去年十月，有個(gè)周末，我身處中科院上海生命科學(xué)研究院的實(shí)驗(yàn)室，瞧著老同學(xué)李明，對(duì)著酶標(biāo)儀發(fā)愣。他當(dāng)時(shí)正在進(jìn)行一個(gè)細(xì)胞因子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，然而，結(jié)果板上的顯色梯度竟是全然紊亂無(wú)序，陰性對(duì)照的吸光度值，居然比陽(yáng)性的還要高。
李明在博士畢業(yè)之后，于一家從事生物科技的公司里擔(dān)任研發(fā)組長(zhǎng)一職，其主要負(fù)責(zé)的工作是針對(duì)腫瘤免疫方面開(kāi)展靶點(diǎn)驗(yàn)證。他手頭正有著十幾個(gè)項(xiàng)目處于推進(jìn)的進(jìn)程當(dāng)中，并且每個(gè)季度都需要去檢測(cè)上百個(gè)樣本里面的炎癥因子濃度。然而在最近的三個(gè)月時(shí)間里，他接連兩次由于試劑盒所出現(xiàn)的數(shù)據(jù)異常從而致使整批實(shí)驗(yàn)全部報(bào)廢。
咱們所養(yǎng)的歷經(jīng)兩個(gè)月時(shí)長(zhǎng)的原代細(xì)胞所形成的這批樣本，就這么毫無(wú)價(jià)值地被廢棄掉了 ，李明一邊揉著太陽(yáng)穴一邊這樣表述著 ，在周會(huì)上領(lǐng)導(dǎo)已經(jīng)針對(duì)小組數(shù)據(jù)重現(xiàn)性差這個(gè)問(wèn)題三次點(diǎn)到了他們組的名字。
某位男士，之前一直使用的是某一個(gè)進(jìn)口品牌的用于科研的 ELISA 試劑盒，其價(jià)格并不便宜，而且貨期竟然需要三周時(shí)間。就在今年，公司決定壓縮研發(fā)方面的成本，采購(gòu)部門(mén)向他提出建議，讓他嘗試使用國(guó)內(nèi)某一個(gè)廠家所生產(chǎn)的產(chǎn)品。有位名叫李明的人，經(jīng)過(guò)一番計(jì)算，算出如果換用國(guó)產(chǎn)試劑盒，那么每一塊板能夠省下差不多三百塊錢(qián)，按照一年來(lái)計(jì)算，竟然能夠節(jié)省七八萬(wàn)。
但誰(shuí)能預(yù)料到，在換上新試劑盒之后的首個(gè)板子便出現(xiàn)了差錯(cuò)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的R平方值僅僅為0.89，四個(gè)復(fù)孔的變異系數(shù)越過(guò)了百分之十五，李明那時(shí)覺(jué)得是實(shí)驗(yàn)操作存在問(wèn)題，將移液器以及洗板機(jī)都校準(zhǔn)了一回，還讓技術(shù)員再次配制了所有溶液，第二次跑出的結(jié)果略微好了一些，然而低濃度樣本的定量值仍然飄忽不定。
那段時(shí)期，李明每日都沉浸于實(shí)驗(yàn)室之中，針對(duì)同一個(gè)樣本，反反復(fù)復(fù)地進(jìn)行了六次測(cè)量，然而最終所得到的結(jié)果，其中最高的數(shù)值與最低的數(shù)值之間，相差幅度幾乎達(dá)到了一倍之多。隨后，他將這些數(shù)據(jù)發(fā)送至行業(yè)群里，尋求眾人的幫助，這時(shí)有一位師兄對(duì)他發(fā)出了提醒，告知他說(shuō)：“你應(yīng)當(dāng)首先去查明白那個(gè)試劑盒的檢出限以及定量限具體是多少，因?yàn)楹芏嘈⌒蛷S家所提供的說(shuō)明書(shū)里面，這兩個(gè)數(shù)值都是存在虛假標(biāo)注情況的?！?。
