前一陣子, 老李打電話給我, 那語氣之中流露著一種好不容易才釋懷?的輕松感?。他講, 上個(gè)月他們實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行內(nèi)部比對(duì), 他最終拿到了第?一名。我絲毫不覺得意外?,? 緣由是我清楚他為了這個(gè)?“第一?名?”, 付出了何等大的代價(jià)。
我認(rèn)識(shí)了七年的一位老?朋友是老李, 他處?在?生物試劑這個(gè)行業(yè)里, 在?一家第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)?擔(dān)任免疫檢測(cè)組組長的職務(wù),? 關(guān)于 ELISA 檢測(cè)試劑盒的使?用心得體會(huì)是平?常我們交流得最多的內(nèi)?容, 從事這個(gè)行業(yè)的人都清楚, 像 E?LISA 這種?東西, 看上去顯得?簡(jiǎn)單, 然而實(shí)際做起來其中所蘊(yùn)含的門道極其深?yuàn)W?, 稍微一不小心, 整批實(shí)驗(yàn)就要面臨?報(bào)廢的?結(jié)果。
事情得從去年十月份講起。
那個(gè)時(shí)間段, 老李所?在的公司承接了一個(gè)源自某?大型養(yǎng)殖集團(tuán)的訂單,? 此訂單要求檢測(cè)一批血清樣本里面的抗體水平。這批樣本的數(shù)量極為?龐大, 快要接近兩千份了, 而客戶僅僅給?予五?天的時(shí)間來出具報(bào)告。老李在?當(dāng)時(shí)拍著胸?脯?表明沒有問題, 畢竟他們的實(shí)驗(yàn)室長期同 ELI?SA 檢測(cè)試劑盒進(jìn)行業(yè)務(wù)?往來, 其經(jīng)?驗(yàn)就算是相當(dāng)?shù)刎S富了。
為什么ELISA檢測(cè)試劑盒結(jié)果總是不穩(wěn)定？
第一輪實(shí)驗(yàn)跑下來，老李就發(fā)現(xiàn)了問題。
E?LISA檢測(cè)試劑盒處于同一批次, 操作流程相同, 然而三塊板呈現(xiàn)的結(jié)果卻無法對(duì)應(yīng)。有的板子顯?色程度?深至?好似墨黑, 有的板?子顯色程度淺到猶如清冽白水, ?另外還?有一塊板子根本不存在?梯度?變化。彼時(shí)老李一下子就陷入了茫然狀態(tài)。
他對(duì)我講, 他?最初的?反應(yīng)是試劑盒自身存在問題, 畢竟在面向市場(chǎng)的ELI?SA檢測(cè)?試劑盒領(lǐng)域里, 能夠?找到的品牌數(shù)量?極多, 在質(zhì)量方面呈現(xiàn)出?有好有壞不一致的?狀況, 所以偶然地遇見到一批屬于質(zhì)?量較差的產(chǎn)?品?發(fā)生的概率不是完全不存在的, 接著他?急忙去?跟供應(yīng)商取得聯(lián)系, 供應(yīng)商那邊的態(tài)度表現(xiàn)得?相當(dāng)親和, 并且?沒有?講任何多余的話語就馬上發(fā)送了新的批次過來。
可新批次到了之后，情況并沒有明顯好轉(zhuǎn)。
老李?在跟我于復(fù)盤之際?講道?, 在那段日子里, 他差不多每日都處于加班?狀態(tài), 夜里十一點(diǎn)之時(shí), 仍舊于實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中查看板子。他運(yùn)用了各式各?樣的辦法, 改換不?同廠家所生產(chǎn)的EL?ISA檢測(cè)試劑盒, ?對(duì)孵育時(shí)間進(jìn)行?調(diào)整,? 甚至于親自?去到洗板機(jī)旁邊, ?瞅著每一回洗滌液徹底排凈。然而?結(jié)?果時(shí)而良好時(shí)而糟糕, 根本不存在任何規(guī)律能夠依照。
ELISA檢測(cè)試劑盒操作中容易忽略的細(xì)節(jié)有哪些？
真正讓老李開始懷疑自己的，是十一月初的一場(chǎng)內(nèi)部復(fù)盤會(huì)。
