我結(jié)識了一位友人，此人稱作老李，其于北京一間主營生物技術(shù)的公司就職，具體崗位是細(xì)胞房主管。
在這個行當(dāng)之中，他摸爬滾打了將近十年，經(jīng)他手的腫瘤細(xì)胞株，少說也有上百株了。
某次最近的見面之時，他針對這兩年所碰到的那些挫折以及歸納得出的方法與我展開交談，我發(fā)覺其具備著相當(dāng)突出的價值。
在今天，要將他那實(shí)際發(fā)生過的經(jīng)歷給撰寫呈現(xiàn)出來，期望對于此刻正在同腫瘤細(xì)胞株進(jìn)行接觸打交道的你，能夠產(chǎn)生一定的助益作用，使其有所收獲。
腫瘤細(xì)胞株污染了怎么辦
2025年秋天的時候，老李講，公司承接了一個合作項目，此項目要求同時培育六株不一樣的腫瘤細(xì)胞株。
其中存有一株，是源自相對比較稀缺的胰腺癌模型，團(tuán)隊耗費(fèi)了很大的成本，方將其引進(jìn)而來。
養(yǎng)到第三周的時候，結(jié)果出現(xiàn)了，老李在倒置顯微鏡下觀察到，培養(yǎng)液變得渾濁起來，并且在背景之中，出現(xiàn)了細(xì)小的顆粒，這些顆粒還在動。
他心里咯噔一下——這是典型的細(xì)菌污染特征。
那時處于十月中旬，是一個周二的下午，老李迅速將所有培養(yǎng)瓶取出，拿到鏡下認(rèn)認(rèn)真真細(xì)細(xì)查看。
得知被污染后，他立刻，于最短的時間，將這一株細(xì)胞的，每一個凍存管，以及所有傳代培養(yǎng)物，統(tǒng)統(tǒng)進(jìn)行隔離。
接著，他運(yùn)用漂白水針對整個操作臺使勁擦了兩遍，又對incubator門把手也徹徹底底擦了兩遍哦。
老李講，針對腫瘤細(xì)胞株污染的處理，不能懷有僥幸心理，一旦察覺到，就一定要堅決地舍棄。
他以前存在一位舍不得丟棄所用物品的同事，這位同事嘗試采用加倍雙抗的方式去進(jìn)行挽救，然而最終的結(jié)果卻是污染擴(kuò)散至了整個細(xì)胞房。
那次事故導(dǎo)致公司停工兩周，損失超過二十萬元。
所以，現(xiàn)在老李秉持的原則是，任何一瓶出現(xiàn)了異味的腫瘤細(xì)胞株，都要直接進(jìn)行高壓滅菌處理。
同一時間，他會再度從液氮儲存罐里頭，讓早一批次被冷凍保存的細(xì)胞恢復(fù)生機(jī)，而絕對不會去冒風(fēng)險運(yùn)用受到污染的樣本。
腫瘤細(xì)胞株傳代的最佳時機(jī)
老李回憶，剛?cè)胄心菚核傉莆詹缓脗鞔芏取?/p>
曾經(jīng)有一回，養(yǎng)了一株胃癌細(xì)胞株，當(dāng)它長到了90%匯合度的時候才進(jìn)行傳代操作，然而，結(jié)果卻是細(xì)胞大量地脫落了，并且其成活率還不到五成。
其后，他逐步探尋到一種經(jīng)驗(yàn)，那就是，多數(shù)貼壁腫瘤細(xì)胞株于細(xì)胞匯合度處于百分之七十至百分之八十之際進(jìn)行傳代是最為適宜的。
這個階段，細(xì)胞處于對數(shù)生長的時期，其狀態(tài)是最為活躍的，消化之后呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，并且貼壁速度也很快，是這樣的情況。
他有著這樣的習(xí)慣，在每天上午十點(diǎn)左右的時候去觀察細(xì)胞，這是由于在那個時候，細(xì)胞才剛剛從夜間靜置的狀態(tài)恢復(fù)過來。
用眼去仔細(xì)觀察之際，拿記號筆于瓶壁之上做好標(biāo)記，標(biāo)記那當(dāng)下的日期以及匯合度，以此來便利后續(xù)的排期安排。
若目睹細(xì)胞鋪展的面積超出八成，且于中間部位開始呈現(xiàn)堆積以及重疊的情形，那就需要在當(dāng)天進(jìn)行消化傳代。
一定不要等到全然長滿，不然細(xì)胞會分泌抑制因子，并且容易出現(xiàn)整片零落、脫落的情況。
