我身旁有好些從事細(xì)胞相關(guān)一類實(shí)驗(yàn)的友人，上個(gè)月在大學(xué)城高新園獨(dú)棟實(shí)驗(yàn)室里做重組蛋白鉆研項(xiàng)目的大劉，碰到了從業(yè)六年之際最為棘手犯難的難題，這段歷經(jīng)一個(gè)多月的處理進(jìn)程，對(duì)于所有投身細(xì)分領(lǐng)域研究的同行而言都具備切實(shí)實(shí)在的參考意義。
大劉所帶領(lǐng)的課題組承接了一項(xiàng)子課題，該子課題是關(guān)于機(jī)制探究的，且課題組已經(jīng)連續(xù)跟進(jìn)了兩年，整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程的安排極為緊湊，從對(duì)蛋白表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證開(kāi)始，到后續(xù)諸多組別的追蹤排布，其間幾乎不存在任何空隙，所有事前預(yù)先設(shè)想的變量排查工作都完成得精細(xì)且到位，然而，令人萬(wàn)萬(wàn)沒(méi)有想到的是，最終竟在細(xì)胞培養(yǎng)這最為基礎(chǔ)的源頭環(huán)節(jié)上遭遇了失敗。
ATCC細(xì)胞怎么選合規(guī)渠道
才開(kāi)始的時(shí)候，圖的是省事，大劉于某人打著“現(xiàn)貨速撥”旗號(hào)下的第三方散戶那兒，定下了一批目標(biāo)細(xì)胞，此價(jià)格相較于那種合規(guī)的商而講，低了差不多三成兒。才剛把細(xì)胞拿到手沒(méi)過(guò)幾天，瞅見(jiàn)顯微鏡底下出現(xiàn)些飄浮著的團(tuán)狀雜物，最開(kāi)始的時(shí)候，還以為是在做那個(gè)傳代操作的過(guò)程里弄進(jìn)去的雜物，接連著兩次來(lái)?yè)Q液之后哎，結(jié)果反倒觀察到其狀態(tài)完全崩壞掉了。之后，找那個(gè)平臺(tái)去追查其源頭，就連一張完整的入庫(kù)質(zhì)檢單，對(duì)方都?jí)焊鶅簺](méi)辦法給提供出來(lái)。
在5月8號(hào)，大劉拉著我，直接前往市里與靠譜品牌合作的供應(yīng)商線下點(diǎn)，這才弄明白，選擇ATCC細(xì)胞合規(guī)渠道，首先得查看整套溯源文件，原始株入境檢驗(yàn)單不能少，批代擴(kuò)增的完整記錄也不能少。合規(guī)渠道的每一細(xì)胞批次，都會(huì)附帶獨(dú)立鑒定報(bào)告，傳代過(guò)程中每一步的環(huán)境溫濕度存檔，也是能夠調(diào)閱的，絕對(duì)不會(huì)給后續(xù)實(shí)驗(yàn)留下看不見(jiàn)的隱藏問(wèn)題。
依據(jù)那時(shí)供應(yīng)商對(duì)接的研發(fā)助理所講，當(dāng)下好多并非合規(guī)的渠道宣稱自己手上的ATCC細(xì)胞是保藏中心直接供應(yīng)的，事實(shí)上都進(jìn)行了四五次的低成本傳代擴(kuò)增，細(xì)胞自身的生化表達(dá)特性早就偏離了原本的標(biāo)準(zhǔn)譜段。運(yùn)用這類出來(lái)的，后續(xù)在實(shí)驗(yàn)組里出現(xiàn)的增殖數(shù)據(jù)差異甚至能夠涵蓋不同梯度處理的表現(xiàn)，忙碌三個(gè)月得到的結(jié)論連重復(fù)驗(yàn)證都無(wú)法通過(guò)。此次購(gòu)買自正規(guī)渠道，還順便給予了兩遍復(fù)蘇體系優(yōu)化的培訓(xùn)。
細(xì)胞來(lái)源核對(duì)不能跳步驟
去做實(shí)驗(yàn)時(shí)跳過(guò)核對(duì)步驟，遲早會(huì)給項(xiàng)目進(jìn)度埋下隱患。大劉那次遭受損失后，拿到新一批次的ATCC細(xì)胞，首先做的事便是核對(duì)袋身標(biāo)簽編號(hào)，核對(duì)附帶質(zhì)檢單上的編號(hào)，還要核對(duì)溯源系統(tǒng)內(nèi)錄入的出貨批次，這三者全部核對(duì)一致后才進(jìn)行拆封，絕不是僅僅查看包裝印標(biāo)的logo就直接去接種。核對(duì)過(guò)程中，就連細(xì)胞推薦的傳代密度、消化停留時(shí)長(zhǎng)這類的備注要求，也都一并做手寫補(bǔ)注。
