當(dāng)初為何一頭扎進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)這個(gè)坑
去年夏天, 我結(jié)識(shí)了一位名為阿杰的友人, 他于一家從事生物科技的公司擔(dān)任研發(fā)助理一職。該公司主要致力于抗體藥物的早期篩選工作, 他日常的工作便是與多種多樣的細(xì)胞進(jìn)行接觸交流。老實(shí)講, 剛踏入這個(gè)行業(yè)的時(shí)候, 他對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)這件事情簡(jiǎn)直就是一竅不通之人。公司里的前輩告知他, 這屬于基礎(chǔ)性的技能, 要是做不好細(xì)胞培養(yǎng), 后續(xù)的實(shí)驗(yàn)通通都是白費(fèi)功夫。阿杰當(dāng)時(shí)并未將此放在心上, 認(rèn)為不就是培育細(xì)胞, 和種植花卉、養(yǎng)護(hù)草木大致相同, 能有多么困難?
細(xì)胞培養(yǎng)入門第一步就讓他崩潰了
實(shí)際上真正著手去做之后, 阿杰才發(fā)覺(jué)自己當(dāng)初實(shí)在是太幼稚天真了。在2025年9月的時(shí)候, 他所接到的首個(gè)任務(wù)乃是培育一批HEK293細(xì)胞, 以此來(lái)供后續(xù)的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)使用。他極其嚴(yán)格地依照實(shí)驗(yàn)室SOP進(jìn)行操作, 先是消毒, 接著配制培養(yǎng)基, 然后進(jìn)行傳代, 每一個(gè)步驟都絲毫不敢有所疏忽大意。然而三天過(guò)后, 通過(guò)顯微鏡觀察一看, 細(xì)胞的狀態(tài)糟糕透頂, 死掉的細(xì)胞漂浮了一大堆。就在那一天下班之后, 他坐在實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中凝望著培養(yǎng)箱發(fā)呆, 心里暗自思忖著這究竟是在哪個(gè)地方出現(xiàn)了問(wèn)題呢?
細(xì)胞培養(yǎng)中無(wú)菌操作到底有多重要
阿杰跑去尋找?guī)膸熜掷蟿⑷フ?qǐng)教, 老劉看了一下他的操作視頻, 直接指出問(wèn)題: “你手消毒未達(dá)到要求, 操作時(shí)話語(yǔ)過(guò)多, 氣溶膠造成了污染?！卑⒔苓@才清楚，細(xì)胞培養(yǎng)里最為關(guān)鍵的實(shí)際上并非培養(yǎng)基價(jià)格多高、血清質(zhì)量多好, 而是無(wú)菌意識(shí)。自那以后, 他每次操作前都會(huì)使用75%酒精擦拭手套以及臺(tái)面, 操作時(shí)全程佩戴口罩不講話, 就連呼吸也盡力放輕。兩周過(guò)后, 他再次培養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)顯著好轉(zhuǎn), 污染率從40%降低到了5%以下。
培養(yǎng)基配方怎么選才能提高細(xì)胞培養(yǎng)成功率
2025年10月中旬, 阿杰著手負(fù)責(zé)一個(gè)更為復(fù)雜的項(xiàng)目, 這個(gè)項(xiàng)目是培養(yǎng)原代肝細(xì)胞, 這種細(xì)胞格外嬌氣, 對(duì)于培養(yǎng)基有著極高要求。他嘗試了市面上好些商業(yè)培養(yǎng)基, 然而細(xì)胞貼壁率均未達(dá)到30%。老劉提議他查閱一些參考資料, 阿杰耗費(fèi)三天時(shí)間翻閱文獻(xiàn), 發(fā)覺(jué)原代肝細(xì)胞需添加特定生長(zhǎng)因子與基質(zhì)成分。他依據(jù)文獻(xiàn)調(diào)整了配方, 還自行摸索著優(yōu)化了pH值與滲透壓, 最終將貼壁率提升到了75%。那段日子, 他差不多天天都徘徊于實(shí)驗(yàn)室之中, 其手機(jī)內(nèi)部存儲(chǔ)滿了形形色色細(xì)胞的照片, 每日都在對(duì)生長(zhǎng)曲線予以比對(duì)。
細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染問(wèn)題怎么處理
