就在上個月，我的老朋友張峰，從上海這個地方，給我撥來了電話，其語氣之中，帶著顯著的疲憊感。
他進入了一家投身于生物技術領域的公司，承擔著產品研發(fā)方面的職責，已然付出了將近六年的時光，其技術功底十分堅實，在相關圈子范圍之內擁有了一定的知名度。
就在那通電話當中，他朝著我講起自身最近馬上就要被逼迫得瘋狂了，并不是技術方面出現(xiàn)難題，而是一個看起來好像很簡單的問題，那就是酶活性檢測。
說起事情，得從今年3月開始。張峰所在的那家公司接到了一個新的項目，這個項目要求對一批樣本中的酶活性進行頻繁檢測。
他起初采用的是實驗室早前便有的方法，也就是紫外分光光度法，此方法的操作流程頗為繁雜，每一次進行檢測的時候都得去配置嶄新的試劑。
在3月中旬的那一周，他接連開展了三次重復性的實驗，然而所得到的結果在差異方面大到了極其離譜的程度。客戶之方向這邊催促得十分緊迫，項目的負責人每日都密切關注著進度。
張峰后來跟我喝酒的時候講，“我這個家伙那個時候實實在在地對人生抱有懷疑的態(tài)度了”，“同樣的樣本，同樣樣式的操作，上午以及下午測出來的數(shù)值居然相差百分之二十”。
他著手展開對原因的排查，移液槍已經(jīng)進行過校準，恒溫箱的溫度處于正常狀態(tài)，甚至就連水浴鍋都已經(jīng)更換了兩臺。
經(jīng)過了一周的忙碌，問題始終未曾得到解決。在四月初的某一個下午時分，他身處實驗室之中。熬到夜晚十點之際，他只是對著那些數(shù)據(jù)，呆呆地發(fā)愣。
身在隔壁工位的小李，腳步挪動著走了過來，目光投向他的記錄本瞧了瞧，嘴唇微微開啟問出說道：“峰哥，你思索考量過更換轉變檢測方法嗎？”。
當時，張峰沒在意，認為方法換來換去太過折騰。然而，到了第二天，他又再度看著飄忽的數(shù)據(jù)，最終徹底沒了脾氣。
他憶起小李講過的話語，遂開端于專業(yè)論壇當中，以及同行群里，去翻找查看討論情況。好多人都提及過一個詞匯：此乃比色法。
張峰花了三天時間，把市面上幾種檢測方法仔細梳理了一遍。
成本較低的傳統(tǒng)紫外法，對儀器有著較高要求，樣本當中的雜質極易干擾讀數(shù)。
熒光法具備高靈敏度，然而卻需要特殊類型的標記物，其操作流程更為繁雜，稍有不慎便會引入誤差。
提及比色法，聽起來好像相對而言較為簡單，其原理乃是利用酶反應所產生的顯色物質，借助顏色的深淺程度來判斷活性的高低情況。
但是，他以往對于比色法的印象為“不夠精確”，一直覺得那是用于教學演示的工具。
4月10日出現(xiàn)了轉折，張峰參與了一場線上技術交流會，有一位同行講述了采用比色法試劑盒的經(jīng)歷。
那人講了這么個事兒，如今的商品化試劑盒與當年的“玩具”已然不同，預配好試劑，有著標準化流程，搭配優(yōu)化后的反應體系，使得數(shù)據(jù)穩(wěn)定性有了大幅提升。
心存疑慮的張峰，拿定主意靠自己去親身嘗試，他向公司提出了申請。申請采購兩款品牌不一樣有對比檢測作用且涉及酶活性的比色法檢測試劑盒。
第一款到貨后，他立刻拿之前出問題的樣本做對比測試。
4月15日，他開展操作依循說明書：將試劑解凍，進行加樣，予以混勻，實施孵育，然后上機讀數(shù)。整個流程用時未達四十分鐘。
當結果顯現(xiàn)出來之際，他出現(xiàn)了短暫的一愣，那經(jīng)過三次反復核驗的數(shù)據(jù)，其變異系數(shù)大概僅僅只有百分之三。
原本他心里不踏實，到了第二天的時候，他再次進行了測量，此次測量所采用的樣本是相同的，并且操作方式也是一樣的，最終得出的結果幾乎是完全相同的。
