為什么這篇文章值得你讀完？
倘若你正處于從事科研實驗的進(jìn)程之中, 特別是針對免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)或者腫瘤領(lǐng)域方向展開的研究, 那你必定是知曉ELISA試劑盒此物的。它身為蛋白定量的“金標(biāo)準(zhǔn)”, 同樣也是無數(shù)課題得以順利開展的基石所在。然而你或許也遭遇過這般狀況: 試劑盒購置回來后, 所制作而成的標(biāo)準(zhǔn)曲線糟糕透頂, 針對樣本進(jìn)行檢測獲得的結(jié)果其重復(fù)性相當(dāng)之差, 數(shù)據(jù)根本毫無可用之處, 論文還被審稿人緊緊揪住實驗方法而加以質(zhì)疑。在這篇文章當(dāng)中, 我將會講述一位朋友的真切經(jīng)歷, 他所踩過的坑洼、所繞過的曲折路徑, 以及最終究竟是怎樣憑借一個方法將整個課題從瀕臨失敗的邊緣成功挽救回來的。對你有用，看完你就知道了。
我朋友老趙，一個被ELISA試劑盒折磨的博士
我大學(xué)同學(xué)是老趙, 他處于博士生三年級階段, 進(jìn)行炎癥性腸病分子機(jī)制的研究, 這個人做事認(rèn)真, 實驗記錄寫得端端正正, 只是運氣欠佳。去年秋天, 他耗費兩個月時間做一批ELISA實驗, 因試劑盒的緣故, 全部作廢。那天他給我打電話時, 聲音略有顫抖, 說: “你可曉得那種感受? 樣本快要用光, 抗體買不到, 導(dǎo)師日日催促, 我感覺自己連活的心兒都快沒嘍?！薄?/p>
我向他詢問究竟是怎么一回事, 他講道, 他購置了一個宣稱具備高靈敏度的科研ELISA試劑盒, 其價格并非低廉, 然而在拿回之后, 標(biāo)準(zhǔn)曲線的R方值無論如何都難以達(dá)到0.99, 最低檢測限更是比說明書所寫的高出了數(shù)倍之多。他再三進(jìn)行了三次操作, 更換了不同的稀釋液, 以及不同的孵育時間, 卻依然未有成效。最終他查閱文獻(xiàn)方才發(fā)覺, 那個品牌的試劑盒在文獻(xiàn)之中被眾多人指責(zé)存在批次間差異過大的情況。他懊悔至極, 只是樣本已然不復(fù)存在, 時間也已然被白白浪費了。
踩坑之后，他到底該怎么辦？
試劑盒選不對，課題能卡多久？
老趙過后跟我講, 他那時最為焦慮的并非實驗失手, 乃是不清楚問題究竟出在何處。他認(rèn)為自身操作不存在問題, 儀器同樣無問題, 那么問題不外乎試劑盒自身。然而市面上科研 ELISA 試劑盒品牌數(shù)量眾多, 該如何去挑選呢? 他以往的標(biāo)準(zhǔn)較為簡樸, 無非是查看價格, 查看銷量, 查看發(fā)貨速度的快慢。但此次他發(fā)覺, 這些通通都不靠譜。
他開始投入認(rèn)真的研究, 在Pubmed上搜索自身研究領(lǐng)域的文獻(xiàn), 專門留意大家使用的ELISA試劑盒的品牌, 他發(fā)現(xiàn), 有的品牌在炎癥因子檢測方面被引用達(dá)上百次, 這表明大家一致認(rèn)定其可靠性, 他還詳細(xì)查看了試劑盒的說明書細(xì)節(jié), 諸如有無交叉反應(yīng)驗證以及有無批次間一致性報告, 他表示, 此前這些細(xì)節(jié)根本未曾留意，直至現(xiàn)在才知曉, 這乃是挑選科研ELISA試劑盒的關(guān)鍵所在。
他用了一個什么方法，救回了課題？