現(xiàn)在由老李經(jīng)手的腫瘤細(xì)胞株，每一株都在記錄本上，將傳代比例以及周期寫得明明白白了。
比如說，那一棵患有肺癌的細(xì)胞株，他將其按照1比3的比例進(jìn)行傳代操作，每間隔兩天就進(jìn)行一回，如同遭受雷擊也不會變動。
這看上去好像是一件不算大的事，然而要是把它做好了，那么后續(xù)許多類似細(xì)胞成團(tuán)、生長停滯等方面的麻煩，就會極大程度地減少。
腫瘤細(xì)胞株凍存與復(fù)蘇的關(guān)鍵步驟
在2026年1月的時候，老李所在的公司，要將一批具有珍貴性質(zhì)的腫瘤細(xì)胞株，從北京運(yùn)送至處于上海的合作方那邊。
凍存質(zhì)量直接決定了復(fù)蘇后的活力和遺傳穩(wěn)定性。
老李跟我詳細(xì)講了他在凍存環(huán)節(jié)的幾個硬性要求。
只用選取處在對數(shù)生長期的細(xì)胞，且匯合度大概在80%左右，并且不存在任何污染的細(xì)胞。
消化后要徹底中和胰蛋白酶，用預(yù)冷的凍存液慢慢重懸。
所使用的凍存液，是由90% 的胎牛血清與10% 的二甲基亞砜構(gòu)成，此配方，是經(jīng)過他無數(shù)次嘗試之后，方才確定下來的啊。
凍存管要寫好細(xì)胞名稱、代次、日期和操作人，標(biāo)簽要耐液氮。
繼而運(yùn)用程序降溫盒，每分鐘下降一度，直至零下八十度，在此過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮罐。
他著重指出了一點(diǎn)，存在不少新手，其中一些新手會將凍存管，由室溫狀態(tài)之時，直接投放入液氮當(dāng)中去，如此這般的話，冰晶便會把細(xì)胞膜給刺破掉。
復(fù)興之際同樣存在門道，老李把冷凍保存管從液氮罐當(dāng)中拿出之后，馬上于三十七攝氏度的水浴里頭迅速地?fù)u晃。
凍存液融化，直至只剩下一個小小的冰核，這種情況下拿出來，然后用酒精棉去擦干管口。
而后緩緩地將其一滴一滴地加入事先已預(yù)熱的培養(yǎng)基之中，通過離心的方式把二甲基亞砜去除掉，然后借助新鮮的培養(yǎng)基使其重新懸浮起來。
他記著，在2025年的夏天，有一回，同事復(fù)蘇之際，水浴時間過長，溫度超出了四十度。
然而，那株結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞株，在復(fù)蘇之后，幾乎呈現(xiàn)出不貼壁的狀況，這表明細(xì)胞已然遭受熱休克損傷了。
所以老李現(xiàn)在每次復(fù)蘇都掐著秒表做，一分鐘內(nèi)完成融化步驟。
腫瘤細(xì)胞株支原體檢測的必要性
老李說，支原體污染是腫瘤細(xì)胞株最隱蔽的殺手。
它不會致使培養(yǎng)基變得渾濁不清，也不會于鏡下被觀察到存在明顯顆粒，然而它會將細(xì)胞代謝以及基因表達(dá)悄悄地做出改變。
在2025年的年末時分，公司里有一個研發(fā)項目，其數(shù)據(jù)一直反復(fù)出現(xiàn)重復(fù)，但始終沒辦法重復(fù)出來，眾多人員尋覓了整整兩周時間，卻始終查找不到其中蘊(yùn)含的原因。
老李心里犯嘀咕，懷疑是細(xì)胞方面出現(xiàn)了狀況，于是選取了六組正在被使用的腫瘤細(xì)胞株的樣本，把它們送去做檢測了。
結(jié)果有三株呈支原體陽性，其中包括最常用的那株乳腺癌模型。
那條消息令整支團(tuán)隊均甚為震驚，緣由是，那株細(xì)胞已然培育了將近半年時間，長時間以來，看上去狀態(tài)頗佳。
往后老李查閱記錄，方發(fā)覺該情況，歷時半年之前，具一次操作之際，隔壁實(shí)驗(yàn)室正就支原體污染的樣品予以處理。
很可能是通過氣溶膠或者手套接觸傳播過來的。
自那之后，老李作出規(guī)定，所有新引進(jìn)的那種腫瘤細(xì)胞株，必須經(jīng)過支原體檢測，方可進(jìn)入細(xì)胞房。