會(huì)議期?間,? 那個(gè)剛到不久的年輕小伙?子不經(jīng)意地?詢問道: “李哥, 咱們?所使?用的這個(gè)ELISA檢測(cè)試劑盒, 其說明?書上面所標(biāo)注的?包?被?溫度?與室溫之間是否存在著特定?的?講究呢? 我留意到?南?方地區(qū)?冬季的室溫與夏?季的室溫差異是頗為?顯著?的?！?。
這一句話，像一根針扎在老李腦子里。
他立刻意識(shí)到，問題可能出在——溫度。
他們實(shí)驗(yàn)室的?空調(diào), 被?安裝在了實(shí)驗(yàn)區(qū)的?極東邊的位置?, 然而, ?ELISA操作臺(tái)卻是處于最?西?邊的地?方。在十一月份時(shí)候的上海,? 室內(nèi)的溫度并?非是恒定不變的。尤其是靠近?西邊這一側(cè)的實(shí)驗(yàn)臺(tái), 當(dāng)下午兩點(diǎn)時(shí)太陽直接照射進(jìn)來, 臺(tái)面的溫?度?能夠比室內(nèi)的平均數(shù)?值高出三至四度?。
ELISA檢測(cè)試劑盒?的反應(yīng)進(jìn)程對(duì)于溫?度極為敏感, 包?被時(shí)存?在自身最適宜的?溫度范圍, 封閉階段有它特定適宜的溫度區(qū)間, 加?樣步驟也有?其最為合適的溫域, 孵?育環(huán)節(jié)同樣有自己最恰當(dāng)?shù)臏囟却翱? 一旦這個(gè)窗口發(fā)生偏移,? 反應(yīng)效率就會(huì)大幅降低, 然而老李以前?從來都沒有認(rèn)真去測(cè)量過實(shí)驗(yàn)臺(tái)上的實(shí)際溫度,? 僅?僅是依照空調(diào)?所設(shè)定的恒溫值來進(jìn)行操作。
他很快?就做了?一?回驗(yàn)證, 先是分?別?在下于不同時(shí)分所處不一?樣位置之上, 運(yùn)用同一盒ELISA檢測(cè)試劑?盒去把標(biāo)準(zhǔn)品給?進(jìn)行測(cè)?試。其后結(jié)果驗(yàn)證了?他原有的猜想, 那便是當(dāng)臺(tái)面溫?度偏?高之際, 顯色的程?度就會(huì)過于?深濃, 而當(dāng)溫度偏低之時(shí), 反?應(yīng)?就?并不完整, 且背景的值還非常出奇之高。
這個(gè)發(fā)現(xiàn), ?促使老李感到驚訝?, ?之后, 又讓他完全意識(shí)到, 僅僅具備經(jīng)驗(yàn), 實(shí)則不行?。儀器設(shè)備, 環(huán)境條件, 人為操作, ?當(dāng)中任何一個(gè)環(huán)節(jié)所出?現(xiàn)的偏差, 都能夠直接對(duì)ELISA檢?測(cè)試劑盒的最終結(jié)果產(chǎn)生影響。
如何選擇高質(zhì)量的ELISA檢測(cè)試劑盒？
老李在找到了根本原因之后, 并沒有?著急去開展做實(shí)驗(yàn), 而是首?先花費(fèi)?利用了?兩天的時(shí)間, 將實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)域的環(huán)境控制體系再次重新整理梳理了一遍?。
他購置了三支具備高精度的紅外溫度計(jì), 將它?們分?別放置于?操作臺(tái), 放置于?孵育箱,? 放置于試劑存放區(qū)。他?另專門訂制了?一個(gè)能夠移動(dòng)的恒溫操作臺(tái), 以此確保在每一回進(jìn)行加樣?時(shí), 溫度波動(dòng)控制在正負(fù)零點(diǎn)五度以內(nèi), 確保在每一次進(jìn)行?孵育時(shí), 溫度波動(dòng)同樣控制在正負(fù)零點(diǎn)五度?以內(nèi)。
在完成那些硬件改進(jìn)之后, 老李再度著手重?新探?究ELISA檢測(cè)試劑盒的挑選標(biāo)?準(zhǔn)。他對(duì)我講, 以往挑選試劑盒?時(shí), 他?著重考量?jī)r(jià)?格?與品牌?。然?而歷經(jīng)這?回的教訓(xùn), 他歸?納出了一套屬于自己的?篩選邏輯。?
