實驗室里的轉(zhuǎn)折點：一個朋友的ELISA試劑盒使用心得
上一周呢，跟老相識陳旭通了電話，他才從上海飛回到成都，那聲音當(dāng)中帶著沒法隱藏住的興奮之情。
他講，自身近來半年于項目之處取得了一次極為出色的扭虧為盈之成效，然而這所有狀況的起始點，竟然僅僅是一盒體積微小的ELISA試劑盒。
我要求他講述得更為詳盡，終歸處在這個業(yè)內(nèi)范圍里，能夠?qū)⒚嘎?lián)免疫吸附測定做得出色的人員并非少，然而能夠于困境當(dāng)中尋覓到突破點的，才算是真正的能力。
他打來的這通電話，講了差不多快兩個小時，我發(fā)覺，他所擁有的經(jīng)驗，對于好多從事蛋白檢測工作的人而言，應(yīng)當(dāng)是頗具價值的。
接著，便要將他所經(jīng)歷的事情書寫出來，期望對于此刻正與 ELISA 試劑盒有所關(guān)聯(lián)的你，能夠產(chǎn)生一些具有實際意義的助力。
陳旭和他的老本行
陳旭是我大學(xué)同學(xué)，畢業(yè)后一直在成都一家生物技術(shù)公司做研發(fā)。
細(xì)胞上清以及血清樣本里的細(xì)胞因子檢測這活，主要是他在做，每個月起碼得跑十幾塊ELISA板子。
照他個人的講法，ELISA試劑盒，相當(dāng)于是他維持生計的根本所在，整日整夜，不停歇地，一直圍繞著如何能促使數(shù)據(jù)呈現(xiàn)得更為美觀、怎樣能令測試結(jié)果具備更高可靠性展開思索、鉆研。
公司主要是為各大高校供應(yīng)檢測服務(wù)，還為各科研院所供應(yīng)檢測服務(wù)，所以，他們所擁有的實驗數(shù)據(jù)必然要能夠禁得起反復(fù)去進(jìn)行驗證。
前年的那個三月份之時，陳旭承接下了一個涉及炎癥標(biāo)志物進(jìn)行檢測的項目，其樣本數(shù)量并非很少額，客戶提出之要求也是頗高之狀態(tài)。
第一批數(shù)據(jù)出了問題
項目起初的時候，還算得上是比較順?biāo)斓模愋袼捎玫?，乃是先前始終都在合作的某一個品牌的ELISA試劑盒，其操作流程熟悉到了能夠背誦下來的程度。
等到進(jìn)行到第五塊板子的操作時，狀況出現(xiàn)了。標(biāo)準(zhǔn)曲線的R平方值橫豎無法提升上去且一直徘徊在0.95左右，而復(fù)孔的變異系數(shù)同樣大于正常偏多。
那邊客戶正催促著結(jié)果，陳旭著急得嘴上都長出泡來了。他依照標(biāo)準(zhǔn)流程對孵育溫度進(jìn)行了排查，又對洗板次數(shù)予以排查，還對顯色時間進(jìn)行了排查，然而問題仍舊存在。
一周，在四月份的那個時段，他接連三天加班直至凌晨，將過去半年的實驗記錄全部翻看了一遍，然而依舊沒有找到原因。
我向他講，要不然去換另外一批ELISA試劑盒嘗試嘗試看？然后他表述公司庫存存在兩盒相同批次的，先去試著看一看。
偶然看到的一份參考資料
換掉使用同一品牌但是不一樣批次的試劑盒之后，問題一點兒都沒有得到改善，如此一來陳旭便開始去疑心試劑盒自身存在質(zhì)量波動的情況了。
那時節(jié)，他于白日之內(nèi)，整日整天地置身于實驗室之中，而在業(yè)余的時段里，便會在網(wǎng)絡(luò)之上尋覓資料，細(xì)細(xì)察看各類技術(shù)論壇里所展開的討論。
五月上旬的時候，他尋覓到一份技術(shù)文檔，這份文檔是關(guān)于ELISA試劑盒操作要點內(nèi)容的，在其中詳盡講述出測項目樣本稀釋液基質(zhì)效應(yīng)對結(jié)果的影響。
那份文檔當(dāng)中提到了這樣一個情況，眾多的實驗室疏于留意一個細(xì)微之處，血清樣本以及標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的基質(zhì)存在著差異，這件事能夠致使標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率發(fā)生偏移。
陳旭這才發(fā)覺，其所使用的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液乃是試劑盒自身所攜帶的，然而他自身的血清樣本基質(zhì)更為繁雜，并未進(jìn)行基質(zhì)匹配。