ATCC細(xì)胞復(fù)蘇要注意什么
當(dāng)首次拿著正統(tǒng)的ATCC細(xì)胞去走復(fù)蘇流程之際，大劉依據(jù)以往拿廉價(jià)自誘細(xì)胞的習(xí)慣來(lái)開(kāi)展操作，起初的好多次都沒(méi)能收獲理想的貼壁率。那時(shí)他緊緊握著在37攝氏度預(yù)熱好的培養(yǎng)液，故而整整皺著眉頭長(zhǎng)達(dá)半小時(shí)時(shí)間。隨后他依照供應(yīng)商專員所指導(dǎo)的優(yōu)化校準(zhǔn)方案，針對(duì)從液氮罐拿取凍存樣本，接著再轉(zhuǎn)移至37度水浴槽進(jìn)行融化的全部細(xì)節(jié)參數(shù)做出了調(diào)整，標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)蘇操作需要把控融化過(guò)程應(yīng)當(dāng)在一分四十秒之內(nèi)完成，以此確保凍存液里面的溶質(zhì)不會(huì)再次析出從而對(duì)細(xì)胞膜表面位點(diǎn)造成損傷。融化完成后，要先用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行梯度稀釋，不能直接在培養(yǎng)皿里混樣稀釋。做完這個(gè)之后，要在孵箱里靜置培養(yǎng)將近十二個(gè)小時(shí)，等到觀察到有75%的細(xì)胞順利鋪底時(shí)， 第一次換液只替換掉原有二分之一的舊培養(yǎng)液，而不進(jìn)行一次性全新置換培養(yǎng)液，以免給剛復(fù)蘇的細(xì)胞帶來(lái)突兀滲透壓波動(dòng)。按照這樣一套標(biāo)準(zhǔn)化流程進(jìn)行下去，等到復(fù)蘇第三日，他在鏡下才看到所有細(xì)胞都進(jìn)入健康對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，此間沒(méi)有發(fā)生半點(diǎn)聚團(tuán)或空泡化不良狀態(tài)。同時(shí)注意，復(fù)蘇早期還涉及到大量細(xì)微參數(shù)校準(zhǔn)工作。
僅有37攝氏度的精準(zhǔn)恒溫環(huán)境是不足夠的，與之配套應(yīng)用的培養(yǎng)液基礎(chǔ)批次以及血清都得預(yù)先做好適配性預(yù)實(shí)驗(yàn)，每次操作步驟中對(duì)于時(shí)長(zhǎng)節(jié)點(diǎn)的把控，只要稍微出現(xiàn)偏差，便極有可能對(duì)最終的細(xì)胞活性狀態(tài)產(chǎn)生不利影響，就算是在將樣本轉(zhuǎn)移至水浴這個(gè)過(guò)程里耽擱了二十秒，這種看似微不足道的小疏忽，最終所呈現(xiàn)的復(fù)蘇率數(shù)據(jù)上下浮動(dòng)能夠超越百分之二十，恰好不在對(duì)照組重復(fù)所能允許的容錯(cuò)范圍之中。在大劉之前遭受違違規(guī)渠道的困擾后，他才察覺(jué)到，適配的試劑流程與可靠的種源之間，存在著相互支撐的緊密關(guān)系，要是沒(méi)有前者提供保障，就算是原裝的 ATCC 菌株樣到手，也很難將其狀態(tài)精準(zhǔn)養(yǎng)好。
落實(shí)傳代操作環(huán)節(jié)適配 ATCC 細(xì)胞的最優(yōu)消化時(shí)長(zhǎng)的校驗(yàn)、臺(tái)盼藍(lán)染色存活率核準(zhǔn)的校驗(yàn)工作，很多實(shí)驗(yàn)室以往做粗放類細(xì)胞課題，習(xí)慣省略鑒定步驟，對(duì)培養(yǎng)滿瓶細(xì)胞分兩步復(fù)查，先觀察細(xì)胞株形態(tài)，再核驗(yàn)抽樣種源特征序列，以此確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程中段絕不引入不明屬性雜細(xì)胞，避免其混入打亂整個(gè)組別增殖及蛋白后續(xù)記錄數(shù)據(jù)有效性。