搞科研的朋友，最近有點郁悶
我存在一位名為老張的朋友, 其于生物公司擔任研發(fā)主管的職位, 且已工作將近十年之久。他宣稱自身這輩子最為懼怕的并非老板催促研發(fā)進度, 而是實驗所呈現(xiàn)的結(jié)果反復(fù)無常。某一回, 其所負責的一個項目停滯在數(shù)據(jù)驗證的環(huán)節(jié)之上, 接下來連續(xù)三周均處于加班狀態(tài), 但其最終獲取的結(jié)果卻是ELISA試劑盒的重復(fù)性始終無法達標。他曾在一度之間懷疑自己是否應(yīng)當轉(zhuǎn)行從而踏入售賣盒飯的行業(yè)。
ELISA試劑盒到底怎么選才不踩坑
老張最初碰到的問題是試劑盒的挑選, 他講市場上ELISA試劑盒品牌多得像牛身上的毛一樣, 價格從幾百到幾千都存在, 他曾貪圖價格便宜, 買了一款價格最低的進口品牌, 可是靈敏度低得特別離譜, 陰性對照都飄出了陽性值, 他后來歸納總結(jié), 選ELISA試劑盒不能只看價格, 核心得看三個指標, 靈敏度、特異性、重復(fù)性, 特別是重復(fù)性, 決定了你能不能得出穩(wěn)定可信的數(shù)據(jù)。
實驗做不出來，是試劑盒的問題還是我的問題
那段時間, 老張?zhí)焯於寂菰趯嶒炇依? 多次的反復(fù)去排查流程。一開始, 他懷疑自身加樣時出現(xiàn)手抖這種狀況, 便換用了精密移液器, 此后卻依舊沒有效果。隨后, 他又懷疑是洗板機方面存在問題, 由此更換成手動洗板方式, 然而依舊沒有取得改善。之后, 他向同行去請教, 對方詢問他有沒有去看那試劑盒的說明書, 有無專心去閱讀其中保存條件以及有效期這些內(nèi)容。老張經(jīng)過此番才發(fā)現(xiàn), 自己所購買的ELISA試劑盒到貨之后一直放置在4度冰箱的那個角落里, 靠近著冰箱后壁, 而那塊區(qū)域溫度有可能低于2度, 致使試劑凍融后失效了。
為什么同一批ELISA試劑盒結(jié)果差異這么大
把試劑盒預(yù)熱到室溫, 那部分時間不屬于老張用以記錄實驗詳情的范疇 , 他側(cè)重記錄的有關(guān)酶活性測定的是, 每天針對溫度、濕度、操作時間進行明細載入。他見識到相同的試劑盒, 上午按流程做出的相應(yīng)生物學活性和下午所作出的, 能相差出30%這件事情對于樣本的標準化處理有著重要意義。之后進行資料檢索查看, 他知曉了酶聯(lián)免疫吸附測定實驗對操作時間以及溫度是超乎尋常地敏感, 特別是在實驗條件的優(yōu)化上需嚴格把控的孵育環(huán)節(jié), 要是包被抗原在加完樣本后沒法敏捷放入濕盒內(nèi), 并致使孔內(nèi)液體散發(fā), 就定會引發(fā)邊緣效應(yīng)。老張目前每次做實驗之前都會先把試劑盒預(yù)熱到室溫, 而且在每一步驟進程管控環(huán)節(jié)中嚴格把控孵育時間在正負兩分鐘以內(nèi)。
ELISA試劑盒的保存方法，以前真沒當回事
老張存有個不良習性, 偏好囤聚貨物 , 他一次性購入了十盒ELISA試劑盒, 存于冰箱里緩緩使用。然而用到后面幾盒之際, 標準品的線性怎么都做不出來了。他聯(lián)絡(luò)了廠家技術(shù)支持, 對方讓他核查試劑盒是否置于非凍結(jié)冰柜內(nèi), 并且不可以反復(fù)凍融, 老張這才察覺到 , 他每次取用試劑之時, 整盒拿出置于室溫下十幾分鐘, 繼而又放回去, 此等操作等同于在反復(fù)凍融標準品 ,當前他變明智了, 每次只取用當天用量, 剩余的進行分裝凍存, 絕對不再回凍。