那個發(fā)現(xiàn)使得他一下子開朗了許多，馬上對實驗方案做出了調(diào)整，將標(biāo)準(zhǔn)品使用和樣本一樣的稀釋液再次進(jìn)行配制。
親自驗證參考資料的可操作性
參照那篇有著相關(guān)建議的文檔，陳旭對一個小實驗進(jìn)行了重新設(shè)計，他采用了三組來源各異的血清基質(zhì)，分別去稀釋標(biāo)準(zhǔn)品以及樣本。
得到的結(jié)果清晰可辨：針對進(jìn)行了基質(zhì)匹配操作的那一組而言，標(biāo)準(zhǔn)曲線所對應(yīng)的R平方值穩(wěn)穩(wěn)當(dāng)當(dāng)?shù)靥幱?.998以上的位置，而復(fù)孔CV值同樣也降低到了5%以內(nèi)。
而那些不存在匹配情況的組，數(shù)據(jù)跟先前一樣差勁。陳旭開心無比，差點就要在實驗室里叫嚷出來，他曉得自己尋得了問題的關(guān)鍵所在。
可是呢，問題并非全然得到了解決，開展新ELISA試劑盒批次的過程中，盡管曲線呈現(xiàn)出了良好狀態(tài)，然而所測定出來的樣本濃度和先前相比存在著極大的差距。
這表明除去基質(zhì)效應(yīng)之外，尚有別的因素處于干擾狀態(tài)。他再度翻出那份參考資料，瞧見后面還闡述了試劑盒儲存溫度對于靈敏度的長期影響。
深入排查每個環(huán)節(jié)
陳旭作出決定要來把整個ELISA操作全部經(jīng)過來都徹頭徹尾詳細(xì)檢點梳理一回 ，他將實驗室的溫度記錄本取出來,瞧見在此之前的一個月里那冰箱的溫度存在著兩次幅度較為大一些得振動波動。
那是四月中天的時候，實驗室里用于存放東西的冰箱，由于對其進(jìn)行除霜操作，致使溫度朝著零下十度以上攀升升高，這種狀態(tài)持續(xù)進(jìn)行了差不多將近四個小時。
而那一批出現(xiàn)問題的ELISA試劑盒，恰好擺在冰箱門邊的地方，溫度波動是最為明顯的。
他急忙去聯(lián)系試劑盒廠家的技術(shù)支撐人員，而后對于抗體和酶結(jié)合物對溫度敏感，以及任何反復(fù)凍融現(xiàn)象致使活性下落，還有溫度過高造成活性下落，對方都向他給出提示。
廠家給出建議，建議他在每次使用之前，將試劑盒當(dāng)中的各個組分，進(jìn)行分裝保存，以避免出現(xiàn)反復(fù)凍融的情況。陳旭依照這個建議做了，并且，還特意購買了一個小冰箱，用來單獨放置試劑盒。
操作細(xì)節(jié)決定成敗
六月的時候，陳旭獲取到了新一批次的ELISA試劑盒，這一回他依照改進(jìn)之后的流程來進(jìn)行操作。
樣本基質(zhì)用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，所有試劑需提前半小時從冰箱取出進(jìn)行回溫，洗板之時要嚴(yán)格把控每孔的洗液量以及浸泡時間。
第二塊板子跑完后它居然學(xué)會了運用酶標(biāo)儀具備的雙波長讀數(shù)功能，進(jìn)而降低了背景干擾，這個時候第一塊板子跑完所呈現(xiàn)出的標(biāo)準(zhǔn)曲線R平方值為0.999，而復(fù)孔CV值是3.2%，真是讓人驚訝不已！
客戶于收到數(shù)據(jù)而后相當(dāng)滿意，講這是他們歷經(jīng)半年所看過最為穩(wěn)定的檢測成果。陳旭隨后跟我這般予以表述，他在那幾日睡覺之時都因其而笑醒。
然而項目尚未結(jié)束，后續(xù)存在將近五十個樣本有待檢測。他務(wù)必保證每一塊板子的結(jié)果均可重復(fù)。
建立自己的質(zhì)控體系
首先，陳旭著手將這段時期所學(xué)到的經(jīng)驗予以系統(tǒng)化，接著，他構(gòu)建出了一套針對實驗室內(nèi)部的 ELISA 質(zhì)控流程。
每逢他運用全新的 ELISA 試劑盒之際，皆會率先開展一回預(yù)實驗，以此去驗證標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性狀況以及回收率情況。
對于每一個樣本，他始終堅持去做兩個復(fù)孔，而且每一塊板子都要帶上三個具備不同濃度的質(zhì)控品，以此來監(jiān)測板間差異。
