你可能也在找靠譜的PCR定量試劑盒
上一個(gè)月, 那時(shí), 有關(guān)那個(gè)分子檢測(cè)的我的一位朋友老張, 忽然對(duì)我撥了一通電話。在這通電話里頭, 他的聲音存在著些許急切: “我手上所負(fù)責(zé)的這個(gè)項(xiàng)目陷入了停滯狀態(tài), 目前PCR定量結(jié)果浮動(dòng)極大, 其重復(fù)性糟糕到了極點(diǎn), 客戶那邊催促得極為緊迫, 我快要陷入瘋狂狀態(tài)了?！?。
老張任職于一家第三方檢測(cè)公司, 擔(dān)任技術(shù)主管一職, 平日里主要承擔(dān)病原體核酸定量檢測(cè)工作, 其具體工作內(nèi)容, 概括來講乃是利用 PCR 定量試劑盒, 將樣本之中極其少量的核酸, 精確地進(jìn)行定量測(cè)定。這件事情聽起來似乎較為簡(jiǎn)易, 然而真正從事過此項(xiàng)工作的人都清楚, 倘若試劑盒選擇不當(dāng), 隨后便全都是麻煩。
朋友到底遇到了什么困境
老張所在的公司, 之前采用的是某進(jìn)口品牌的PCR定量試劑盒, 其價(jià)格高昂, 并且供貨狀況不穩(wěn)定。今年年初, 當(dāng)供應(yīng)鏈出現(xiàn)緊張態(tài)勢(shì)時(shí), 貨期直接被延長(zhǎng)到了兩個(gè)月。老板為此著急了, 要求他盡快更換為國(guó)產(chǎn)的, 老板還提及“便宜又省心”。
接著呢, 老張換了試劑盒, 是三個(gè)來自不同廠家的, 然后問題就接連不斷地出現(xiàn)了。先是第一個(gè)牌子, 它有著擴(kuò)增效率低的狀況。并且Cq值偏大, 靈敏度顯著不足。再看第二個(gè)牌子, 其批間差大得過于夸張奇特, 同一批樣本在不同批次檢測(cè)時(shí)做出來的結(jié)果之間, 居然能相差兩個(gè)數(shù)量級(jí)。而第三個(gè)牌子那更是離譜到家了, 引物二聚體增多到把主峰都給淹沒掉了, 根本沒辦法進(jìn)行判讀。
老張?jiān)谀嵌螘r(shí)期每日都加班, 導(dǎo)致整個(gè)人瘦了一圈 , 他對(duì)我說, 他如今才弄明白, PCR定量試劑盒這物件, 真不是隨意買一個(gè)便管用的 , 特異性、靈敏度、重復(fù)性 , 無論哪一樣差了 , 實(shí)驗(yàn)就將宣告失敗。
PCR定量試劑盒哪種才適合你的樣本類型
后續(xù)老張究竟是以什么樣的方式去解決所面臨的問題的呢? 他存在著一位身處特定圈子之內(nèi)的朋友, 這位朋友于一家規(guī)模較大的基因檢測(cè)公司工作長(zhǎng)達(dá)六年時(shí)間, 該朋友向他舉薦去嘗試一款名為“優(yōu)定量”的國(guó)產(chǎn)PCR定量試劑盒。老張?jiān)谧畛醯臅r(shí)候處于一種猶豫不決的狀態(tài), 畢竟往前經(jīng)歷過數(shù)量眾多的挫折。
他先是拿標(biāo)準(zhǔn)品做完了梯度稀釋測(cè)試，是從十的七次方拷貝開始, 一直到十的一次方拷貝, 總共是七個(gè)梯度, 而且每個(gè)梯度都做了三個(gè)復(fù)孔。結(jié)果出來以后, 標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2值達(dá)到了零點(diǎn)九九八, 擴(kuò)增效率處于百分之九十八到百分之一百零二之間。老張跟我講: “這個(gè)線性關(guān)系, 比我以前用的進(jìn)口貨還要穩(wěn)?！?。