張峰，于電話之中，向我描繪那個剎那，這般說道，仿若于黑暗里持續(xù)行走許久，陡然間瞧見光亮了。
然而，他并未匆忙地去作出結論。緊接著的那一周，他借助這款試劑盒持續(xù)不斷地檢測了六十多個樣本，與此同時，他還將其中一部分送往合作實驗室，采用其他方法進行復核。
經(jīng)比對得出的數(shù)據(jù)，使得他完全信服了、比色法試劑盒所呈現(xiàn)的檢測結果，與傳統(tǒng)方法之間的相關性，已然達到了百分之九十五以上。
更為關鍵的是，操作的時間由之前的兩個多小時縮減至四十分鐘以內，配制試劑、調節(jié)pH值這類易于出現(xiàn)差錯的諸多步驟，統(tǒng)統(tǒng)都被之前就預先安裝好的試劑管給替代了。
4月22日，張峰于公司內部進行了一個作了小型分享，所選用的題目為，“比色法試劑盒于酶活性檢測里的那種應用后所產生的體會”。
他歸納了好些重點之處：其一，用于商品化的試劑盒批號間的差把控成效良好，針對不同批號的試劑去檢測同一批樣本，所呈現(xiàn)的差異極為微小。
比色法具備著寬闊得足夠的線性范圍，致使對樣本進行反復稀釋這一操作無需操辦，繼而使得那作為作業(yè)誤差的源頭被削減了。
這件最令他感到意外的事情，乃是試劑盒的穩(wěn)定性。在打開包裝之后，依據(jù)說明書對其進行保存，于一個月之內使用，均不會出現(xiàn)任何問題。
聽完他所作報告之后項目處于負責崗位之人，在現(xiàn)場當即做出決定，日后即將開展的檢測全都變更為采用比色法試劑盒。
張峰跟我敘說了一番，他表明當下每日清晨抵達實驗室，首要之事便是查驗試劑盒的庫存情況，整個團隊的工作效率提升幅度超過了一倍，有顯著的增長。
在上周末的那時候我們再一次迎來了見面彼時他整個人的那種狀態(tài)相較于之前好了許多好多當話題聊到這段經(jīng)歷的時候他滿是感慨神情動容說了這樣的一句話語那就是“有的時候并非是技術存在不足達不到水平而是由于你沒能挑選到正確的工具”。
之后，他針對原理展開了一番研析，發(fā)覺當下的比色法試劑盒具備穩(wěn)定性這一情況，乃是源于廠家實施了諸多的優(yōu)化作業(yè)。
比如，反應體系當中的緩沖液成分，顯色劑的濃度，穩(wěn)定劑的配比，這些均是經(jīng)過反復驗證的。
在他身為研發(fā)人員，每天有幾十個樣本需要面對的情況下，可靠性相較于其他任何事物都更為重要。
他提及了這么一個相關細節(jié)，以往運用傳統(tǒng)方式辦法時，每做一次檢測，都得去制作標準曲線，這至少會占用半個小時的時間。
采用比色法試劑盒之后，試劑盒所附帶的標準品是經(jīng)過溯源的，直接依照說明書去操作便可，免除了自己制作標準曲線的繁雜之事。
張峰身處的那家公司，當下已將比色法試劑盒列為常規(guī)檢測所推薦采用的方法，每當碰到有新入職的同事，他都會給出建議，讓其先嘗試運用這個方法。
## 酶活性檢測，準不準關鍵看三點
被張峰踩過的坑，事實上諸多的人都踩過。酶活性的檢測看上去簡易，然而實際去做的時候，影響的因素數(shù)量眾多。
一度的溫度差，結果便興許會差出百分之五。一分鐘的反應時間差，顏色的深淺全然不一樣。
那些變量被比色法試劑盒的核心優(yōu)勢給控制住嘍，試劑是預先配制好的，操作步驟是標準化的，你只需依照流程去做就行啦。
## 比色法試劑盒好在哪
張峰對三種有著不同檢測原理的情況做了對比，最終選取了比色法，這并非源于其他緣由，僅僅是鑒于它具有穩(wěn)定的特性，具備省事的特點，并且能夠重復進行。