去年11月, 老趙處的項目時段已然處于最為緊急的關(guān)頭, 那里存放著, 有最后的一批且具珍貴特質(zhì)的腸道組織樣本，若屆時做不出數(shù)據(jù), 他延畢的狀態(tài)就要出現(xiàn)了, 于是咬了咬自己的牙，購置了一款品牌上他之前并不熟悉的試劑盒, 為何他敢做這樣的購買行為? 是由于他在一篇影響因子超出10分的文章瞧見了, 此品牌的試劑盒被用于檢測跟他課題在指標(biāo)方面完全相同的情況, 他對那篇文章所涉的實驗方法給予了信任。
結(jié)果究竟如何呢? 他在拿到試劑盒之后, 先行開展了預(yù)實驗。標(biāo)準(zhǔn)曲線的R方值為0.998, 其最低檢測限與說明書實現(xiàn)了完美匹配。當(dāng)時他激動得險些在實驗臺前落淚。他講道, 就在那一刻他才領(lǐng)悟到, 選對科研ELISA試劑盒, 所節(jié)省的可不單單是金錢, 簡直就是半條命。后來他借助那個試劑盒完成了所有樣本的檢測, 數(shù)據(jù)之漂亮令他的導(dǎo)師都不禁為之驚訝。今年年初, 那篇文章已然被接收了。
你的課題會不會也遇到同樣的問題？
你也在為實驗重復(fù)性差發(fā)愁嗎？
老趙所經(jīng)歷的故事并非是單獨的個例, 我身旁做科研的友人, 十個當(dāng)中有七個在利用ELISA試劑盒環(huán)節(jié)出過狀況, 有的是由于試劑盒靈敏度欠缺夠的緣由, 檢測不出低濃度的樣本, 有的是因為試劑盒具有特異性能差的狀況, 背景值高得極為離譜, 又有的是鑒于批次間隔存在差異性, 導(dǎo)致同一個樣本次前和次后兩次得出的結(jié)果相差達(dá)到了50%, 而這些問題, 歸根結(jié)底是在選品方面出現(xiàn)了問題。
要是此刻你正遭遇相似困難, 我給出的提議蠻簡潔: 別僅盯著價格以及宣傳, 去文獻(xiàn)里頭查一查那個牌子、那個貨號有無被同行使用過。要是存在, 并且用到的文章品質(zhì)挺好, 那就放心買?？蒲蠩LISA試劑盒的關(guān)鍵價值, 向來都并非是低廉, 而是具備可重復(fù)性、能夠被驗證。
怎么判斷一個試劑盒到底靠不靠譜？
老趙曾跟我講過他的經(jīng)驗, 我進(jìn)行了一番總結(jié), 大致有三條。其一, 查看說明書之中是否存有詳盡的交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)。一個較為靠譜的科研ELISA試劑盒, 理當(dāng)會羅列出它與哪些類似蛋白不存在交叉反應(yīng)。其二, 瞧瞧有無批次間一致性報告。品質(zhì)優(yōu)良品牌的試劑盒, 每一批次都會開展質(zhì)控舉措, 相關(guān)數(shù)據(jù)公開從而能夠進(jìn)行查閱搜索。其三, 瞅瞅有無針對你的樣本類型進(jìn)行過驗證。好比你所開展的是小鼠組織勻漿方面的工作, 那么試劑盒說明書里面最好明確寫明了“已驗證小鼠組織樣本”。
無數(shù)人在購置之前, 壓根不懂得去查詢這類情形下的信息, 然而老趙陳述, 自他掌握如此的察看做法以降, 他便再也未曾經(jīng)歷失敗狀況。
最后說幾句
當(dāng)撰寫此篇文章之際, 我的腦海之中始終縈繞著老趙那日于電話里所發(fā)出的聲音?？蒲械倪@條道路并非輕而易舉, 每一項數(shù)據(jù)的背后皆是時間以及心血的凝聚?？蒲蠩LISA試劑盒看似是個微小的事物, 然而其質(zhì)量的優(yōu)劣, 或許會直接對一個課題的成敗產(chǎn)生決定性作用。期望老趙的經(jīng)歷, 能夠助力你減少一些前行途中的彎路。要是當(dāng)下你恰好也正為選取試劑盒而發(fā)愁, 不妨?xí)呵彝Ｏ? 花費半小時去查閱一番文獻(xiàn), 說不定就能為你節(jié)省未來三個月的時間了。
