去年?秋季時節(jié), 我于?杭州濱江的一家從事生物科技的公司擔(dān)任研發(fā)主管職務(wù), 當(dāng)時手?頭正在趕一個關(guān)于基?因表達(dá)量的項目, 那個時?候團(tuán)隊每日都加班, 目的?僅僅是為了將某條信號通路的檢測精度?提升?上去, 然而卻偏偏在一個環(huán)節(jié)上遭遇了阻礙?, ?此環(huán)?節(jié)便是PCR定?量試劑盒的穩(wěn)定性方面。
我?存在一位被稱作老張?的朋友, 其歲數(shù)比我大兩歲,? 于蘇州的一家?第三方醫(yī)?學(xué)檢驗所工作了六年, 在相關(guān)?圈子里是頗有?名氣的“PCR老炮?”。?他平?常?話語數(shù)量不多,? 然而一旦聊到實驗方面的細(xì)節(jié), 便能夠跟你持續(xù)掰扯長達(dá)兩個小時。他在去年十一月承接了一個規(guī)模較?大的單子, 此次單子具體是要為某三甲醫(yī)院的外包?項目開展一批?呼吸道病原體定量檢測工作。該單?子?規(guī)模不小, 樣本的數(shù)?量?接近三千份, 并且時間方面所施加的壓力較為緊迫, 即便?如此?老?張還是拍著胸脯承接了。
可剛開工就出了幺蛾子。
一直以來, 他們實驗室選用?的是某進(jìn)口品牌的PCR定量?試劑盒, 其?價格不菲, ?然而好在具?備?穩(wěn)定性?？墒? 那?批貨?物因?物流方面出現(xiàn)問題, 被滯?留在?海關(guān), 遲遲無法到達(dá)。由于醫(yī)院方面催促極為急切, ?老張只好臨時從國內(nèi)尋覓替代品。他?挑選了三個國產(chǎn)品牌, 率先?利用自己的質(zhì)?控樣本展開測試。
首輪測試時查出問題?, 存在某品牌試劑盒于低拷貝數(shù)樣本當(dāng)中, Ct值波動?極為顯著?, 復(fù)孔之間相差?可達(dá)1.5個?循環(huán)?, 老張告知我, 如此穩(wěn)定性, 若?應(yīng)用于臨床樣本, 簡直?是自掘陷阱。另一?品牌雖穩(wěn)定,? 然?而擴增效率極?低, 歷?經(jīng)四十個?循環(huán)后?, 熒光信號恰似平底直線, 壓根無法實?施定量。
那時, 他著急?得嘴上冒?出了泡, 跑到我的辦公室, 蹭了?一杯咖啡, 接著嘆氣說道, “?我這?一生從未如此這般求過人, 當(dāng)下必須得祈禱試劑盒能夠爭氣些?！?。?
我向他推薦了一款產(chǎn)品, 是我先前合作過的國內(nèi)一家?廠?商所生產(chǎn)的, 名為“艾科”的PC?R定量試劑?盒, 老?張?對此半信半疑, 不過是死馬當(dāng)作活馬醫(yī), 還?是拿回去進(jìn)行了?一輪測試。待結(jié)果出來之后, 他在凌晨一點給我打電話, 其?語氣?是那種?抑制不住的興奮, 言道: “?兄?弟,? 你此次的推薦很靠譜?！我對三批樣本進(jìn)行了測?試?, ?每一批?均有十?六個復(fù)孔, 其Ct值標(biāo)準(zhǔn)?差僅僅才0.2, 線性范圍可以覆蓋六個數(shù)量極?為豐富的等?級,? 就算是低拷貝的情況也?能夠穩(wěn)穩(wěn)地?保持住?！薄?/p>
隨后, 老張正式借助那?款試劑盒完成了全部?樣本的檢測, 按時將項目交付。醫(yī)院?方面的質(zhì)控反饋已然得出——針對所有樣本定量結(jié)果同金標(biāo)準(zhǔn)的測序數(shù)據(jù)展開比對, 相關(guān)度R2高達(dá)0?.997。老張其后在行?業(yè)群里發(fā)布了一條消息: “國貨如?今著實并不差?, 關(guān)鍵在于你要選準(zhǔn)??！薄?/p>