關(guān)注看試劑盒的批間差, 這屬于ELISA?檢測(cè)試劑盒質(zhì)量的核心指標(biāo)范疇, 對(duì)于?好的試?劑盒而言, 不同批次之間?的性能理應(yīng)高度一致, 老李當(dāng)下會(huì)?要?求供應(yīng)商提供接連的?三個(gè)批次的質(zhì)控報(bào)告,? 將重點(diǎn)放在對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及截距方面。
查看試劑盒有關(guān)穩(wěn)定性的說明, 一部分ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)于運(yùn)輸以及儲(chǔ)存條?件有著極為嚴(yán)格?的要?求,? 哪怕只?是稍微偏離溫度范圍便容易失效, 老李如今傾向于更?具耐受性的產(chǎn)品, 像能夠在二攝氏度至?八十度環(huán)境里穩(wěn)定?保存超過十二個(gè)月的那些。
盯著試劑盒去瞧其背景信號(hào), 這通常是那種極易被漠視不?見?然而?卻相當(dāng)關(guān)?鍵的參數(shù), 有著高背景值的 ?ELISA 檢測(cè)試?劑盒?, ?會(huì)致使弱陽性樣本給淹沒掉?, 從而直接對(duì)檢測(cè)的靈敏度產(chǎn)生影響, 老李現(xiàn)今?每逢正?式實(shí)驗(yàn)開展之前, ?都會(huì)先用空白對(duì)照走上一趟以便確定背景值處于合理范?圍之內(nèi)。
ELISA檢測(cè)試劑盒的保存條件對(duì)結(jié)果影響有多大？
將溫度與試劑盒選擇的問題予以解決之后, 老?李又?察覺出一個(gè)新隱患, 那?便是樣本的保存。
在?去年的十二月份期間, 當(dāng)中?的他們?承接了?一批準(zhǔn)備發(fā)往新疆地區(qū)的樣品快?遞。因?yàn)?物流所需要耗費(fèi)?的?時(shí)間?比較長, 再加上?當(dāng)?shù)氐臍鉁爻掷m(xù)?偏低, 最終樣本到達(dá)的時(shí)候出現(xiàn)了顯著的凍融痕跡。
老李講, 他先前覺得?血清樣本凍一下沒什么?了不?起的, ?最多也就是部?分蛋?白出現(xiàn)沉淀。不?過后來他特意去查?了資料，發(fā)覺反復(fù)凍融能?夠致使樣本里面的?抗體結(jié)構(gòu)產(chǎn)生改變, 進(jìn)而對(duì)與EL?ISA檢測(cè)?試劑盒里包被抗原的?結(jié)合效率造成影響。?
他在當(dāng)場(chǎng)進(jìn)行了一回比對(duì)實(shí)驗(yàn), 其所做的是, 將同?一份血清?拆分成兩份,? 一?份徑直去進(jìn)行檢測(cè), 另一份歷經(jīng)?反復(fù)凍融三次之后再予以檢測(cè), 而結(jié)果?著實(shí)令人相當(dāng)震驚, 經(jīng)?過凍融?處理后的樣本, 其檢測(cè)得出的值竟然足足下降了高達(dá)百分之三十。
從那之后, 老?李設(shè)定了一個(gè)準(zhǔn)則, 所有送去檢驗(yàn)的樣本?, 一定要具備完整的冷?鏈運(yùn)輸?記錄, 抵達(dá)實(shí)驗(yàn)室之后, 馬上分開包裝進(jìn)行保存, 嚴(yán)格禁止整管多次凍融。他還特意購置了一批能夠?追溯溫度的數(shù)?據(jù)記錄儀, 放?置在樣?本運(yùn)輸箱內(nèi), 全程對(duì)體溫變化進(jìn)?行監(jiān)測(cè)。
三月份之際, 老李?身處的公司,? 要?參與一場(chǎng)行業(yè)能力驗(yàn)證, 這是經(jīng)由權(quán)威機(jī)構(gòu)所組?織的?盲樣比?對(duì), 其結(jié)果與實(shí)驗(yàn)室的資質(zhì)認(rèn)定直接相?關(guān)聯(lián)。
他說,? 當(dāng)時(shí)老李心頭是有底?的。歷經(jīng)過去?幾?個(gè)月的系統(tǒng)整頓?, 他們實(shí)驗(yàn)室的ELISA檢測(cè)試劑盒操?作?流程已然相當(dāng)規(guī)范了。于環(huán)境控制部分、?試劑驗(yàn)收部分、樣本處理部?分以及結(jié)果判讀部分而言, 每一個(gè)環(huán)節(jié)都存有明確的SOP, 還有明確的質(zhì)?控標(biāo)準(zhǔn)。
意料之中?的是, 他們組針對(duì)盲樣所開展的檢測(cè)?得出的結(jié)果, 和參考值達(dá)成了全然的契合, 于所有參與評(píng)選的單?位里, 位?列第一。
我的大拇指, 是在微信上?, 于老李給我發(fā)來結(jié)果?截圖之際回復(fù)給他的。他言道: “以往總覺自身經(jīng)驗(yàn)充足, ?對(duì)那些基礎(chǔ)?事物予以輕視?。此次算是得到一?次教訓(xùn), ELISA檢測(cè)?試劑盒這事, 馬虎是絕?不容許的?！?。
我?清楚,? 他言并非客套之語。于那狼狽至極的日子當(dāng)?中，他切實(shí)是逐個(gè)細(xì)節(jié)深入鉆研領(lǐng)會(huì)了。
ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)異常結(jié)果的排查思路
假如你同樣是運(yùn)用?ELISA檢測(cè)試劑盒去開展實(shí)?驗(yàn),? 而且老是碰到結(jié)果處于不穩(wěn)定?狀態(tài)、重復(fù)性表現(xiàn)欠佳、背景為過高情形這些問題, ?那么不妨參照一下老李所總結(jié)出來的排查思路句號(hào)。
先去查詢環(huán)境溫度, 運(yùn)用溫度計(jì)實(shí)際測(cè)量一下你的操作臺(tái)面以及孵育?環(huán)境, 千萬不要單純只查看空調(diào)設(shè)定值；一旦溫度偏差超出兩度, 那么反應(yīng)結(jié)果便極有?可能會(huì)?呈現(xiàn)出顯著差異了。?