要點(diǎn)在于, 此款試劑盒的引物探針設(shè)計(jì)頗為考究, 它運(yùn)用了多重防錯(cuò)配技術(shù), 對(duì)于GC含量高的模板亦能夠穩(wěn)定地進(jìn)行擴(kuò)增, 老張對(duì)三種各異的病原體靶標(biāo)展開了測(cè)試, 均未出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。
我朋友之后解決了哪些具體問題
這款試劑盒解決了老張最頭疼的重復(fù)性方面的問題那, 他拿著相同的處于臨床試驗(yàn)之中的樣本, 間隔三天開展了兩組不同的實(shí)驗(yàn), 兩組實(shí)驗(yàn)每組都有五個(gè)重復(fù)的孔, 兩組相應(yīng)的數(shù)據(jù)當(dāng)中, Cq值那里所具的標(biāo)準(zhǔn)差均處于0.1以內(nèi), 當(dāng)時(shí)他在辦公室就給我發(fā)送了消息, 其內(nèi)容便是: “終于不需要再因?yàn)橹貜?fù)性差而遭到客戶的責(zé)罵了?！薄?/p>
又有一回, 他碰見一個(gè)樣本濃度極其低, 常規(guī)試劑盒完全無法擴(kuò)出。他懷著試著做做看的心態(tài), 選用優(yōu)定量試劑盒去做, 竟然在Cq值35的地方瞧見了清晰的擴(kuò)增曲線。老張講: “這個(gè)靈敏度, 對(duì)于低載量樣本的檢測(cè)是極為關(guān)鍵的。”。
在2025年11月, 那場(chǎng)全國(guó)分子診斷技術(shù)研討會(huì)上, 他特意把這個(gè)案例拿出來做了分享, 會(huì)后, 有好幾個(gè)同行加了他微信, 問買這款試劑盒去哪兒能買到。
結(jié)果怎么樣，客戶的反饋是什么
將老張公司全部替換為優(yōu)定量 PCR 定量試劑盒后, 實(shí)驗(yàn)室的效率顯著地提升了, 以往一批樣本需要運(yùn)行三輪方能得出可靠結(jié)果, 如今一輪便能夠完成, 試劑成本相比之前反而降低了大約三成。
一家他服務(wù)的三甲醫(yī)院, 其檢驗(yàn)科主任, 在拿到連續(xù)三個(gè)月的比對(duì)報(bào)告之后, 專門給老張打了個(gè)電話, 說道: “你們最近使用的試劑盒挺好, 數(shù)據(jù)相較以前穩(wěn)定了許多, 繼續(xù)維持?！?。
后來老張跟我說道那么一句話, 這句話我覺著特別實(shí)在, 是這樣講的: “進(jìn)行定量PCR的時(shí)候, 要挑選對(duì)試劑盒, 這就等同于成功了一半。不單要看價(jià)格是怎樣的, 也不應(yīng)當(dāng)迷信那進(jìn)口的東西。好用的試劑盒, 你是得親自去嘗試一番的。”。
我個(gè)人從中得到的啟發(fā)
聽完老張這段所歷經(jīng)之事, 我最為突出的感觸是: 于分子檢測(cè)此一行業(yè)范疇內(nèi), 信任乃是憑借數(shù)據(jù)堆砌而成的。PCR 定量試劑盒的技術(shù)門檻并非不高, 并非隨隨便便哪一個(gè)廠家皆能夠達(dá)成良好制作效果的。老張歷經(jīng)諸多波折, 最終尋覓到一款合用的, 所依靠的是對(duì)技術(shù)指標(biāo)秉持較真態(tài)度, 而非僅憑主觀臆斷。
假如當(dāng)下你同樣正為PCR定量結(jié)果欠缺穩(wěn)定性而煩憂發(fā)愁, 又或者此刻正尋覓一款具備高性價(jià)比的PCR定量試劑盒, 那么不妨去效仿學(xué)習(xí)老張所采用的辦法: 首先選取標(biāo)準(zhǔn)品開展梯度測(cè)試, 查看線性狀況, 查看效率情形, 查看重復(fù)性能。數(shù)據(jù)乃是不會(huì)說謊騙人的。
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