那段時間, 老張給我通電話, 講他搞課題陷入困境將近兩個月, 精神狀態(tài)糟糕透頂。他是我讀研期間同實驗室的好友, 過后來到省里一家從事生物技術的公司擔任研發(fā)主管, 稱得上行業(yè)里歷經世事多年的熟練之人。他所遭遇的情形, 講出來許多做細胞實驗的朋友大概都會有相同感覺。
做一項有關組織修復的體外研究, 老張的項目需要大量的兔原代細胞, 起初他沒太在意, 認為原代細胞按文獻步驟操作就可以, 上手以后問題不斷: 細胞得率低；只能勉強分出一批, 可貼壁率差；活性測量結果不理想, 這樣折騰近倆月, 嘗試三種酶消化方案與兩批培養(yǎng)基仍未得到能夠穩(wěn)定增殖的細胞。
他跟我講, 在那段日子里, 他差不多每日都呆在超凈臺跟前, 眼睛都因熬夜而發(fā)紅了。最讓他厭煩的是, 每回分離出來的細胞數(shù)量都并非穩(wěn)定狀態(tài), 致使后續(xù)的實驗規(guī)劃一而再再而三地更改, 整個團隊的進展都被耽擱了。老張講, 他那時甚至疑惑是不是自身的操作方法有所退步了。
而后究竟怎么解決的呢? 是他所在公司的一位資深前輩前來進行指導, 提及當下行業(yè)范圍內有人已然開始運用商業(yè)化的兔原代細胞產品, 而此種產品質量具備穩(wěn)定性, 批次之間的差異極為有限, 能夠有效省去諸多前期摸索所需的時間。老張最初的時候還認為使用商業(yè)細胞算是某種程度上的偷懶行為, 然而卻難以承受項目所帶來的壓力, 最終還是嘗試著采購了一批。
等到, 這一批兔原代細胞被拿到手上之后, 他萬分驚訝地覺察到, 細胞的形態(tài)呈現(xiàn)出驚人的均一狀態(tài), 活力檢測所獲取的結果遠遠超越了預先的期望。他依據說明書當中所推薦的培養(yǎng)條件去進行操作, 細胞的貼壁速度極為迅速, 可以看到增殖曲線同樣是極為美觀非常漂亮的。老張講, 就在那一個時刻他內心感覺自己在之前兩個月所經歷的辛苦全部都是白費了, 要是早一點知曉存在這樣成熟的產品, 又何必自己苦苦死磕鉆研呢。
兔原代細胞分離到底有多難？
后來老張找我一起復盤, 前期他那般痛苦, 關鍵是兔原代細胞分離沒預想那般簡易, 兔子組織致密程度、細胞脆弱性, 與小鼠、大鼠差異極大, 他起初按鼠源細胞消化條件處理, 結果細胞損傷慘重, 大量死去。
此外, 兔原代的細胞, 針對消化酶的濃度以及時間, 是極為敏感的。他曾試著把胰酶的濃度予以降低, 將消化時間縮短, 以此情況下，細胞卻又不易從組織里完全解離, 致使得率極低。他隨后查閱文獻才明白, 不同的組織來源, 像腎臟、肝臟或者血管之類, 所需的消化體系差異極大, 根本不存在通用的簡易方案。
為什么自己分離的兔原代細胞活性總是不行？
哪怕有幸地分離出充足數(shù)量的細胞, 活性的疑難狀況接下來又出現(xiàn)了。老張察覺到, 他所分離出來的那些細胞, 存活率能夠達到百分之八九十已然算是極為幸運了。許多情形下, 剛剛分離出來看起來狀態(tài)尚可, 經過一夜的培養(yǎng)之后, 漂浮著的死亡細胞便會增多起來。
他剖析緣由, 一方面乃是操作進程里的物理損害, 像剪碎組織之際的機械力、反復吹打之時的剪切力, 這些都會致使細胞膜遭受損傷。另一方面, 不同批次動物的年齡、健康情形、飼養(yǎng)環(huán)境情況，會直接對細胞的質量形成影響。他曾有一回使用了一只年齡偏大些的兔子, 結果分離出來的細胞基本上全部老化, 根本沒辦法進行增殖。
原代細胞的批次穩(wěn)定性有多重要？
老張對此感觸極深, 這一點。他先前自行分離, 每次所獲細胞數(shù)量不同, 活力各異, 生長特性也不一樣。做實驗之際, 最怕的便是變量無法控制。舉例而言, 他開展藥物處理實驗時, 這周所分離的細胞對于某一濃度的藥物反應甚好, 下周分離的細胞在相同條件下卻毫無反應, 致使他根本難以分辨究竟是藥物的問題, 還是細胞批次的問題。
他對我講, 搞科研最為關鍵的便是具備可重復性。要是每回實驗所采用的兔原代細胞自身并不穩(wěn)定, 那么后續(xù)所有的數(shù)據就如同在沙灘之上蓋樓一樣, 隨時都有可能坍塌。這同樣是他在后來選擇商業(yè)渠道的一個重要緣由, 因為別家能夠給出詳盡的質檢報告, 其中純度、活性以及特異性標記物都標注得明明白白的。
如何選擇靠譜的兔原代細胞來源？
張三如今也算得上是半個行家了。他跟我說, 倘若要獲取數(shù)量眾多、穩(wěn)定可靠、品質優(yōu)良的兔原代細胞, 最為省心省力的法子的確就是尋覓專業(yè)的供應商。重點在于, 得瞧瞧對方能不能給出完備的溯源信息, 像是動物的品種、周齡、分離的方法、鑒定的數(shù)據。
而且, 最好挑選那些能夠給予定制化服務的公司。某些實驗需要特定組織來源的細胞, 像兔主動脈平滑肌細胞, 又或者兔心肌細胞, 常規(guī)的供應商不一定會有現(xiàn)貨。能夠依據需求迅速分離并且提供細胞的, 才是真正靠譜的。
他還特意提及, 運輸以及復蘇的指導也是相當重要的。有些細胞被買回來后, 因操作存在不當之處, 在復蘇環(huán)節(jié)當中就損失了一多半, 那樣可甚是可惜的。優(yōu)良的供應商會給出詳盡的復蘇以及培養(yǎng)protocol, 甚至有技術支撐是能夠隨時去咨詢的。
擺脫摸索期后，老張的實驗終于步入正軌
在開始使用穩(wěn)定的商品化兔原代細胞之后, 老張的項目前行進度顯著變快。他不用再每日為細胞之事而擔憂, 能夠將時間以及精力匯聚于真正的實驗規(guī)劃方面。上個月的時候, 他給我發(fā)出消息, 聲稱第一批數(shù)據已然整理處理得當, 其結果相當令人滿意, 連論文都已然著手開始撰寫了。
他發(fā)出感慨稱, 技術手段處于進步狀態(tài), 許多時候并非自身能力欠缺, 而是未曾尋覓到更為高效的解決辦法。對于那般需要頻繁運用兔原代細胞的研究者來講, 去學會借助成熟的商業(yè)化產品, 實際上倒是一種更具智慧、更為高效的研究途徑。說到底, 實驗到頭來要看的是結果, 而非過程里的辛苦付出。
