生命科學實驗之中，細胞培養(yǎng)屬于極為基礎且尤其核心的技術種類之一。無論是針對細胞行為展開研究，還是進行生物制品的生產，又或者是藥物篩選工作，全都離不開穩(wěn)定可靠狀態(tài)下的細胞培養(yǎng)操作。身為一名長時間于實驗室開展工作的技術人員，我深切知曉初學者們所面臨的困惑以及挑戰(zhàn)，接下來分享幾個具備實用性質的要點。
細胞培養(yǎng)設備清單
從事細胞培養(yǎng)時，超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱以及倒置顯微鏡，此三者乃細胞培養(yǎng)當中極具關鍵意義的核心設備，超凈工作臺能夠為無菌的操作提供相應區(qū)域，建議每隔一個月針對其潔凈度實行監(jiān)測，CO2培養(yǎng)箱可維持5% 的CO2以及37℃的恒定溫度環(huán)境，需要定期對氣體濃度以及溫度予以校準。除此之外，離心機、移液器、細胞計數(shù)板同時還有液氮罐同樣是日常工作里必不可少之地。在挑選設備之際先行重點考慮精度跟穩(wěn)定性事項，就像移液器每年都應該進行一次校準，防止加樣誤差對細胞狀況營造影響。
如何避免細胞污染
細胞培養(yǎng)時，最常見致使失敗的原因乃是污染，其主要被劃分成細菌污染、真菌污染以及支原體污染這幾種類型。對于預防污染而言，需從操作的諸多細節(jié)之處著手：在開展實驗以前，應當先用75%的酒精去擦拭臺面，接著給予紫外照射30分鐘的處理；而在進行操作的時候，手臂一定得避開通向開放培養(yǎng)瓶的跨越動作，所使用的耗材要采用無菌包裝并且不能超過規(guī)定的期限。能夠往培養(yǎng)基里面添加1%的雙抗以此抑制細菌，然而要是長期進行使用的話，有可能會產生耐藥性，故而建議定期去做無菌檢測，一旦發(fā)現(xiàn)存在污染情況，就要馬上丟棄并且徹底對培養(yǎng)箱進行消毒處理。
培養(yǎng)基怎么選
好多不同的細胞，對營養(yǎng)需要的差別可大了去了，常常會用到的基礎培養(yǎng)基，包含著DMEM、RPMI - 1640以及MEM。一種那些如成纖維細胞般會貼壁的細胞，比較適合高糖的DMEM，另一些像淋巴細胞那樣混懸著的細胞，常常采用RPMI - 1640。血清可是培養(yǎng)基里關鍵的一種添加物，其中胎牛血清是最常被應用的，其濃度一般來講是10%。當去挑選培養(yǎng)基的時候，得去核對細胞說明書，要留意L - 谷氨酰胺和碳酸氫鈉是不是新鮮加入的，配好之后在4℃的環(huán)境下避光保存，兩周之內得用完。
細胞傳代操作要點
當細胞在培養(yǎng)瓶底生長至滿滿當當百分之八十的時候，便需要進行傳代操作，先要把舊的培養(yǎng)基吸除掉，接著使用PBS清洗兩遍，以此將血清殘留給去除掉，之后再加入百分之零點二五的胰酶，使其覆蓋整個瓶底，在顯微鏡下面觀看細胞演變成圓形、細胞間隙變大的時候，立刻終止消化，吹打的次數(shù)要控制在二十次以內，避免給細胞造成損傷，傳代的比例一般是一比二直至一比四，接種以后搖晃均勻放入培養(yǎng)箱，注意記錄細胞的代次，超過三十代的老化細胞應當及時復蘇新的批次。