他每個月都會對正在培養(yǎng)的細(xì)胞開展一次抽樣檢測，檢測方法他選用的是PCR法。
結(jié)果出來很快，上午送樣下午就能拿到電泳圖。
要是發(fā)覺呈陽性，他就會馬上摒棄整批細(xì)胞，并且針對細(xì)胞房開展過氧化氫熏蒸消毒。
老李講，這般的檢測看上去增添了些許成本，然而相較于數(shù)據(jù)變?yōu)闊o效乃至需要再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所付出的代價，那完全沒有什么值得一提的意義。
腫瘤細(xì)胞株STR鑒定確保身份準(zhǔn)確
去年四月份的時候，老李投身于一個合作開展的課題之中，與之合作的另一方從另外一家單位那里轉(zhuǎn)贈了一瓶黑色素瘤細(xì)胞株。
老李按照慣例先擴(kuò)增凍存了一批，同時送了樣品去做STR鑒定。
當(dāng)真等那結(jié)果出來之際哩，他不禁大吃了一驚，這一株被稱作是黑色素瘤的細(xì)胞呀，實(shí)際上竟然是HeLa細(xì)胞所造成的污染。
也就是說，對方提供的細(xì)胞株已經(jīng)被錯誤標(biāo)記或者交叉污染了。
要是當(dāng)時情況下，老李未曾去做鑒定，而是直接將其用于做實(shí)驗(yàn)，那么后續(xù)幾個月的課題，都會白白耗費(fèi)掉。
他回想起那個年份是2018年，當(dāng)時自己于剛剛進(jìn)入行業(yè)的時候，公司曾因運(yùn)用了來源不清楚的腫瘤細(xì)胞株，從而刊發(fā)了一篇論文。
而后，被讀者點(diǎn)明STR圖譜存在對不上的情況，于是，不得不將稿件撤回，進(jìn)而導(dǎo)致了極為嚴(yán)重的聲譽(yù)方面的損失。
所以，現(xiàn)今，老李針對任何一株新引進(jìn)的腫瘤細(xì)胞株，或者是自己從組織消化得出的原代株，都會去做STR鑒定。
他會參照ATCC數(shù)據(jù)庫的參考圖譜確認(rèn)，9到16個位點(diǎn)完全匹配，他也會參照DSMZ數(shù)據(jù)庫的參考圖譜確認(rèn)，9到16個位點(diǎn)完全匹配。
代次方面，他只使用鑒定確認(rèn)后的前十代以內(nèi)細(xì)胞進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。
過了十代，他另外進(jìn)行一次，針對STR的檢測，為的是避免，長期培養(yǎng)的期間，出現(xiàn)基因漂移，或者交叉污染的狀況。
老李表明，這般動作恰似為細(xì)胞施加了身份證，看上去繁雜，事實(shí)上乃是庇佑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的底線。
腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)體系如何優(yōu)化
不同腫瘤細(xì)胞株對培養(yǎng)基和血清的要求差異很大。
曾經(jīng)，老李養(yǎng)過一株甲狀腺髓樣癌細(xì)胞株，這株甲狀腺髓樣癌細(xì)胞株很罕見。然而，使用常規(guī)的1640培養(yǎng)基，不管怎樣它都不長。
細(xì)胞貼壁稀疏，增殖極慢，還容易漂起來。
他查閱了諸多文獻(xiàn)，翻閱了不少技術(shù)手冊，而后察覺，這株細(xì)胞，需要增添額外的生長因子，以及特殊配比的培養(yǎng)基。
于是，在2025年，處于七八月的那段時期，他空出了兩周時間，專門用來做培養(yǎng)基優(yōu)化。
他設(shè)計了不同濃度的胎牛血清梯度，從百分之五到百分之二十。
與此同時，進(jìn)行了嘗試，嘗試所選對象為 DMEM/F12，嘗試所選對象還有 DMEM 高糖，它們屬于不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組合。