再?次查一下?試?劑盒的儲(chǔ)存及其使用方面, 去確認(rèn)你?的? ELISA 檢測(cè)試劑盒是不是在規(guī)?定的?溫?度之下保存著, 是不是處在有效期之?內(nèi), 是不是在?運(yùn)輸?的過程?當(dāng)中出現(xiàn)了溫?度異常這種情況, ?試劑盒當(dāng)中自帶的諸如洗?滌液?、?稀釋液等輔助試劑, 同樣也要?進(jìn)行同?步檢查。
對(duì)樣本的處理展開查看, 樣本有沒有出現(xiàn)重?復(fù)凍融現(xiàn)象, 有沒有充分進(jìn)行離心?從而去除沉淀, 稀釋?倍數(shù)是不是準(zhǔn)確無誤, 這些細(xì)節(jié)盡管屬于基礎(chǔ)范疇, 然而常常是最容易出現(xiàn)問題的所在之處。
進(jìn)行操作流程的查詢, ?加樣順序是?不是規(guī)范的, 洗滌是不是徹?底的, 顯?色時(shí)?間有沒?有被嚴(yán)格?控制, 每一步操作都得有?明確的時(shí)間?節(jié)?點(diǎn)以及標(biāo)準(zhǔn)。
進(jìn)行數(shù)據(jù)核查判讀。酶?標(biāo)儀的波長?設(shè)?定是否當(dāng)屬準(zhǔn)確無誤?？空白對(duì)照以及?標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)值是否處于正常范圍以內(nèi)? 陰陽性對(duì)照是否契合試劑盒說明書所規(guī)定的要求條件呢?
如今只要做ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)前, 老?李每次都會(huì)花費(fèi)十分鐘將這些點(diǎn)逐一?仔細(xì)?過一遍, 這個(gè)習(xí)慣,? 幫他?規(guī)避了好多低?級(jí)?的錯(cuò)誤?。
實(shí)?際上反反復(fù)復(fù)來講, ELISA?檢測(cè)試劑盒好似一?把優(yōu)良之刀, 刀本身擁有的質(zhì)量盡管是重要的, 更具決定?性意義?的卻是運(yùn)用這把刀的人。唯有實(shí)實(shí)在在領(lǐng)會(huì)了其原理?, 敬?重其操作規(guī)范, 留意每一項(xiàng)看似并不起眼的?細(xì)節(jié)?, 才?能?夠令這把刀展現(xiàn)出應(yīng)有的水準(zhǔn)。
老李所擁有的經(jīng)歷?, 聽聞起來好似那?般是某一個(gè)人的事情, 然?而事實(shí)上, 我堅(jiān)信眾?多從事免疫檢測(cè)的友人?都或多?或少遭?遇過相似的狀況。哪一個(gè)?人不是歷?經(jīng)從踩入坑洼再從坑洼?攀爬?而出這?樣的全程一步步走來的?呢。
要是此刻你同樣因?為? ?ELIS?A 檢測(cè)試劑盒?的結(jié)果而陷入極度困擾之中, 別著急。首?先要把?周?圍環(huán)?境妥善把控好, ?精準(zhǔn)挑選適配的試劑盒, 將樣本妥善處理?妥當(dāng)?, 務(wù)必把整個(gè)流程?規(guī)范走好。一步?緊接著一步有序操辦, 遲早能擺?脫困?境迎來轉(zhuǎn)機(jī)。
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