為什么科研ELISA試劑盒的重復(fù)性總是不理想？
就在上個(gè)月，我的一位朋友老陳，他于高校生命科學(xué)學(xué)院擔(dān)任副研究員，深夜之時(shí)給我撥來電話，其語氣之中充斥著滿滿的疲憊與困惑。他手頭存在一個(gè)關(guān)于細(xì)胞因子表達(dá)的課題，在檢測(cè)環(huán)節(jié)已然卡住長(zhǎng)達(dá)兩個(gè)多月了。核心問題恰恰出現(xiàn)在ELISA數(shù)據(jù)方面，對(duì)于同一個(gè)樣本，此次進(jìn)行檢測(cè)與下一次進(jìn)行檢測(cè)相比較，數(shù)值竟然能夠相差出一倍來，其重復(fù)性猶如在開玩笑一般。
儀器完成校準(zhǔn)了，其操作流程也已然SOP化了，然而結(jié)果卻是飄忽不定的狀態(tài)。老陳在電話那頭發(fā)出嘆氣的行為，眼看項(xiàng)目結(jié)題的日期正在迫近，可是數(shù)據(jù)卻拿不出手，處于這樣的狀況之下，我都快要被逼到瘋掉的程度了。
如何判斷ELISA試劑盒的靈敏度和特異性是否達(dá)標(biāo)？
處于困境之中的老陳，實(shí)際上不少科研一線工作者都遭遇過。實(shí)驗(yàn)最終的成敗，常常于挑選試劑盒的那個(gè)時(shí)刻便已然埋下了伏筆。最開始的時(shí)候，老陳跟眾多剛踏入科研領(lǐng)域?qū)W習(xí)的研究生情況相同，認(rèn)為試劑盒彼此間差別不大，價(jià)格才是首要需要考慮的因素。他挑選了一款在市面上價(jià)格顯得“極為誘人”的通用型試劑盒，然而結(jié)果卻是陷入了極大的困境之中。
那款試劑盒的說明書里，靈敏度標(biāo)稱數(shù)值看上去很不錯(cuò)，然而實(shí)際去做標(biāo)準(zhǔn)曲線之際，低濃度的那些點(diǎn)重復(fù)性糟糕透頂，CV值常常就會(huì)超過20%。更讓人頭疼不已的是，樣本當(dāng)中一些常見的基質(zhì)干擾，它好像根本沒辦法排除掉，致使背景信號(hào)偏高，特異性存在疑問。老陳的預(yù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)雜亂無章，根本不能夠用于正式分析。
國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口ELISA試劑盒在科研應(yīng)用中有何差異？
遭受痛苦后進(jìn)行反思，老陳作出重新篩選試劑盒的決定，此次，他并非僅僅只審視價(jià)格，而是將目光投向了幾個(gè)知名的進(jìn)口品牌，與此同時(shí)，也認(rèn)真地對(duì)幾家口碑良好的國(guó)產(chǎn)高端品牌展開了對(duì)比，他耗費(fèi)了一周時(shí)間，沉浸在文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫以及各大科研論壇之中，去查看已發(fā)表文章里他人所使用的品牌以及貨號(hào)，尤其是那些研究對(duì)象與自身課題相類似的文獻(xiàn)。
他發(fā)覺，進(jìn)口品牌于關(guān)鍵原料，像高純度抗體、標(biāo)準(zhǔn)品這些方面，在溯源性以及工藝穩(wěn)定性上，的確有著深厚的積累，其長(zhǎng)達(dá)幾十頁的細(xì)致技術(shù)文檔還有豐富的應(yīng)用文獻(xiàn)，也著實(shí)讓人安心。然而價(jià)格高昂，并且貨期不穩(wěn)定，有時(shí)等待一兩個(gè)月乃是平常之事。而一些頂尖的國(guó)產(chǎn)試劑盒，在這近幾年里發(fā)展極為迅速，特別是在針對(duì)國(guó)內(nèi)常見研究對(duì)象或者特定種屬的檢測(cè)之時(shí)，有時(shí)候會(huì)比進(jìn)口品牌更具“接地氣”的特點(diǎn)，性價(jià)比十分突出，貨期同樣較快。
怎樣優(yōu)化ELISA實(shí)驗(yàn)操作以提升數(shù)據(jù)可靠性？
今年三月上旬，老陳最終確定了兩個(gè)候選品牌。他并未草率地去做決定，而是構(gòu)思了一個(gè)小型的“試劑盒比拼”試驗(yàn)。他運(yùn)用自身的課題樣本，再添加上標(biāo)準(zhǔn)品以及陰/陽性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，于完全一樣的實(shí)驗(yàn)條件當(dāng)中（同一臺(tái)酶標(biāo)儀、同一批耗材、同一天按他個(gè)人操作規(guī)定），對(duì)兩個(gè)品牌的試劑盒進(jìn)行了平行測(cè)試。
