用于科研的 ELISA 試劑盒，是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)蛋白水平時(shí)常用的工具，其原理是基于抗原與抗體的特異性反應(yīng)，借助酶催化底物顯色來(lái)開(kāi)展定量分析。正確地選擇以及使用試劑盒，會(huì)直接對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和重復(fù)性產(chǎn)生影響。
如何確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性
實(shí)驗(yàn)之前，得詳詳細(xì)細(xì)閱讀說(shuō)明書，留意樣本類型以及稀釋倍數(shù)。每一批次的實(shí)驗(yàn)，都需要設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品，還要設(shè)置空白對(duì)照以及質(zhì)控品，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)當(dāng)大于0.99。添加樣本時(shí)，要避免產(chǎn)生氣泡，清洗板子的時(shí)候要徹底，然而不可過(guò)于猛烈，以防孔間出現(xiàn)交叉污染。
樣本處理注意事項(xiàng)
針對(duì)細(xì)胞上清、組織勻漿或者血清樣本而言，得依據(jù)試劑盒所提出的要求來(lái)實(shí)施預(yù)處理，好比通過(guò)離心這種方式去除顆粒物，或者添加蛋白酶抑制劑。樣本保存的時(shí)間不適合過(guò)長(zhǎng)，要是反復(fù)凍融的話，就會(huì)使目標(biāo)蛋白濃度有所降低。建議進(jìn)行分裝保存，每次取用的時(shí)候要新鮮融化并且充分混勻。
結(jié)果判讀與質(zhì)量控制
酵素標(biāo)記儀讀取數(shù)值之后，首先要查看空白孔的OD值是不是低于0.1，還要看質(zhì)控品實(shí)際測(cè)量出來(lái)的濃度是不是在標(biāo)定的范圍之內(nèi)。要是標(biāo)準(zhǔn)曲線低濃度的點(diǎn)不呈現(xiàn)線性，有可能是洗滌不夠充分或者孵育的時(shí)間不夠。異常的數(shù)據(jù)需要進(jìn)行標(biāo)記并且重新測(cè)量，不可以隨便剔除。
數(shù)據(jù)重復(fù)性提升技巧
為同一批次的實(shí)驗(yàn)，建議采用同批次的試劑盒，要是屬于不同批次，那就需要重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。操作手法得維持一致，就像洗板機(jī)的洗滌次數(shù)以及浸泡時(shí)間那樣。要記錄每次實(shí)驗(yàn)時(shí)的環(huán)境溫度、孵育時(shí)長(zhǎng)等細(xì)節(jié)，這般做是為了方便后續(xù)排查系統(tǒng)誤差。
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