如何挑選合適的ELISA試劑盒
挑選ELISA試劑盒，首先得查看檢測靶標(biāo)以及樣本類型，確定好待測樣品究竟是血清，還是細胞上清，亦或是組織勻漿，之后再去匹配試劑盒說明書里的驗證樣本列表。不同品牌針對同一靶標(biāo)的抗體對有可能不一樣，優(yōu)先挑選經(jīng)過天然樣本驗證的產(chǎn)品，防止僅僅依靠重組蛋白來做質(zhì)控。此外，靈敏度、檢測范圍同樣要及實驗?zāi)康南鄬?yīng)，定量實驗需要寬范圍以及低檢測限，定性實驗反而更看重特異性。
ELISA實驗常見問題有哪些
洗滌不充分，或者非特異性結(jié)合，會釀就高背景那堪稱典型的問題之一，這就需要加大洗滌的次數(shù)，或者延長浸泡的時間這般去處理。抗體失活，又或者孵育溫度出現(xiàn)偏差，會致使無信號這種典型問題的產(chǎn)生，那就得去查驗試劑保存的條件以及溫育的步驟。加樣誤差，或者板間條件不一致，會造成重復(fù)性差的這種典型狀況，建議運用多通道移液器，并促使每次操作時間保持一致。每次開展實驗的時候，都應(yīng)當(dāng)設(shè)置陽性對照、空白對照，以此助力快速定位出現(xiàn)異常的環(huán)節(jié)。
操作步驟關(guān)鍵點要注意什么
加樣的順序務(wù)必保持固定，以此來避免樣本于室溫下放置過長時間進而致使降解。洗板的時候要垂直拍干，不要拿紙巾直接去接觸孔底，以防纖維吸附對數(shù)值產(chǎn)生干擾。顯色所需要的時間要嚴(yán)格依照說明書來執(zhí)行，過顯會造成假陽性的情況，不足則將會降低靈敏度。終止液加入之后應(yīng)當(dāng)在30分鐘以內(nèi)完成讀數(shù)，原因在于顏色會隨著時間而衰減。另外，不同批次的試劑盒不要進行混用，尤其是酶標(biāo)抗體以及底物液，哪怕是相同貨號也有可能存在批間差。
如何判斷試劑盒質(zhì)量是否可靠
看待標(biāo)準(zhǔn)曲線的 R2 值大于 0.99 與否之外還要著重留意低值質(zhì)控品的回收率處于 80% - 120% 之間，可以選取一份已知濃度的實際樣本開展稀釋線性驗證，要是稀釋倍數(shù)所對應(yīng)的檢測值呈線性下降，那么說明試劑盒在您的樣本基質(zhì)里表現(xiàn)穩(wěn)定，另外一個有效方法是比對相同靶標(biāo)的 ELISA 和蛋白印跡結(jié)果，相關(guān)性良好便證明試劑盒特異性強，購買之前查閱同類實驗室的發(fā)表文章，查看他們常用哪個品牌，這是最為貼近實際的篩選方式。
