這段時間，與久違的一位老同學(xué)交流，聽聞他講述這兩年從事細(xì)胞實驗的充滿波折的經(jīng)歷，內(nèi)心感受頗為深刻。他于一家生物技術(shù)公司承擔(dān)研發(fā)工作，每日要與形形色色的細(xì)胞系進(jìn)行接觸。他講起最初獨自負(fù)責(zé)項目那時，最大的困擾便是細(xì)胞狀態(tài)呈現(xiàn)不穩(wěn)定的狀況，實驗得出的結(jié)果有時良好有時欠佳。而把包含有他的經(jīng)驗以及教訓(xùn)的這篇文章梳理出來，期望對于同樣在做細(xì)胞實驗的朋友們能起到一定的輔助作用。
細(xì)胞實驗總失敗的原因
去年夏天，他在上海張江的實驗室里，連續(xù)三個月重復(fù)同一個實驗，做這個實驗用的是從其他實驗室引進(jìn)的細(xì)胞株，將該細(xì)胞株傳代到第五代左右的時候，細(xì)胞形態(tài)就開始發(fā)生改變，其貼壁能力變差了，增殖速度也明顯下降了，他檢查了培養(yǎng)基、血清以及培養(yǎng)箱條件，發(fā)現(xiàn)所有參數(shù)都在正常范圍內(nèi)，然而實驗結(jié)果就是不穩(wěn)定，數(shù)據(jù)波動非常大。
他講那段日子尤為焦慮，在于項目進(jìn)程卡在這一環(huán)節(jié)，上下游的同事都在等他的數(shù)據(jù)，他嘗試復(fù)蘇一批細(xì)胞，結(jié)果同樣的狀況再度出現(xiàn)，之后與一位資深前輩交流，對方詢問他：你所使用的細(xì)胞株做過鑒定嗎？這個問題使他瞬間清醒過來。
atcc細(xì)胞系有哪些
他著手對細(xì)胞株的來源以及質(zhì)量方面的問題展開系統(tǒng)的研究，知悉在當(dāng)下全球的范疇之內(nèi)，細(xì)胞株主要存在著幾個規(guī)模較大的資源庫，當(dāng)中ATCC也就是美國典型培養(yǎng)物保藏中心，乃是在行業(yè)里被大家所認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)來源之處，ATCC所保存的細(xì)胞系數(shù)量超過三千種，并且每一個單獨的株都具備完整的背景信息以及嚴(yán)格的質(zhì)量控制流程。
他進(jìn)行了一番查察，ATCC細(xì)胞系包含著諸多常見類別，腫瘤細(xì)胞株存在HeLa、A549、MCF-7等，正常細(xì)胞株有HEK293、CHO等，每一種細(xì)胞都附帶詳盡的培養(yǎng)條件以及傳代比例建議，這使他察覺到，先前使用的那些細(xì)胞株，有許多都講不明白傳了多少代，在中間是否有交叉污染。
atcc細(xì)胞株從哪里買
確定掉方向之后，他要去解決購買渠道方面的問題。ATCC細(xì)胞株從美國運輸過來，周期是比較長的，并且價格并非低廉。他向公司申請了采購預(yù)算，于此同時去尋找國內(nèi)的授權(quán)代理商。經(jīng)過一番對比，選定了一家具備冷鏈運輸能力的正規(guī)代理商。
下單之后，到收到細(xì)胞，前后大概是三周時間。到貨當(dāng)日，他特地提前準(zhǔn)備好了所有需要的培養(yǎng)基以及耗材。打開包裝之際，干冰尚有剩余，凍存管保存得完好無損。依照說明書里的步驟來進(jìn)行復(fù)蘇操作，次日在顯微鏡下觀察，細(xì)胞狀態(tài)相當(dāng)良好。他講那一刻的心情，好似一個在黑暗里摸索了許久的人忽然看見了光亮。
使用過這批ATCC細(xì)胞過后，實驗的重復(fù)程度顯著提高提升了他依照ATCC給予提供的方法實行展開來進(jìn)行傳代以及的操作而且的舉動凍存行為，此后細(xì)胞一律一直始終都維持保持著穩(wěn)定平穩(wěn)穩(wěn)固而安定且平和良好平和友好的生長正常發(fā)展特性特征。先前不管怎樣無論如何都無法實現(xiàn)達(dá)成的實驗最終結(jié)果成果，如今現(xiàn)在當(dāng)下已然能夠穩(wěn)定安定穩(wěn)固地再次出現(xiàn)重現(xiàn)。該項目終于終于可以順順利利平平穩(wěn)穩(wěn)地向前推進(jìn)行進(jìn)延伸延展持續(xù)下去了。
細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項