李明這才著手認(rèn)真鉆研科研 ELISA 試劑盒的技術(shù)參數(shù)，他發(fā)覺(jué)先前只顧瞅價(jià)格與貨期，卻遺漏了最為關(guān)鍵的兩項(xiàng)指標(biāo)，即批間差與批內(nèi)差。那個(gè)國(guó)產(chǎn)試劑盒說(shuō)明書(shū)標(biāo)明批內(nèi)差小于百分之八，批間差小于百分之十二，然而他自行做驗(yàn)證后發(fā)覺(jué)，同一塊板子上的三個(gè)重復(fù)孔，變異系數(shù)竟達(dá)到了百分之十四。
去年十二月中旬時(shí)段，李明于北京參與了一場(chǎng)免疫檢測(cè)技術(shù)研討會(huì)議，會(huì)上有一位專(zhuān)家分享了一組數(shù)據(jù)，在市售科研 ELISA 試劑盒當(dāng)中，大概有三成的產(chǎn)品實(shí)際靈敏度無(wú)法達(dá)到說(shuō)明書(shū)所聲稱(chēng)的數(shù)值，尤其是那些用以檢測(cè)低豐度細(xì)胞因子的試劑盒，這個(gè)比例使得李明心里一驚，他馬上將自己常用的幾個(gè)靶點(diǎn)試劑盒全都開(kāi)展了性能驗(yàn)證。
李明從每個(gè)批次試劑盒中，取出三塊板子，用同一標(biāo)準(zhǔn)品梯度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)檢測(cè)三個(gè)已知濃度的質(zhì)控品，其驗(yàn)證方法并不復(fù)雜，連續(xù)驗(yàn)證兩周后，他整理出一份報(bào)告，報(bào)告顯示在檢測(cè)濃度低于每毫升五十皮克的樣本時(shí)，四款試劑盒的變異系數(shù)超過(guò)百分之二十，根本達(dá)不到科研論文發(fā)表要求。
今年一月，李明向公司申請(qǐng)了一筆專(zhuān)項(xiàng)經(jīng)費(fèi)，這筆經(jīng)費(fèi)專(zhuān)門(mén)用來(lái)篩選靠譜的科研ELISA試劑盒供應(yīng)商。他花費(fèi)三天時(shí)間，將國(guó)內(nèi)外八個(gè)品牌的同靶點(diǎn)試劑盒拿來(lái)做對(duì)比實(shí)驗(yàn)。每天從早上九點(diǎn)開(kāi)始做，一直做到晚上十一點(diǎn)，光是洗板就洗了將近兩百次。
最終取得勝利的是一款來(lái)自國(guó)產(chǎn)新興品牌的產(chǎn)品 ，那個(gè)試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中R平方數(shù)值穩(wěn)固在0.998以上 ，低濃度樣本的回收比率達(dá)成了百分之九十二至百分之一百零七。最令李明感到滿(mǎn)意的是批間一致性 ，他運(yùn)用連續(xù)三個(gè)批次的試劑盒去檢測(cè)同一個(gè)樣本 ，結(jié)果的變異系數(shù)僅僅只有百分之五點(diǎn)三。
以后來(lái)跟我詳細(xì)分享此次踩坑經(jīng)過(guò)的李明的話(huà)語(yǔ)以及行為為根據(jù)，總結(jié)生成了篩選科研ELISA試劑盒時(shí)需重點(diǎn)考量的幾個(gè)硬性標(biāo)準(zhǔn)。首先來(lái)講，是針對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍的觀察分析，性能較佳的試劑盒，在依照說(shuō)明書(shū)所明確標(biāo)注的范圍之內(nèi)，其R平方值應(yīng)當(dāng)處于不低于0.99這樣的水準(zhǔn)。其次呢，是對(duì)低濃度端表現(xiàn)情況的著重關(guān)注，選取處于檢出限附近的三到五個(gè)濃度測(cè)點(diǎn)，分別展開(kāi)測(cè)試活動(dòng)，進(jìn)而判斷變異系數(shù)是否小于百分之十五。
