土壤酸性蛋白酶（Solid -Acid Protease，S-ACPT）試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-ACPT在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。
測定原理：
酸性條件下，S-ACPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰。
所需儀器及設(shè)備：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水
試劑組成和配置：
液體一：1mL×1支，4℃保存。
液體二：0.5mL×1支，4℃保存。
試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=140（μL）：20（μL）：21（mL）的比例配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，如出現(xiàn)白色絮狀沉淀則不能用。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入2mL試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入8ml試劑一，充分混勻備用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
試劑五：液體8mL×1瓶，4℃保存；
試劑六：液體1.5mL×1支，0.05mg/ml標準酪氨酸溶液，4℃保存；
試劑七：液體5mL×1支，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
測定操作：
2、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至680nm，蒸餾水調(diào)零。
3、樣本測定：
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試劑名稱 |
測定管 |
對照管 |
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風(fēng)干土樣（g） |
0.02 |
0.02 |
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試劑一（μL） |
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150 |
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試劑三（μL） |
150 |
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混勻，40℃水浴30min，振蕩5-6次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸
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試劑二（μL） |
50 |
50 |
混勻，8000g25℃離心10min，取上清液，在EP管或96孔板中加入下列試劑
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測定管 |
對照管 |
標準管 |
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上清液（μL） |
60 |
60 |
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試劑六（μL） |
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60 |
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試劑四（μL） |
280 |
280 |
280 |
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試劑五（μL） |
60 |
60 |
60 |
混勻，40℃水浴20min，8000g 25℃離心10min，取上清液200μL，680nm下讀取各管吸光值A(chǔ)
注意：標準管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。
S-ACPT活性計算：
單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個 S-ACPT活力單位。
S-ACPT(mg/d/g土樣)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷W÷T=24×(A測定管-A對照管)÷A標準管
C標準管：標準管濃度，0.05mg/mL；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；T：反應(yīng)時間，30min=1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.02g。
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資料/datasheet