依托此次經(jīng)歷，他歸納出若干條經(jīng)驗。一是，每當(dāng)獲取任意新細(xì)胞株之際，首要之事便是開展STR鑒定，以此來核驗身份不存在差錯。二是，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)赜涗泜鞔拇螖?shù)，切莫運用代次過高的細(xì)胞去實施正式實驗。第三點，定期對支原體污染予以檢測，這乃是諸多細(xì)胞問題潛藏的緣由。
他還提及，培養(yǎng)基的挑選是頗為重要的。ATCC官網(wǎng)上，會給出每一株細(xì)胞的推薦培養(yǎng)基配方，像DMEM，或者RPMI - 1640，亦或是MEM。不同的細(xì)胞，對于營養(yǎng)成分的需求差異是極為顯著的，切不可隨意去更換培養(yǎng)基的種類。血清的批次差異，同樣會對細(xì)胞狀態(tài)產(chǎn)生影響，建議在使用一批血清做夠用量測試之后，再進(jìn)行大量購買。
凍存細(xì)胞的步驟，絕不容許疏忽大意。他先前慣于徑直將凍存管放入負(fù)八十度冰箱，而后發(fā)覺如此會致使細(xì)胞存活率降低。正確的做法是運用程序降溫盒，每分鐘降低溫度大約一度。凍存液里二甲基亞硯的濃度調(diào)控在百分之五至十之間。復(fù)蘇時要迅速解凍，用預(yù)熱的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋后離心以去除凍存液。
2025年初，他所在的公司將研發(fā)規(guī)模予以擴大，此時需要同時去培養(yǎng)多種細(xì)胞系。在這個時候，ATCC細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)特性從而顯示出了優(yōu)勢。不一樣種類的細(xì)胞，其生長速度的差異顯著，依據(jù)ATCC所提供的傳代比例以及培養(yǎng)周期來對實驗作出安排，能夠做到精準(zhǔn)規(guī)劃，不會存在像需要加班等細(xì)胞長滿這類的情況。
他講，如今再回頭去看，當(dāng)初于細(xì)胞株質(zhì)量方面所節(jié)省下來的時間成本，后來全都以加倍的形式還回去了。要是從一開始便挑選來源清晰、質(zhì)量可靠的ATCC細(xì)胞，那么后續(xù)所走的彎路是完全能夠避免的。這個道理講起來是比較簡單的，然而真正親身經(jīng)歷過的人才能夠領(lǐng)會其中存在的差別。
別的渠道存在于市場當(dāng)中的細(xì)胞株，價錢只怕會更實惠些?？墒巧镅芯吭陂_展時的基石是細(xì)胞實驗，要是這一基礎(chǔ)構(gòu)筑得不穩(wěn)，那么后續(xù)即便有著再多的數(shù)據(jù)也都無謂了。去對細(xì)胞的身份以及純度加以確認(rèn)，這是以認(rèn)真負(fù)責(zé)當(dāng)基本水準(zhǔn)，來向自身實驗成果表達(dá)必要關(guān)切的行為舉措。
在去年最后的這段時間參與行業(yè)會議之際，他同別的公司的那些同行展開交流，發(fā)覺有好多人有著相似的經(jīng)歷。存在這樣的情況，有人由于細(xì)胞受到污染致使半年的相關(guān)數(shù)據(jù)變得全然無效，還有人因為細(xì)胞株出現(xiàn)錯誤從而發(fā)表了無法進(jìn)行重復(fù)驗證的論文。這些所得到的教訓(xùn)無一不在對我們進(jìn)行提示，細(xì)胞實驗的首個步驟同時也是占據(jù)著最為關(guān)鍵地位的步驟，那便是要切實保證所使用的細(xì)胞來源具備可靠性。
他如今已經(jīng)養(yǎng)成了一種習(xí)慣，每當(dāng)收到新的細(xì)胞株時，首要之舉便是去做鑒定以及進(jìn)行支原體檢測，在日常培養(yǎng)進(jìn)程里定期觀察細(xì)胞形態(tài)，記錄每一代的生長情形，這些看似繁雜瑣碎的工作，實際上是在為整個實驗結(jié)果的可靠性充當(dāng)護衛(wèi)。
要是你同樣在開展細(xì)胞實驗，正遭受細(xì)胞狀態(tài)不穩(wěn)定，或者實驗結(jié)果重復(fù)性欠佳這類問題的困擾，那么不妨去核查一下細(xì)胞株的來源以及質(zhì)量。有時問題并非出在操作手法方面，而是在于最為基礎(chǔ)的物料是否可靠。挑選經(jīng)過嚴(yán)格驗證的細(xì)胞株，會使后續(xù)的研究工作暢順許多。