這個(gè)對(duì)比實(shí)驗(yàn)使得他收獲極為可觀，他發(fā)覺，國(guó)產(chǎn)某一品牌的試劑盒于檢測(cè)他所研究的特定細(xì)胞因子之際，顯色更為穩(wěn)定，背景更低，更為關(guān)鍵的是，該品牌的技術(shù)支撐頗具助力，不但給出了針對(duì)他樣本類型（細(xì)胞培養(yǎng)上清）的詳盡前處理建議，還協(xié)助他剖析了預(yù)實(shí)驗(yàn)的曲線數(shù)據(jù)，點(diǎn)明了幾個(gè)他先前忽視的溫育細(xì)節(jié)。
比如說，在標(biāo)準(zhǔn)品以及樣本加樣完畢之后，他們提議運(yùn)用平板振蕩器以低速進(jìn)行振蕩從而實(shí)現(xiàn)混勻，并非采用手動(dòng)拍打這種方式，其目的在于確?？着c孔之間的均一性；對(duì)于顯色步驟而言，避光條件務(wù)必達(dá)到絕對(duì)嚴(yán)格的程度，就算實(shí)驗(yàn)室光線并非很強(qiáng)，同樣需要蓋上遮光蓋來遮光。這些看起來似乎微不足道的操作方面的優(yōu)化，對(duì)于結(jié)果穩(wěn)定性的提升作用極為顯著。
除了價(jià)格，評(píng)估ELISA試劑盒還有哪些關(guān)鍵指標(biāo)？
源于系統(tǒng)的對(duì)比以及優(yōu)化之后，老陳的課題最終回歸到正常的軌道之上了。當(dāng)下他跟我談?wù)撈鹪噭┖械臅r(shí)候，已然是條理清晰、說得很有條理了。他作出總結(jié)，挑選科研ELISA試劑盒這件事，絕對(duì)不可以僅僅去看價(jià)格，一定要全面綜合地評(píng)估幾個(gè)關(guān)鍵且重要的指標(biāo)：
先是“數(shù)據(jù)包”的豐富程度，除了這說明書之外，廠家能不能給出完整的質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告（CoA），涵蓋關(guān)鍵原料的來源、效價(jià)鑒定數(shù)據(jù)呢？可有公開發(fā)表的應(yīng)用文獻(xiàn)來提供支持呀？這些都是產(chǎn)品可靠性的一種支撐證明。
接下來要說的是，依靠技術(shù)所具備的響應(yīng)能力。當(dāng)你碰到問題之際，是僅僅會(huì)收到一封按照模板生成的回復(fù)郵件，還是能夠有專業(yè)的技術(shù)工作人員與你展開深入的交流溝通，甚至還會(huì)協(xié)助你去設(shè)計(jì)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)？這對(duì)于攻克復(fù)雜樣本的檢測(cè)難題而言，是非常關(guān)鍵重要的！
有沒有考慮產(chǎn)品的生態(tài)，該品牌能不能提供同一指標(biāo)的不同檢測(cè)方法學(xué)，像化學(xué)發(fā)光法的試劑盒，是否涵蓋了你研究所需的各類其他相關(guān)指標(biāo)，這會(huì)給后面接著開展的連續(xù)性研究以及數(shù)據(jù)的相應(yīng)可比性提供便利。
面對(duì)復(fù)雜的生物樣本，如何保證ELISA檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性？
老陳的課題，在上個(gè)月底，終于順利完成了數(shù)據(jù)采集。他跟我講，最令他印象深刻的，是處理一批動(dòng)物血清樣本時(shí)碰到的難題。樣本里存在嚴(yán)重的溶血，直接檢測(cè)干擾非常大。那時(shí)，他依照試劑盒廠家技術(shù)支撐給出的建議，對(duì)樣本做了適當(dāng)?shù)南♂屢约盎|(zhì)校正，還增加了樣本加樣量里邊的回收率實(shí)驗(yàn)，最終得到了可信的數(shù)據(jù)。
老陳感慨，表示，一個(gè)如同靠譜合作伙伴般的好試劑盒，它所提供的并非僅僅是一板抗體以及試劑，而是一套歷經(jīng)驗(yàn)證的解決方案與背后的專業(yè)支持，這能夠助力我們將寶貴的科研時(shí)間以及精力，切實(shí)聚焦于科學(xué)問題自身范疇，而非持續(xù)、反復(fù)地與實(shí)驗(yàn)工具進(jìn)行較勁、作斗爭(zhēng)。
其經(jīng)歷使我深切覺得，于科研這條漫長(zhǎng)的探索之途上，每一環(huán)節(jié)的嚴(yán)謹(jǐn)挑選都極為關(guān)鍵，從一塊可靠的酶標(biāo)板、一支精準(zhǔn)的移液器，到一個(gè)性能穩(wěn)定的ELISA試劑盒，這些看似基礎(chǔ)的“工具”，實(shí)際上構(gòu)成了我們通向真實(shí)數(shù)據(jù)與科學(xué)發(fā)現(xiàn)的堅(jiān)實(shí)橋梁，工欲善其事，必先利其器，在科研投入上做出明智且審慎的選擇，本身便是一種專業(yè)能力和遠(yuǎn)見的展現(xiàn)。
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