作為生物研究基礎(chǔ)技術(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)，在操作期間常常會碰到諸如污染、生長緩慢這類的問題。要是能夠掌握正確的培養(yǎng)方法，那么是可以有效地提高實(shí)驗(yàn)成功率的。本文對幾條實(shí)用經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行了總結(jié)，得以幫助大家減少彎路行程。
細(xì)胞培養(yǎng)污染怎么預(yù)防
細(xì)胞培養(yǎng)里，污染可是最讓人頭疼的問題，其中細(xì)菌、真菌或者支原體的污染常常是因?yàn)椴僮鞯臅r(shí)候疏忽了，或者環(huán)境不干凈所致。建議每次操作之前，先用75%酒精擦拭超凈臺，然后讓紫外燈照射30分鐘。培養(yǎng)基以及試劑需要分裝后來使用，防止反復(fù)去打開瓶子。能夠在培養(yǎng)液里加入雙抗（青霉素 - 鏈霉素），不過長期使用有可能會產(chǎn)生耐藥性，平常更得注重?zé)o菌操作的習(xí)慣。
培養(yǎng)基如何正確選擇
不同種類的細(xì)胞，對于營養(yǎng)的需求，存在著很大的差異。貼壁生長的細(xì)胞，常用的是DMEM高糖培養(yǎng)基。而懸浮細(xì)胞，適合的則是RPMI - 1640。血清的濃度，也是需要進(jìn)行調(diào)整的。一般情況下，10%的胎牛血清，能夠滿足大部分細(xì)胞的生長需求。原代培養(yǎng)的時(shí)候，需要添加生長因子。比如EGF或者FGF。要注意查看培養(yǎng)基的有效期。配制培養(yǎng)基時(shí)，要嚴(yán)格按照說明書，加入碳酸氫鈉來調(diào)節(jié)pH值。當(dāng)顏色呈現(xiàn)為櫻桃紅的時(shí)候，才是正常的。
傳代操作有哪些技巧
細(xì)胞鋪滿瓶底達(dá)80%左右之際，便需傳代，借助PBS輕輕漂洗兩次，以此去掉死細(xì)胞以及血清殘留，胰酶消化的時(shí)間十分關(guān)鍵，于倒置顯微鏡下見到細(xì)胞變圓、間隙增大之時(shí)便可終止，吹打之時(shí)得輕柔，防止產(chǎn)生氣泡，按照1:3或者1:4的比例接種，新瓶要預(yù)先用基質(zhì)包被，傳代后的第二天觀察貼壁情況，要是漂浮細(xì)胞多，表明消化過度或者有胰酶殘留。
培養(yǎng)條件怎樣優(yōu)化
對細(xì)胞狀態(tài)產(chǎn)生直接影響的是溫度以及CO?濃度，將恒溫培養(yǎng)箱設(shè)定為37℃，5%的CO?濃度對于多數(shù)細(xì)胞系而言最為適宜，濕度需維持在95%以上，以此來防止培養(yǎng)基出現(xiàn)蒸發(fā)的情況。要避免頻繁去開關(guān)培養(yǎng)箱門，不然會致使溫濕度產(chǎn)生波動。需定期對箱體水盤展開清潔，所使用的是無菌蒸餾水并且添加了抑菌劑。像有些細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞，其需要低氧環(huán)境，可將氧氣調(diào)至3%，這就需要專用的三氣培養(yǎng)箱。
在細(xì)胞培養(yǎng)期間，你能不能說清楚，究竟是哪一個(gè)環(huán)節(jié)，其實(shí)是最容易被人忽視掉的呢？歡迎大家在評論區(qū)那兒，去分享一下你自身的經(jīng)驗(yàn)呀。
