最為基礎(chǔ)且關(guān)鍵的技術(shù)之一，在生命科學(xué)研究里邊是細胞培養(yǎng)，它看起來好像簡單，然而實際操作當中到處都是門道，從無菌環(huán)境的維護起，到培養(yǎng)基的選擇，每一項細節(jié)都會對細胞的生長狀態(tài)造成影響，下面結(jié)合日常實驗里的常見場景，分享一些實用經(jīng)驗。
細胞培養(yǎng)如何避免污染
cell培養(yǎng)里，污染可是最叫人頭疼的問題，細菌、真菌以及支原體都有可能毫無聲息地侵入進來。操作之前，一定要用75%酒精擦拭超凈工作臺與雙手，所有的耗材都得經(jīng)過高溫高壓滅菌。實驗進行過程中，要避免大聲講話語或者快速去移動，以防氣流把微生物攜帶進培養(yǎng)皿。建議每隔兩周就徹底清理一回培養(yǎng)箱，并且定期檢測培養(yǎng)液是不是出現(xiàn)渾濁或者pH發(fā)生變化，一旦發(fā)覺污染，馬上進行隔離處理。
定期對培養(yǎng)箱的水盤予以檢查，往其中添加適量的抑菌劑，還要讓無菌水保持充足的狀態(tài)。要是同一批細胞出現(xiàn)反復(fù)污染的情況，那就得對移液器、培養(yǎng)瓶以及血清的質(zhì)量展開檢查，在必要的時候更換供應(yīng)商。要養(yǎng)成對于每次操作細節(jié)進行記錄的習慣，以便于追蹤污染的來源之處。
培養(yǎng)基怎么選才對
各式各樣的細胞類型，針對營養(yǎng)的需求有著極大差異，一旦選錯培養(yǎng)基，就會致使細胞生長遲緩，甚至走向死亡。常見那種基礎(chǔ)的培養(yǎng)基包含DMEM，還有RPMI-1640以及MEM，貼壁細胞一般而言需要DMEM，懸浮細胞則是更適配RPMI-1640。查看細胞說明書、或者文獻所給出的推薦，這是首要步驟，要是不確定，能夠先開展小規(guī)模對比實驗，去觀察細胞形態(tài)以及增殖速率。
在血清濃度方面同樣是很關(guān)鍵的，對于大部分細胞系而言會采用10%的胎牛血清來使用，然而部分較為敏感的細胞卻需要將血清濃度降低至5%或者升高到20%。要留意血清批次之間存在的差異，建議進行批量采購時選用同一批次。添加谷氨酰胺以及雙抗能夠起到提升穩(wěn)定性的作用，然則抗生素并不適宜長時間進行使用，不然會掩蓋輕微污染的情況。
傳代操作要注意什么
當細胞密度處在80%至90%這個范圍時，就需要進行傳代，因為傳代時機對細胞活性有著直接影響。要是過早實施傳代，那產(chǎn)量便會降低，而倘若過晚展開傳代，就會致使細胞老化或者發(fā)生脫落。在對貼壁細胞搞消化操作時，先要用PBS清洗來把殘留血清給去除掉，接著加入適量的胰酶，于顯微鏡下觀察到細胞變圓就要立刻終止消化，要是時間過長，就會對細胞膜造成損傷。
使細胞脫離附著物時動作得輕柔些，防止出現(xiàn)大量氣泡，因氣泡破裂所生成的剪切力會致使一部分細胞死亡。傳代的比例一般是1比3或者1比4，新接種的細胞需均勻地攤開，放進培養(yǎng)箱之后24小時內(nèi)別頻繁去觀察。每一次傳代都要記錄代數(shù)，原代細胞以及有限細胞系在超過一定代數(shù)后性能會降低，建議盡早凍存早期的代次。
