ELISA試劑盒是實(shí)驗(yàn)室里極為常用的免疫檢測工具，它借助抗原抗體特異性反應(yīng)，達(dá)成對目標(biāo)蛋白、激素或者生物標(biāo)志物的定量分析。對進(jìn)行分子生物學(xué)、食品檢測、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域工作的科研人員而言，掌握試劑盒的挑選與使用技巧，能夠極大提升實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性以及可重復(fù)性。
ELISA試劑盒怎么選
在面對市場里幾十個(gè)品牌以及上百種規(guī)格的 ELISA 試劑盒時(shí)，好多人的第一反應(yīng)便是去看價(jià)格。然而低價(jià)常常就意味著抗體配對沒有足夠優(yōu)化，又或者是板間差異比較大。正確的做法是，先去確認(rèn)檢測樣本的類型（血清、細(xì)胞上清、組織勻漿），接著再去核對試劑盒說明書當(dāng)中的靈敏度、檢測范圍以及交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)。靈敏度決定了能夠檢測到的最低濃度，檢測范圍得覆蓋你的樣本預(yù)估值，交叉反應(yīng)則會(huì)影響特異性。此外，優(yōu)先挑選提供預(yù)包被板的即用型試劑盒，這能夠省略大量包被以及封閉的時(shí)間，并且還能降低手工操作所帶來的批間差。
ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)
獲得試劑盒之后，首要之事并非拆開包裝，而是查驗(yàn)運(yùn)輸狀況。大多數(shù)試劑盒要求在二至八攝氏度條件下冷藏運(yùn)輸，要是冰袋已然融化或收取時(shí)溫度出現(xiàn)異常，建議先與供應(yīng)商取得聯(lián)系。在正式開展實(shí)驗(yàn)之前，將所有試劑以及樣本恢復(fù)至室溫，防止溫度波動(dòng)對結(jié)合效率造成影響。加樣這一環(huán)節(jié)最易于出現(xiàn)差錯(cuò)，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本要垂直添加至孔底，不可觸碰到底部或者濺落到孔壁；洗板的時(shí)候要確保每孔都被吸干，然而不要過度拍打致使板底破裂。顯色階段需避免光線照射，并且要嚴(yán)格把控反應(yīng)時(shí)間，前后誤差不得超過兩分鐘。每一步都建議用多通道移液器，保持加樣節(jié)奏一致。
ELISA試劑盒常見問題解析
做ELISA時(shí)，幾乎每個(gè)人都碰到過標(biāo)準(zhǔn)曲線R值低，復(fù)孔CV偏大，背景過高這類問題。曲線不佳常常是因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)品稀釋不準(zhǔn)確，或混勻不徹底，建議用帶濾芯槍頭逐級稀釋，每一級都要充分吹打。復(fù)孔間差異大，除加樣誤差外，還要查看酶標(biāo)板放置是否平整，或者洗滌時(shí)有無干板情況。背景高或許是洗板次數(shù)不足，或封閉不充分，通常要求洗板3至5次，每次浸泡30秒。要是樣本值超過了檢測上限這種情況，那就先來進(jìn)行稀釋，之后再次進(jìn)行測量；假若低于下限的話這種情況喲，那就必須要對樣本實(shí)施濃縮，又或者換上高靈敏度的試劑盒。
如何確保ELISA試劑盒結(jié)果可靠
除去規(guī)范操作之外，構(gòu)建內(nèi)部質(zhì)控體系同樣具備著重要性。每一塊板都要去跑上一條具備已知濃度的質(zhì)控品，并且記錄下其實(shí)際測量所得的值與靶值之間的偏差。妥善保存好每一批次試劑盒的批次號以及有效期，以方便進(jìn)行回溯。要是連續(xù)多批實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)展現(xiàn)出較大波動(dòng)，能夠定期針對酶標(biāo)儀予以校準(zhǔn)，去檢查濾光片波長是否出現(xiàn)偏移。對于關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)而言，建議同時(shí)購進(jìn)兩個(gè)不同品牌的試劑盒來開展交叉驗(yàn)證，或者運(yùn)用Western Blot諸如這般獨(dú)立方法去確認(rèn)陽性結(jié)果。記錄下，所有偏離標(biāo)準(zhǔn)操作的動(dòng)作，其中包括例如移液器校準(zhǔn)日期這類情況，再比如室溫濕度等狀況，而這些細(xì)節(jié)，往往能夠?qū)Ξ惓?shù)據(jù)作出解釋。
現(xiàn)今，你最為頻繁遭遇的，關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)之哪一個(gè)痛點(diǎn)呢？歡迎于評論區(qū)域留言展開交流，一塊兒提升檢測水準(zhǔn)。