他把這些操作方面的細(xì)節(jié)，寫成了標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)程，序分享給公司里的其他同事，七月中旬他曾負(fù)責(zé)那個項目，順利搞成了結(jié)題。
令他愈發(fā)開心的是，往后的幾個月當(dāng)中，他所跑的二十多塊板子，均未曾再度呈現(xiàn)出過大的波動情況。
在國慶節(jié)來臨之前，公司進(jìn)行了一批新的ELISA試劑盒的采購行動，陳旭也參與其中，涉及到供應(yīng)商評估環(huán)節(jié)，并且依據(jù)他自身所擁有的經(jīng)驗，提出了幾條關(guān)于選擇方面的標(biāo)準(zhǔn)。
從困境中總結(jié)三個關(guān)鍵點
我向陳旭發(fā)問，要是讓他給才開始接觸ELISA的人給出一點建議，那他最想要說的會是什么，他思索了一番，歸納出了三條。
當(dāng)拿到隨便哪一款ELISA試劑盒之時，預(yù)先務(wù)必看明白說明書當(dāng)中記錄著的樣本類型，還有與之對應(yīng)的稀釋液建議，千萬不要遺漏掉基質(zhì)匹配這一要點，記住了嗎，這可是非常重要的呀！
試劑盒儲存以及使用的各項細(xì)節(jié)實在是極為重要，溫度這一方面，分裝的情況，還有回溫的狀況，這些看起來并不起眼的要點常常就是問題產(chǎn)生的根源所在。
必須要有屬于自身的質(zhì)控體系，標(biāo)準(zhǔn)曲線以及質(zhì)控品乃是最為好用的監(jiān)控工具，切莫嫌麻煩。
他講，這些事物，在諸多技術(shù)文檔之中均有記述，不過，當(dāng)自身未曾遭遇吃虧狀況之際，壓根不會將其置于心上。
當(dāng)下，他每跑一塊板子，心里都會將這些要點逐一過一遍，此情形已然形成了肌肉記憶。
后來怎么樣了
今年三月期間，陳旭身處的公司承接了一個全新項目，此項目的必需任務(wù)是對一批著實珍貴的樣本里的多個指標(biāo)展開檢測。
樣本數(shù)量極為稀少，每一項指標(biāo)僅能夠開展一回檢測，不存在再次進(jìn)行的可能性，公司的領(lǐng)導(dǎo)專門指定陳旭來承擔(dān)責(zé)任。
他運用自己歸納總結(jié)得出的那一套方法，挑選了口碑一直穩(wěn)定的ELISA試劑盒，預(yù)先把充分的預(yù)實驗給做好了。
成果極其理想，各項指標(biāo)所關(guān)聯(lián)的數(shù)據(jù)均坐落于預(yù)期范疇之內(nèi)，客戶徑直簽署了后續(xù)為期一年的合作協(xié)議。
上個月份所在公司于內(nèi)部展開評優(yōu)活動，陳旭憑借自身表現(xiàn)拿到一個被名為技術(shù)創(chuàng)新獎的獎項，該獎項附帶的獎金數(shù)額為兩萬塊，之后他相邀我們幾個往昔的老同學(xué)共同參與了一頓火鍋的飲食活動。
在飯桌上，他講了這樣一番話，倘若不是去年那段日子，被ELISA試劑盒搞得疲憊不堪，他估計直到眼前，依舊會不斷重復(fù)那些非常低級的錯誤。
有的時候，那種處于困境的狀況，真的堪稱是尤為出色且絕佳的老師，重點在于，你是不是能夠讓自己的心安靜下來 ，由此找尋且找出問題的根源所在。
給同行的一點參考
陳元的閱歷事實上蠻具代表性的，好多從事蛋白檢驗的人都將會碰到相仿的狀況。
ELISA試劑盒自身質(zhì)量存在著等次不一的狀況，然而更多情形下，問題是出在了使用階段的操作以及細(xì)節(jié)把控方面。
倘若你當(dāng)下也正遭受著標(biāo)準(zhǔn)曲線欠佳、重復(fù)性不佳或者回收率偏下的困擾情況或許首先可以從下面幾處進(jìn)行排查。
查驗一下，你的樣本基質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液是不是吻合，確認(rèn)試劑盒在所涉及的儲存這塊以及分裝方面有無差錯。
試探一下洗板機(jī)是不是得進(jìn)行校準(zhǔn)，又興許洗板手法是不是得去做些調(diào)整；最終可千萬不能夠忘掉質(zhì)控品存在著的重要性。
這種些要點講起來容易，然而每一項都值得你耗費時間仔細(xì)檢驗。期望陳旭的事跡能給你些許啟迪。