我問他，那你是怎么選對的？老張掰著手指頭講了幾條。
PCR定量試劑盒怎么選才靠譜？
老張講, 第?一步便是要看線性范圍, 他跟我講,? 好多試劑盒宣稱能夠測十個數(shù)量級, 然而實際?弄下來, ?高拷貝端或者低拷?貝端總會有一個不行?, 他此次選的試劑盒, 廠家給出的線性范圍是101到10?拷貝數(shù)?, ?他實際?檢測下來?, 102拷貝數(shù)以下也能夠?維持穩(wěn)定, 這點在?低豐度靶標(biāo)檢測當(dāng)中尤為關(guān)鍵, 比?如腫瘤液體活檢, ?樣本里突?變基因?可能就幾十個拷貝, 試劑盒要是測不準(zhǔn)確, 那結(jié)果就是?沒用的。
擴增效率不能忽視
老張對擴增?效率予以了強調(diào),? 他講, 在理想情形之下,? PCR擴增效率應(yīng)當(dāng)處于90%至110%的范圍之中?。?倘?若效率變低, ?那么定量結(jié)果將會偏低；要?是效率變?高, 就?有可能出現(xiàn)非特異性?擴增?。他之?前所測的第二個品牌, 其效率僅僅只有75?%, 根本無法使用。而?他最終選?定的那一款,? 效率穩(wěn)定在98%左右, 并且批間差也小。?
穩(wěn)定性才是硬道理
老張專門提及, 他?搞試劑?盒評估時段, 專?門安排執(zhí)行了?綿?延四天時日且從未?中?斷間?歇時間的?測試進(jìn)程, 每一天都運用同?一批?次的試劑盒?去檢測同?樣的樣本。最終所獲取的Ct值出現(xiàn)變易, 其變?動?幅度是小于0.3個?循環(huán)整數(shù)值的。這樣的一組數(shù)據(jù)使得他內(nèi)心安定得以放心——針對實驗室日常開展的?檢測工作而言, 樣本乃是陸陸續(xù)續(xù)地進(jìn)來的, 假使用到的試劑?盒?在批次之間缺乏具備穩(wěn)定特性的狀況, 那么所?產(chǎn)生的結(jié)果便不能夠進(jìn)行橫向上的比較。
售后服務(wù)別忽略
最后老張還講?了一句?, 聲稱國內(nèi)有一些廠?商的售后是?極為到位的, 他當(dāng)時拿到試劑盒之后, 有一個技術(shù)參數(shù)不?太明?確, 在凌晨的時?候發(fā)微信給廠家的技術(shù)支撐, 結(jié)果人家十分鐘就回?了電?話, 還耐心解釋了好半?天,? 這種響應(yīng)速度, 進(jìn)口品?牌基本上是別想達(dá)到的。?
有著“野生代言人”之稱的老張, 如今代言?的是產(chǎn)自國內(nèi)的?試劑盒。于上周, 他給我們發(fā)了消息, 告知?自家實驗室發(fā)生全面換代這件事情, 并表明成本降低了近乎?一半, 然而數(shù)據(jù)質(zhì)量卻變得更好?。他以開玩笑?的方式?表達(dá): ?“要是早曉得?是這樣?, 那以往花的冤枉錢則相當(dāng)沒?必?要。”。
倘若你同樣正?在?開展定量PCR關(guān)聯(lián)的實驗,? 不管是基因表達(dá)剖析、?病原體檢測亦或是拷貝數(shù)變異?分析法, 試劑盒的穩(wěn)定性?直直白白?就決斷了你的?結(jié)果?可不可以被運用。切莫僅?僅去觀?看宣傳?參數(shù), 切實去跑上一批?樣本, ?測量幾個關(guān)鍵指標(biāo), 這比任何事情都要可靠。?
