同樣在與酶活性檢測(cè)有所關(guān)聯(lián)，期望這些切實(shí)存在的彎路以及教訓(xùn)，能夠使你少踏入幾個(gè)坑。挑選好盒子、運(yùn)用正確方法、看準(zhǔn)相關(guān)數(shù)據(jù)，你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果便不會(huì)欺騙你。
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