不比色法的原理是不復雜的。是酶催化底物反應之后，會生出一種有顏色的物質這事。顏色越是深的話，酶活性就是越高的。
把分光光度計拿來，讀取數(shù)據(jù)，此數(shù)據(jù)為吸光度值，將其代入公式，如此這般就能算出活性數(shù)據(jù)。要知道，整個過程之中，并不涉及危險試劑，并且也不需要昂貴儀器來開展相關操作。
## 怎么選靠譜的試劑盒
當前市面上、存在著不少、關于酶活性比色法檢測試劑盒的品牌，張峰曾踩過兩個坑，而后總結出了三招。
首先要看批間差，對于質量優(yōu)良的試劑盒而言，針對不同批次，在檢測同一樣本時，其結果差異會被控制到百分之五以內。
第二，要看線性范圍，樣本活性存在高低差異，試劑盒需能夠覆蓋常見的濃度范圍，且不需要進行反復稀釋。
首先看穩(wěn)定性，關于說明書里所寫的保存條件以及有效期，在實際使用過程當中，必須要能夠經(jīng)受得住相應的考驗。
現(xiàn)在張峰所使用的這款，針對四攝氏度的保存條件進行嘗試，經(jīng)過試過之后，又針對零下二十度的保存條件進行嘗試，試過之后，其性能具備沒有明顯衰減的情況。
## 操作時容易忽略的細節(jié)
并非認為憑借試劑盒便一切妥當了。張峰告誡過團隊當中不少人。要是存有幾個細節(jié)未加以留意，依舊會遭遇失敗的局面。
加樣的順序是絕對不可以錯亂的，存在著這樣的情況，有的試劑是必須要先添加底物的，而有的試劑則是需要在后面添加顯色劑的，一旦順序出現(xiàn)了顛倒，那么反應就無法順利推進了。
孵育溫度得把控妥當 ，比色反應針對溫度彰顯敏感特性 ，水浴鍋抑或是恒溫箱的溫度波動幅度不能夠超越正負零點五度。
讀取數(shù)據(jù)的時候，那個時機必須要精準無誤。若是反應所經(jīng)歷的時間過長，又或者是過于短暫，那么顏色都尚未抵達穩(wěn)定的時期，如此讀出來的數(shù)值就不存在任何意義了。
在 4 月底有一次內部培訓，是張峰做的，他把容易出錯的，六個細節(jié)一一列成檢查表，之后將檢查表貼在了實驗室墻上。
## 數(shù)據(jù)不穩(wěn)定？先排查這三項
如果你的檢測結果總是起伏不定，張峰建議從三個方面下手。
查看樣本處理的方式是不是保持統(tǒng)一標準，酶于體外之時極其容易喪失活性，凍融的次數(shù)以及保存的時間均會對其活性產生影響。
校驗反應體系有無混入了雜質，比色法對于顏色的變化是敏感的，且對樣本里的色素或者沉淀會干擾獲取示數(shù)。
試劑盒是否在有效期限之內進行檢查，試劑若過期或者保存方式不恰當，那其顯色的能力就會出現(xiàn)下降的情況。
靠這三板斧的是張峰，原本團隊的數(shù)據(jù)合格率在百分之七十幾，經(jīng)此把其拉到了百分之九十五以上。
回溯這一個月的心路經(jīng)歷過程，他發(fā)覺最大的收獲并非是尋找到了一個優(yōu)質的工具，而是領悟了一個道理，即碰到問題時不要一味地鉆牛角尖，要換一種角度去思索辦法，或許出路就在當下眼前。
當前，于他所在的團隊之中，每一個人都已然嫻熟地掌握了運用酶活性比色法檢測試劑盒的方式方法。新的項目被承接進來之后，首要的反應并非是感到頭疼，而是依照既定的流程拿取出試劑盒，有條不紊地去走上一遍。
這邊的這篇文章所寫的內容，正是張峰的實際發(fā)生過的經(jīng)歷，希望那些正處于被酶活性檢測這件事所困擾著的朋友，能夠從中獲得一定的幫助。
若是覺著具備用處，不妨將其收納起來，或者傳遞給身旁同樣從事檢測工作的同行。
