你可曾碰到過下述這般狀況：撫養(yǎng)了長達(dá)大半個月之久的細(xì)胞，直至來到至關(guān)重要的實驗?zāi)且蝗眨錉顟B(tài)卻糟糕透頂？所獲取的數(shù)據(jù)根本無法使用，進(jìn)而致使整個項目不得不被迫延期。
有這么一位朋友在我身旁，他于上海張江一間生物技術(shù)公司從事研發(fā)工作，專門鉆研體外模型構(gòu)建。去年下半年的時候，他們那個團(tuán)隊承接了一個全新項目，此項目要求構(gòu)建一套更與真實生理狀態(tài)相契合的細(xì)胞篩選平臺。
最初的時候，他所采用的乃是永生化細(xì)胞系，其進(jìn)行操作時較為順手，傳代的速度比較快，所呈現(xiàn)出來的數(shù)據(jù)看起來也是屬于穩(wěn)定狀態(tài)的，可是一旦到了與動物實驗展開對比的階段，卻總是無法相互匹配，公司的副總于項目復(fù)盤會議之上直接進(jìn)行了點名，說道：“我們所從事的是轉(zhuǎn)化研究工作，并非是舉辦養(yǎng)細(xì)胞大賽。”。
朋友在那段時期，壓力大得致使失眠。在2025年3月的某個周四夜晚，他拽著我，于公司樓下的沙縣小吃，邊吃東西邊唉聲嘆氣。他講自己把近期的文獻(xiàn)都翻遍了，發(fā)覺好多高水平的論文都在用原代細(xì)胞去替代傳統(tǒng)細(xì)胞系。
直接從機(jī)體組織分離出來進(jìn)行首次培養(yǎng)的細(xì)胞是原代細(xì)胞，其最大特點是保留了來源組織的諸多關(guān)鍵特性，可傳代次數(shù)多的細(xì)胞系，基因型以及表型早就發(fā)生了漂移。
朋友做出決定，要去賭上一回，向主管提出申請，采購一批商業(yè)化的小鼠原代肝細(xì)胞。在第一次收貨的那天，他嚴(yán)格依照說明書來操作，進(jìn)行復(fù)蘇，開展鋪板，實施換液。然而，在24小時之后，于顯微鏡下查看時，發(fā)現(xiàn)貼壁率竟然不到四成，死細(xì)胞漂浮得到處都是，一整個視野滿滿當(dāng)當(dāng)均是。
他心里很不甘心，于是又去訂購了數(shù)量為一批的東西。在這一回，他提前就做了相關(guān)的功課，具體是向供應(yīng)商索要了詳細(xì)的質(zhì)檢報告，以此來確認(rèn)細(xì)胞純度、活力連同支原體檢測這幾方面全部都是合格的。與此同時，他把所用的培養(yǎng)基從普通的具有高糖性質(zhì)的DMEM換成了專門進(jìn)行配制的原代細(xì)胞維持液。
再次進(jìn)行復(fù)蘇時，他特地于早上七點就抵達(dá)實驗室，將水浴鍋預(yù)熱至37度，把解凍時間精準(zhǔn)控制在90秒，將種瓶放置于培養(yǎng)箱里，每隔兩小時就去查看一番，直至第六個小時，終于瞧見大部分細(xì)胞已然伸出偽足、緩緩鋪展開來。
那天下午，他給我發(fā)了消息，消息內(nèi)容是“成了！”，且后面跟著三個感嘆號。然而，真正的挑戰(zhàn)卻是在后面。原代細(xì)胞對于消化酶是極其敏感的，要是胰酶處理稍微過了頭，那么整瓶細(xì)胞就會脫落凋亡。
他們實驗室所使用的，是百分之零點零五的胰酶 - EDTA，對于常規(guī)細(xì)胞系而言，消化兩分鐘不會出現(xiàn)問題。然而原代細(xì)胞，僅僅需要四十秒，并且一旦將胰酶倒掉，就必須立刻添加含有血清的終止液。朋友講，在那段時間，他手部的速度，練得如同電競選手一般。
還有一道難關(guān)在于，原代細(xì)胞不會增殖，或者說其增殖速度極其緩慢。傳統(tǒng)細(xì)胞系能夠?qū)崿F(xiàn)一傳三、一傳四，然而原代細(xì)胞基本上僅僅能夠應(yīng)用于鋪板之后三天以內(nèi)的實驗。這就表明，在每次進(jìn)行實驗之前，都必定要重新去訂購新鮮的細(xì)胞，其成本高昂到令財務(wù)人員眉頭緊皺。
朋友想出了個辦法，他們著手跟同行實驗室開展合作，運用組織塊貼壁法自行去分離原代細(xì)胞。在2025年5月的時候，他通過托關(guān)系聯(lián)系到了蘇州的一家動物中心，從而拿到了新鮮的SD大鼠腎皮質(zhì)。從剪碎組織環(huán)節(jié)開始起，到酶消化過程，再從過篩網(wǎng)以及密度梯度離心這些步驟，整套流程整整花費了六個小時。