后來(lái)，對(duì)這批次細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)處理，得到了連續(xù)十組傳代之后的平行實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差穩(wěn)定控制在誤差允許范圍內(nèi)的正常區(qū)間，不像最初通過(guò)廉價(jià)渠道那次，導(dǎo)致對(duì)照組和后續(xù)不同梯度濃度組的數(shù)據(jù)出現(xiàn)難以解釋的交叉重疊，此前卡在那里拖進(jìn)度整整一個(gè)半月的大劉，終于能夠按照原有預(yù)設(shè)時(shí)間表推進(jìn)后續(xù)的功能相關(guān)探究實(shí)驗(yàn)。
他這次全程完整地繞開(kāi)彎路后，總結(jié)出不少實(shí)用經(jīng)驗(yàn)。在選用前期階段，摒棄沒(méi)有完整溯源體系的非標(biāo)零散供貨源，本身就是規(guī)避后續(xù)諸多無(wú)效無(wú)用功的最省錢省力處理方式?？雌饋?lái)，眼下初期階段采購(gòu)賬面上要多付出些采購(gòu)成本，可避免半途報(bào)廢以致連后續(xù)各類人力耗材全部白投進(jìn)去。拿到無(wú)實(shí)打?qū)嵲纯刹榈腁TCC細(xì)胞，細(xì)胞出現(xiàn)鏡下?tīng)顟B(tài)問(wèn)題后，既無(wú)法通過(guò)正規(guī)方式獲取技術(shù)對(duì)接支持，又浪費(fèi)了課題規(guī)劃中預(yù)留的大量靈活緩沖時(shí)間，最終常常來(lái)不及追趕進(jìn)度節(jié)點(diǎn)，結(jié)果得不償失。
他在后續(xù)還對(duì)接供應(yīng)商，針對(duì)實(shí)驗(yàn)室小團(tuán)體開(kāi)展有針對(duì)性的操作培訓(xùn)，規(guī)范且明細(xì)其標(biāo)準(zhǔn)化內(nèi)容。整體計(jì)算下來(lái)，此次耗時(shí)折騰構(gòu)建出流程校準(zhǔn)體系，據(jù)此為實(shí)驗(yàn)室確定了一整套可長(zhǎng)期沿用的ATCC細(xì)胞處理標(biāo)準(zhǔn)化SOP模板，為此甚至針對(duì)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的恒溫孵箱類硬件特定參數(shù)，調(diào)整出來(lái)特殊適配版操作表 ，相較于通用建議參考值，該操作表更適配此地日常實(shí)際環(huán)境，再也不像之前那般，僅僅依靠?jī)H憑實(shí)驗(yàn)員積累手感生摸索才能拿到一株新的株系。
不少剛踏入相關(guān)領(lǐng)域，進(jìn)而跟進(jìn)子課題的新人，總感覺(jué)拿到培養(yǎng)體系呈現(xiàn)出不穩(wěn)定的狀況，其第一反應(yīng)便是想去追尋研究課題處理的上層設(shè)計(jì)方案，然而卻常常忽略了細(xì)胞這一起始源頭所存在的隱蔽隱患。要是細(xì)胞傳個(gè)三四輪以后，已經(jīng)出現(xiàn)生化信號(hào)持續(xù)漂移的情形了，即便整體操作流程達(dá)成了零失誤，也得得出重復(fù)不平行的數(shù)據(jù)，進(jìn)而全組推翻重測(cè)結(jié)果，這就平白無(wú)故地搭進(jìn)去極多珍貴的項(xiàng)目有效運(yùn)轉(zhuǎn)周期時(shí)間。大劉此次歷經(jīng)一整套踩坑并解決的過(guò)程，恰好能給所里剛?cè)雸?chǎng)的各位新人上極為直觀的一課，即穩(wěn)住根本源頭的標(biāo)準(zhǔn)度，方能保證后續(xù)推進(jìn)的每一組實(shí)驗(yàn)，其觀察信號(hào)都能夠精準(zhǔn)指向所聚焦的研究目標(biāo)自身！
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