ELISA檢測試劑盒，是生命科學(xué)研究領(lǐng)域里不能缺少的工具，也是食品質(zhì)量控制領(lǐng)域中不能缺少的工具，還是環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域里不能缺少的工具，它被用于對特定蛋白質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，也被用于對特定激素進(jìn)行定性或定量分析，還被用于對特定生物標(biāo)志物進(jìn)行定性或定量分析。面對市場上數(shù)量眾多的品牌，面對市場上各種各樣的規(guī)格，怎樣去選擇適宜的試劑盒，怎樣去規(guī)范相關(guān)操作，怎樣去準(zhǔn)確解讀相應(yīng)結(jié)果，便成為了實驗室人員所關(guān)注的核心問題。本文將會從選型這個方面展開，本文也會從操作要點這個方面展開，本文還會從常見問題排查這個方面展開，以此來幫助用戶提高檢測效率，以此來幫助用戶提升數(shù)據(jù)可靠性。
ELISA檢測試劑盒怎么選
首先，要對檢測靶標(biāo)的性質(zhì)予以明確，這其中涵蓋了待測樣本的類型，像血清、細(xì)胞上清、組織勻漿這類，以及預(yù)期的濃度范圍。不同的試劑盒，其靈敏度的差異能夠達(dá)到數(shù)十倍，比如說，要是檢測低豐度的細(xì)胞因子，那就得挑選皮克級靈敏度的產(chǎn)品。與此同時，還應(yīng)當(dāng)留意試劑盒的種屬特異性，舉例來講，要是檢測小鼠樣本，就必須選用匹配小鼠源抗體的試劑盒，不然的話，就會引發(fā)交叉反應(yīng)或者造成信號缺失。
其二要對試劑盒的關(guān)鍵性能參數(shù)予以評估，線性范圍要將實驗預(yù)估的濃度區(qū)間涵蓋，防止樣本稀釋倍數(shù)出現(xiàn)不妥情況，批內(nèi)以及批間變異系數(shù)即CV值應(yīng)當(dāng)?shù)陀?0%與15%，這體現(xiàn)出試劑盒的穩(wěn)定性，建議去查閱產(chǎn)品說明書里的驗證數(shù)據(jù)，優(yōu)先挑選經(jīng)過真實樣本驗證的品牌，并且索要少量樣品開展預(yù)實驗。
試劑盒操作關(guān)鍵步驟
ELISA檢測之結(jié)果，受樣本制備與保存的直接影響，細(xì)胞上清要離心以去除顆粒物，血清樣本得避免反復(fù)凍融，所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫，也就是大概25℃，因為低溫試劑會延長反應(yīng)時間，還會增加非特異性結(jié)合，建議對每份樣本設(shè)置復(fù)孔，并且同時加入標(biāo)準(zhǔn)品與空白對照，以此方便后續(xù)計算以及背景扣除。
加樣的過程，需要嚴(yán)格計時，孵育的過程，同樣需要嚴(yán)格計時。推薦使用多通道移液器來加樣，并且要保持槍頭垂直觸碰孔底側(cè)壁。洗板的步驟是最為關(guān)鍵的：手動洗板的時候，需輕拍吸水紙來去除殘液，自動洗板機的話，要定期校準(zhǔn)注液量。每孔加入300μL洗滌液，浸泡30秒，重復(fù)5次，如此可有效降低背景信號。底物顯色的時間，應(yīng)當(dāng)精確地進(jìn)行控制，避光反應(yīng)之后，要立即加入終止液。
數(shù)據(jù)異常如何排查
當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值小于0.99之際，一般會暗示標(biāo)準(zhǔn)品稀釋有誤或者加樣不均勻。此時能夠檢查稀釋步驟有沒有運用同一支移液器，還要保證渦旋混勻超過10秒。要是空白孔顯色太過深，那就表明洗滌不充足或者試劑被污染，所以需要更換洗滌緩沖液并且加大浸泡時間。當(dāng)樣本信號超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之時，應(yīng)當(dāng)借助預(yù)實驗來確定最佳稀釋倍數(shù)。
由孵育時溫度不均易致使高背景或邊緣效應(yīng)，也就是邊緣孔與中心孔信號存在差異，使用濕盒且避免疊放酶標(biāo)板，能夠確保各孔受熱保持一致，要是重復(fù)孔的CV值超出15%，就得排查移液器精度以及操作人員手法，建議構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，定期對檢測設(shè)備予以維護(hù)，并且記錄每次實驗的環(huán)境溫濕度參數(shù)。