他頭一回進(jìn)行分離操作，所收獲的細(xì)胞總數(shù)量僅僅有預(yù)期那般的一半。他對每一個步驟展開復(fù)盤，發(fā)覺問題是出在了酶消化所花費的時長上面。有文獻(xiàn)講消化需30分鐘，然而不同批次的組織其軟硬程度并非相同。第二次的時候，他將消化時間調(diào)整為20分鐘并且加上兩次中間吹打，細(xì)胞產(chǎn)量一下子就翻了四倍。
歷經(jīng)掌握原代細(xì)胞分離技術(shù)之時，他所參與項目的推進(jìn)速度顯著加快，以自身分離的細(xì)胞施行化合物處理，所獲取的量效關(guān)系曲線與動物實驗數(shù)據(jù)達(dá)成的吻合度高達(dá)九成，公司主管于季度會議特意贊揚了他，并且安排他為其他同事開展了一回內(nèi)部培訓(xùn)。
朋友后來歸納了幾條經(jīng)驗，我認(rèn)為對于才開始接觸原代細(xì)胞的人而言格外實用。
取得原代細(xì)胞之后，即刻著手做細(xì)胞鑒定。切勿輕易相信供應(yīng)商所提供的名稱以及批號?？尚械霓k法是運用免疫熒光來標(biāo)記能體現(xiàn)特征的蛋白，或者開展核型分析，以此來確認(rèn)細(xì)胞身份不存在差錯。
培養(yǎng)體系需嚴(yán)謹(jǐn)?shù)赜枰詢?yōu)化，普通細(xì)胞系所使用的培養(yǎng)基常常并不適配原代細(xì)胞，血清濃度、生長因子、貼壁基質(zhì)皆要逐一來進(jìn)行調(diào)試，舉例而言，肝細(xì)胞需要膠原所包被的培養(yǎng)板，內(nèi)皮細(xì)胞需要添加VEGF。
作動方式需輕柔，于吹打細(xì)胞之際選用大口徑槍頭，以此削減剪切力，在更換培養(yǎng)液之時沿著容器壁緩緩添入預(yù)先溫?zé)岬呐囵B(yǎng)基，防止徑直沖撞細(xì)胞層，友人聲言其移液槍角度已然練就肌肉記憶。
記錄下每一個變量，從組織的來源，以及動物的品系，還有分離的日期開始，一直到培養(yǎng)基的批次和培養(yǎng)箱內(nèi)二氧化碳的濃度，通通都要寫進(jìn)入那種電子的實驗記錄本之內(nèi) 一次偶然出現(xiàn)的異常數(shù)據(jù)，說不定就是重要規(guī)律的線索。
在2025年9月的時候，由朋友負(fù)責(zé)的項目，最終完成了全部的體外篩選工作，之后呢，按照既定流程，他們進(jìn)一步把利用原代細(xì)胞模型所獲取到的候選分子，成功推進(jìn)到了動物驗證階段，令人驚喜的是，驗證效果超乎尋常的好，鑒于此，公司經(jīng)過審慎考量后決定，將這個極為關(guān)鍵的平臺當(dāng)作核心技術(shù)，開始對外界提供委托研究服務(wù)。
上一個月期間，我前往他所在的公司進(jìn)行參觀，在那里看到實驗室之中，擺放得整整齊齊的有六臺二氧化碳培養(yǎng)箱，每一臺培養(yǎng)箱的門上，都貼著標(biāo)識著不同細(xì)胞類型的標(biāo)簽。他講述稱，現(xiàn)今每日至少要處理四種源自不同地方的原代細(xì)胞，從神經(jīng)細(xì)胞起始，直至心肌細(xì)胞，從脂肪細(xì)胞開始，再到成骨細(xì)胞。
我向他詢疑問及是否依舊感覺原代細(xì)胞具備難度，他臉上浮現(xiàn)笑容說道，難確實是難，然而只要你領(lǐng)悟明白并且理解了它的秉性脾氣，那么它便會給予你最為真實確切的數(shù)據(jù)。那些看起來令人省心的漂亮細(xì)胞系數(shù)據(jù)，究竟騙過你許多頻次了，你自己內(nèi)心卻是明晰清楚的。
我對他說的這句話印象尤為深刻。做實驗的這條路徑，倘若貪圖省事，通常不免會走上最為漫長的迂回之路。原代細(xì)胞培養(yǎng)的門檻的確頗高，然而它所反饋出的信息價值，是任何傳代細(xì)胞系都根本無法予以替代的。
要是你同樣正為細(xì)胞實驗數(shù)據(jù)呈現(xiàn)不穩(wěn)定狀況而感到煩悶苦惱，那不妨審慎嚴(yán)肅地思索考量一下是不是應(yīng)當(dāng)轉(zhuǎn)而切換至原代細(xì)胞模型。從把組織分離后，到對培養(yǎng)條件展開優(yōu)化，每一個步驟都需要具備耐心，并且要做到細(xì)致細(xì)膩，不過其回報是能夠得到更為可靠的實驗結(jié)果。
冀此友之實戰(zhàn)閱歷可為汝予些啟迪，原代細(xì)胞此途，行得緩些，然每一步皆踏于實處。