在經(jīng)歷三個(gè)月之后, 阿杰對(duì)于絕大部分常見(jiàn)問(wèn)題已然能夠嫻熟應(yīng)對(duì)。然而, 2026年1月出現(xiàn)的一場(chǎng)意外, 再度給了他一番教訓(xùn)。那一日, 他打算收獲一批用于RNA提取的細(xì)胞, 結(jié)果于顯微鏡之下瞧見(jiàn)了小黑點(diǎn), 即支原體污染。依據(jù)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定, 一旦發(fā)覺(jué)支原體污染, 整批細(xì)胞均需舍棄, 并且所有器材都得進(jìn)行徹底消毒。阿杰心疼至極, 緣由在于那批細(xì)胞他已然培育了將近兩周的時(shí)間。他當(dāng)時(shí)甚至萌生出用抗生素處理一番后再繼續(xù)使用的念頭, 可是理智告知他不能去冒險(xiǎn), 畢竟實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造假較浪費(fèi)時(shí)間而言更為可怕。
細(xì)胞培養(yǎng)中的傳代時(shí)機(jī)怎么把握才算對(duì)
自那之后, 阿杰形成了一種習(xí)慣, 每次于細(xì)胞培養(yǎng)之前, 都會(huì)先行查閱一回?cái)?shù)據(jù)庫(kù)以及參考資料, 去知悉此種細(xì)胞的最優(yōu)培養(yǎng)密度與傳代比例, 像CHO細(xì)胞通常密度達(dá)80%左右便需傳代, 而HUVEC細(xì)胞密度到60%就應(yīng)當(dāng)著手準(zhǔn)備。他還掌握了一項(xiàng)小竅門, 借由觀察培養(yǎng)基的顏色改變以及細(xì)胞形態(tài), 預(yù)先判定代謝狀態(tài), 不再刻板地等待固定時(shí)間。2026年2月, 他所負(fù)責(zé)的一批細(xì)胞培養(yǎng)一連三批均順利收獲, 數(shù)據(jù)極為漂亮, 組里的大老板都特意點(diǎn)名表?yè)P(yáng)了他。
細(xì)胞培養(yǎng)的凍存和復(fù)蘇技巧讓他少走了很多彎路
阿杰跟我談及這段經(jīng)歷之際, 極為著重地提到了凍存以及復(fù)蘇這兩個(gè)環(huán)節(jié), 他講道, 好多人僅僅留意培養(yǎng)進(jìn)程, 卻忽視了凍存液的品質(zhì)以及降溫速率, 他先前正是由于徑直采用-80度冰箱徑直進(jìn)行凍存, 進(jìn)而致使細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)后活率不足50%, 之后他查閱了參考資料, 轉(zhuǎn)而使用程序降溫盒, 并且在凍存液當(dāng)中添加了10%的DMSO, 復(fù)蘇的時(shí)候動(dòng)作得迅速, 解凍之后即刻用預(yù)熱的培養(yǎng)基加以稀釋, 如今他所凍存的細(xì)胞復(fù)蘇活率基本上全都能夠達(dá)成90%以上, 他還歸納出了一則口訣: “慢凍快融, 細(xì)胞不愁。”。
從細(xì)胞培養(yǎng)新手到團(tuán)隊(duì)里的技術(shù)骨干
現(xiàn)在，阿杰已然成為他們實(shí)驗(yàn)室里負(fù)責(zé)細(xì)胞培養(yǎng)的人, 新來(lái)的同事都會(huì)先跟著他學(xué)習(xí)一周。在2026年3月, 公司派遣他去參加行業(yè)內(nèi)的技術(shù)交流會(huì), 在會(huì)上他分享了自己在原代細(xì)胞培養(yǎng)方面所擁有的經(jīng)驗(yàn)。他跟我講, 回過(guò)頭去看這幾個(gè)月, 最大的一種感受便是: 細(xì)胞培養(yǎng)這件事情, 看上去顯得簡(jiǎn)單, 實(shí)際上當(dāng)中的每一個(gè)細(xì)節(jié)都極有可能決定最終的成敗。不管是無(wú)菌操作方面、培養(yǎng)基的選擇、傳代的時(shí)機(jī), 又或者是凍存復(fù)蘇, 每一樣都需要于實(shí)踐過(guò)程當(dāng)中反復(fù)地去打磨。
要是你同樣正為細(xì)胞培養(yǎng)而發(fā)愁, 別心急, 阿杰可以做到的, 你同樣可以。重點(diǎn)在于靜下心來(lái)領(lǐng)會(huì)每一個(gè)步驟的原理, 而非機(jī)械似地重復(fù)進(jìn)行操作。多去查閱參考資料, 多與有經(jīng)驗(yàn)的人展開(kāi)交流, 將每一次的失敗都視作學(xué)習(xí)的契機(jī)?？傆心敲匆惶? 你也能夠把細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)作平常之事, 輕輕松松獲取出彩的數(shù)據(jù)。
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