兔原代細胞，是從兔組織直接對其分離從而獲得的細胞群體，它最大程度上保留了體內(nèi)細胞的原始特征，是生命科學(xué)研究里不可或缺的工具，相比細胞系，它們更能夠?qū)ν迷唇M織的生理狀態(tài)如實進行反映，在藥物篩選、毒性測試等等等這些領(lǐng)域展現(xiàn)出獨特價值，掌握兔原代細胞的分離還有培養(yǎng)技術(shù)，對實驗成功起到至關(guān)重要的很關(guān)鍵作用。
兔原代細胞分離方法
兔原代細胞分離的關(guān)鍵之處在于無菌操作以及酶消化時間的精準(zhǔn)把控，就拿兔腎原代細胞來說，先取新鮮的兔腎組織，將其剪碎，之后加入0.1%膠原酶，于37℃的水浴環(huán)境中進行30至45分鐘的消化，在這期間每隔10分鐘就要搖晃一回 ，要是消化過度就會對細胞活性造成損傷，而消化不足的話細胞得率會很低，終止消化之后用100目濾網(wǎng)進行過濾，經(jīng)過離心收集細胞就能得到單細胞懸液。
兔原代細胞培養(yǎng)條件
兔的原代細胞，對于培養(yǎng)環(huán)境是比較敏感的，會推薦使用專用的培養(yǎng)基從而添加10%的胎牛血清。培養(yǎng)箱的條件，要穩(wěn)定在37℃以及5% CO?，濕度進行保持在95%以上。細胞貼壁的速度是較為慢的，接種之后48小時之內(nèi)，要避免去移動培養(yǎng)瓶。首次換液是在72小時的時候進行，目的是去除未貼壁的細胞還有碎片。要注意去觀察培養(yǎng)基pH的變化，偏黃意味著代謝過旺，需要及時進行更換。
兔原代細胞鑒定技巧
通常采用形態(tài)學(xué)觀察跟免疫熒光染色相結(jié)合的方式來鑒定兔原代細胞純度，比如說兔腎原代細胞呈現(xiàn)出典型的上皮樣鋪路石狀排列，然而兔成纖維細胞呈現(xiàn)的是長梭形狀。進一步能夠夠用角蛋白抗體也就是CK - 18或者波形蛋白抗體來進行特異性染色，陽性率超越95%才可以視為合格。流式細胞術(shù)同樣能夠用來檢測細胞表面標(biāo)志物，進而確保不存在其他細胞污染。
兔原代細胞傳代注意
通常情況下，兔原代細胞一般僅僅能夠傳代三至五代，一旦超過這個代數(shù)，就會出現(xiàn)衰老或者表型丟失的情況。傳代的時機需要選擇在細胞融合度達到百分之八十的時候，要是傳代過早，就會降低產(chǎn)量，要是傳代過晚，那細胞就會老化。要用百分之零點零五的胰酶 -EDTA 在室溫下消化一到兩分鐘，輕輕拍打瓶壁，看到細胞變圓脫落時就終止消化。按照一比二的比例進行分瓶，傳代之后的前兩天需要避免劇烈搖晃，要保持靜置培養(yǎng)。