第三點(diǎn)，是存在著沒(méi)法躲避的批間差驗(yàn)證。李明給出建議，每一回新批次的試劑盒抵達(dá)之后，都得使用起碼一個(gè)有名確濃度的質(zhì)控品去跑一回確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。他結(jié)識(shí)一家CRO公司的技術(shù)總監(jiān)，對(duì)方作出規(guī)定，每個(gè)批號(hào)的試劑盒都一定要同舊批次開(kāi)展平行對(duì)比，數(shù)據(jù)偏差要是超出百分之十便直接進(jìn)行退貨。
易被忽視卻存在的細(xì)節(jié)之中，有試劑盒的組分兼容性這一項(xiàng)。部分品牌會(huì)時(shí)常變換捕獲抗體或者檢測(cè)抗體的供貨商，致使不同批次的板子包被效率呈現(xiàn)出各異的情況。李明在每一次訂購(gòu)科研 ELISA 試劑盒以前，都會(huì)向廠家索要近三個(gè)批次的質(zhì)控報(bào)告，以此來(lái)確認(rèn)關(guān)鍵原料未曾有變動(dòng)。
今年三月份的時(shí)候，有一個(gè)由李明負(fù)責(zé)的項(xiàng)目，這個(gè)項(xiàng)目要投稿到行業(yè)內(nèi)的頂刊。審稿人提出要求，要提供所有ELISA檢測(cè)數(shù)據(jù)的原始記錄以及試劑盒的批次信息。于是李明去翻實(shí)驗(yàn)室記錄本，在本子上面詳細(xì)記錄著每個(gè)樣本所對(duì)應(yīng)的試劑盒批號(hào)、標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)以及質(zhì)控品測(cè)定值。恰好是因?yàn)樵谧铋_(kāi)始的時(shí)候做了充足的性能驗(yàn)證，所以審稿人對(duì)于數(shù)據(jù)質(zhì)量沒(méi)有提出任何的質(zhì)疑。
現(xiàn)今，李明于公司之中已然成為科學(xué)采購(gòu)試劑盒的“內(nèi)部顧問(wèn)”。每周，皆會(huì)有人攜帶著試劑盒的說(shuō)明書(shū)前來(lái)尋他，詢(xún)問(wèn)他這個(gè)參數(shù)究竟能否可信。他予以的回應(yīng)極為徑直：切莫僅僅去瞧說(shuō)明書(shū)，得親自著手去做驗(yàn)證。耗費(fèi)兩天光陰去跑一塊驗(yàn)證板子，才可規(guī)避后續(xù)兩個(gè)月的數(shù)據(jù)全然作廢。
上一個(gè)月，李明率領(lǐng)隊(duì)伍參與了長(zhǎng)三角地區(qū)舉辦的免疫檢測(cè)技能比武，其團(tuán)隊(duì)運(yùn)用自行研發(fā)的驗(yàn)證方案，即在盲樣測(cè)試?yán)?，將六個(gè)靶點(diǎn)的定量誤差全都控制于百分之八以?xún)?nèi)情形下，獲得了團(tuán)體第二名。在領(lǐng)獎(jiǎng)之際，李明講了一句實(shí)在話(huà)：并非是他們自身技術(shù)多么厲害，而是他們所使用的科研 ELISA 試劑盒能夠經(jīng)受住驗(yàn)證。
倘若你同樣正為ELISA數(shù)據(jù)不穩(wěn)定而發(fā)愁，那么不妨如同李明那般，耗費(fèi)一周時(shí)間將你的試劑盒全都取出來(lái)進(jìn)行檢驗(yàn)。從檢出限開(kāi)始，到批間差，再?gòu)臉?biāo)準(zhǔn)曲線直至質(zhì)控回收率，每一項(xiàng)指標(biāo)都得出實(shí)在的數(shù)據(jù)。不要等到一整套樣本全都檢測(cè)完畢才發(fā)覺(jué)結(jié)果不可靠，那個(gè)時(shí)候所損失的就不單單是試劑盒的費(fèi)用了。
倘若這篇文章具備有用性，那么建議率先將其收藏起來(lái)。在下次開(kāi)展采購(gòu)科研 ELISA 試劑盒的行動(dòng)之前，不妨把它翻找出來(lái)瞧一瞧，依照其中所呈現(xiàn)的驗(yàn)證方法逐一梳理一遍，如此能夠?yàn)槟銣p少諸多不必要的曲折路途。
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