還有他，進(jìn)行了測試，測試了是否添加添加劑，涉及非必需氨基酸，涉及丙酮酸鈉，還涉及β -巰基乙醇。
最終發(fā)覺，在以DMEM/F12作為基礎(chǔ)的情況下，再添加百分之十五的胎牛血清以及1%的胰島素 - 轉(zhuǎn)鐵蛋白 - 硒添加劑時，這一株腫瘤細(xì)胞株的狀態(tài)呈現(xiàn)為最佳。
細(xì)胞原來的倍增時間是七十二小時，現(xiàn)在縮短到了四十八小時，而且形態(tài)變得愈發(fā)典型了。
老李把這個配方寫在細(xì)胞房的共享記錄本上，方便其他同事參考。
他講，每一棵細(xì)胞好似一位挑剔的用餐者，你要耐心找出它最為中意的那道菜肴。
莫以為他人的培養(yǎng)條件能夠徑直照搬，同名細(xì)胞株源于各異供體或許便存在差異。
腫瘤細(xì)胞株狀態(tài)變差的常見原因
今年三月，老李察覺到，自己所養(yǎng)的一株腎癌細(xì)胞株，忽然呈現(xiàn)出空泡化，并且邊緣變得不整齊。
細(xì)胞背景之中，依舊有著好多處于漂浮狀態(tài)的已然死亡的細(xì)胞，然而培養(yǎng)基并未呈現(xiàn)出渾濁的狀況，針對桿菌以及真菌所開展的檢測，結(jié)果均為陰性。
他判斷不是微生物污染，而是細(xì)胞本身狀態(tài)出了問題。
于是他開始逐一排查可能的原因。
先是對培養(yǎng)箱的溫度進(jìn)行了檢查，又對二氧化碳濃度做了查看，之后得到發(fā)現(xiàn)此次顯現(xiàn)出溫度探頭出現(xiàn)了偏移零點(diǎn)五度這樣的狀況。
進(jìn)行校準(zhǔn)之后，又針對培養(yǎng)箱里的濕度展開了測試，濕度要是偏低了，就會致使培養(yǎng)基出現(xiàn)蒸發(fā)的情況，進(jìn)而使得滲透壓上升。
第二查看了培養(yǎng)基的批次，發(fā)現(xiàn)換了一個新批號的血清。
他取了少量血清，而后做了細(xì)胞毒性試驗(yàn)，他將新血清和舊血清分別用于培養(yǎng)同一株細(xì)胞，進(jìn)而進(jìn)行對比。
結(jié)果新血清那組細(xì)胞明顯長得不好，說明問題出在血清批次上。
于是，他馬上將血清批次換回先前已經(jīng)驗(yàn)證過的那個，與此同時，把培養(yǎng)箱的濕化盤用無菌水加滿。
大概過去了五天時間，那株腎癌腫瘤細(xì)胞株呀，才緩緩地逐漸恢復(fù)到正常的鋪展形態(tài)，以及正常的增殖速度呢。
老李進(jìn)行總結(jié)表明，細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)變差這種情況，通常并非是受到單一原因的影響，必須要如同偵探那般，一項一項地去展開排查。
他建議，每個細(xì)胞房都要準(zhǔn)備一份“異常狀態(tài)排查清單”，按照，溫度、CO2、滲透壓、pH、支原體、培養(yǎng)基批次、消化過度等，這樣的順序進(jìn)行檢查。
這比盲目換液或者加各種添加劑要有效得多。
這段時期，和老李進(jìn)行了交流之后，得到的最大體會便是，腫瘤細(xì)胞株去做培養(yǎng)方面的流程時，是不存在快捷路徑而言的，僅僅只能是將每一項細(xì)微環(huán)節(jié)都切實(shí)地落實(shí)到位才行。
從對于污染方面的控制開始，一直到傳代的具體時機(jī)，從進(jìn)行凍存以及復(fù)蘇的操作，再到身份的鑒定，每一個進(jìn)行的步驟都絕對不允許馬虎從事。
這些年，老李經(jīng)歷過的摔倒失利，付出過的代價學(xué)費(fèi)，通通化作了如今他手里面的操作規(guī)范流程。
要是你同樣正與腫瘤細(xì)胞株進(jìn)行接觸，那就不妨將他的這些過往經(jīng)歷視作一面鏡子吧。
對照看看自己的操作是否有同樣容易忽略的漏洞。
希望這篇文章能給你在實(shí)際工作中帶來一點(diǎn)實(shí)實(shí)在在的幫助。
