于基礎(chǔ)生物學(xué)以及醫(yī)學(xué)前期所開(kāi)展的研究里頭，科研ELISA試劑盒乃是用于定量檢測(cè)諸如蛋白、細(xì)胞因子這類(lèi)靶標(biāo)分子的慣常使用工具。一套具備過(guò)硬質(zhì)量的試劑盒會(huì)切切實(shí)實(shí)地對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性以及結(jié)論的可靠性產(chǎn)生影響。在面對(duì)市場(chǎng)上數(shù)量眾多的品牌以及規(guī)格情形時(shí)，該如何迅速判斷試劑盒的優(yōu)劣狀況呢？本文將要圍繞靈敏度、特異性以及批間差這三個(gè)關(guān)鍵維度，去梳理在選購(gòu)過(guò)程當(dāng)中最需要予以關(guān)注的實(shí)際問(wèn)題。
靈敏度如何驗(yàn)證
以試劑盒能檢測(cè)獲取目標(biāo)分子達(dá)到的最低濃度所表征的是靈敏度，眾多研究者僅僅關(guān)注說(shuō)明書(shū)上所標(biāo)注的數(shù)字，卻將驗(yàn)證方式予以忽略，真正的靈敏度應(yīng)當(dāng)依據(jù)20個(gè)以上空白樣本的均值加上兩倍標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)開(kāi)展計(jì)算，在進(jìn)行選購(gòu)時(shí)，建議向供應(yīng)商提出要求，使其提供標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)低濃度點(diǎn)的實(shí)測(cè)CV值，并且查看零標(biāo)準(zhǔn)品與最低標(biāo)準(zhǔn)品之間的OD值差異是否顯著，要是差異小于0.1，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中很容易致使弱陽(yáng)性樣本被遺漏。
特異性怎么保證
試劑盒的特異性狀況，決定了其是否僅僅結(jié)合目標(biāo)分子，而不會(huì)跟其他結(jié)構(gòu)相類(lèi)似的蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)。樣本里的異嗜性抗體或者同家族蛋白，這乃是常見(jiàn)的干擾來(lái)源。在拿到試劑盒說(shuō)明書(shū)之后，重點(diǎn)去核對(duì)“交叉反應(yīng)率”這一欄，查看清楚是否針對(duì)至少5種以上的同源蛋白進(jìn)行過(guò)測(cè)試。比如說(shuō)在檢測(cè)小鼠IL-6的時(shí)候，應(yīng)當(dāng)確認(rèn)其與人IL-6或者小鼠IL-1β不存在顯著的結(jié)合。除此之外，選用目標(biāo)基因敲除的樣本當(dāng)作陽(yáng)性對(duì)照，這是檢驗(yàn)特異性最為保險(xiǎn)的辦法。
批間差控制的技巧
批間差體現(xiàn)出不同生產(chǎn)批次之間試劑性能的那種一致性，它會(huì)直接對(duì)長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可比性造成影響。優(yōu)秀的科研ELISA試劑盒會(huì)把批間CV控制在8%以?xún)?nèi)。在選購(gòu)的時(shí)候，不要僅僅只是去看單次實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，而是要去索要三批獨(dú)立生產(chǎn)的質(zhì)控報(bào)告，然后觀察高、中、低三個(gè)濃度點(diǎn)的回收率是不是都處于85%-115%這個(gè)區(qū)間。在實(shí)驗(yàn)室日常拿來(lái)使用的時(shí)候，最好是把新批次與舊批次同一時(shí)間去檢測(cè)同一組質(zhì)控品，一旦發(fā)現(xiàn)偏差超過(guò)10%就要及時(shí)聯(lián)系供應(yīng)商去解決。
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