實驗失敗最崩潰的那一刻，是數(shù)據(jù)被質(zhì)疑
老張有一段經(jīng)歷, 那是他最為難受的, 并非實驗做不出來, 而是數(shù)據(jù)遭到別人質(zhì)疑。有一回, 他呈上了一份ELISA檢測報告, 客戶反饋稱結(jié)果跟他們所預(yù)期的并不一樣。老張重新核查了全部原始數(shù)據(jù), 發(fā)覺自身的標準曲線擬合R平方值僅僅只有0.98, 這在這個行業(yè)當中雖說勉強符合要求, 然而客戶卻不認可。他隨后換用了更高等級的ELISA試劑盒, 此次標準曲線R平方值穩(wěn)穩(wěn)地保持在0.995以上, 自此客戶再也未曾對數(shù)據(jù)質(zhì)量產(chǎn)生過質(zhì)疑。老張講, 去做實驗是不可以貪圖省事的, 試劑盒所具備的品質(zhì)是直接能夠決定你獲得的數(shù)據(jù)是不是可以站穩(wěn)腳跟的。
ELISA試劑盒使用中的細節(jié)，決定最后的數(shù)據(jù)質(zhì)量
帶新人的老張, 首要之事是指導(dǎo)新人正確運用 ELISA 試劑盒, 他歸納出幾條準則: 其一, 試劑盒抵達后先查驗包裝有無損壞, 查看有效期剩余時長；其二, 所有試劑在使用前都必須調(diào)至室溫平衡, 不可從冰箱取出后直接加樣；其三, 洗板時務(wù)必注滿孔, 不可僅洗半 孔；其 四, 加樣完畢后 要立馬放入孵育箱, 不可在久置于空氣中；之五 , 讀板前用吸水紙吸凈板底水汽。他表述, 這些細節(jié)的外形看起來似乎并不起眼, 然而, 只要其中任意一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題, 縱然ELISA試劑盒價格貴到何種程度, 它都毫無價值可言。
如果時間能倒流，我會早一點注意這些
要是能重來一次, 老張表示, 他會在頭一回做ELISA實驗這件事之前, 就前往參加一回正規(guī)規(guī)范的培訓, 而非自行摸著石頭過河。之前他曾認為ELISA試劑盒做起來特別容易, 僅僅是添加樣本、孵育以待反應(yīng)、清洗反應(yīng)板、去讀取數(shù)值這樣就大功告成了, 然而后續(xù)卻發(fā)覺, 原來每一個步驟里頭都暗藏著不少專門技巧與要點。目前, 他每一個季度都會特意抽出時間, 把自己過往所做的實驗流程, 仔仔細細地從頭到尾清查梳理一遍, 瞅一瞅是不是存在哪些能夠進一步改進優(yōu)化的地方。并且, 他始終堅持選用同一個知名品牌生產(chǎn)的ELISA試劑盒, 去開展長期項目的一系列縱向?qū)Ρ妊芯抗ぷ? 以此來防止由于品牌方面存在差異, 進而造成所獲取的數(shù)據(jù)彼此之間缺乏可比性，無法進行有效的分析判斷。
寫在最后
聽了老張所講的那些事兒, 我從中領(lǐng)悟到, ELISA試劑盒并非具備所有功能, 然而要是把它運用恰當, 它可為你省去數(shù)目超多的麻煩。他曾經(jīng)身為一個經(jīng)歷諸多挫折的老實驗員, 如今卻能夠輕松地完成各類復(fù)雜樣本的檢測工作, 其依靠的是持續(xù)不斷地進行總結(jié)以及優(yōu)化。倘若你也正因為ELISA實驗數(shù)據(jù)不穩(wěn)定而感到苦惱, 不妨先去檢查一下自身操作方面的細微之處, 有時候問題恰恰就出在那些最容易被忽視的地方。在實驗這條道路上, 不存在捷徑可走, 但存在相應(yīng)的方法。
