一個實驗室老手的真實經(jīng)歷
有個叫王磊的朋友，我以前認識他，他從事生物試劑研發(fā)工作，干了將近十年，算得上是老手了。去年年末，他更換到一家從事體外診斷試劑的公司，負責產(chǎn)品質控方面的事。初開始的那幾個月，他天天向我傾訴抱怨，講新公司的 ELISA 檢測試劑盒存在諸多問題，把他弄得疲憊不堪、萬分苦惱。
那時我居然嘲笑他，講您這般老于世故之人怎會被試劑盒難住呢？他滿是不服氣，堅決聲稱要向我講述他曾踩過的坑。隨后又交流了幾回，我這才發(fā)覺，挑選 ELISA 檢測試劑盒這件事，確實并非僅僅查看一下說明書便能處理妥當?shù)摹?/p>
ELISA檢測試劑盒的靈敏度到底靠不靠譜？
新到公司的王磊，首批接手的ELISA檢測試劑盒是國產(chǎn)的，其價格著實便宜，采購部門認定性價比高。然而，首批實驗做完后，他發(fā)覺靈敏度存在問題。
按照他所設定好的標準曲線來看，呈現(xiàn)陽性跡象的樣本其吸光度的數(shù)值明顯低于正常水平，出現(xiàn)了個別已經(jīng)逼近臨界值的樣本直接無法檢測出相關數(shù)據(jù)的情況。王磊告知我，他在當時就已經(jīng)察覺到這批試劑盒里面抗體的效價并不理想，極有可能是批次之間所存在的差異過大所引致的。
他在夜里重新進行了三批平行實驗，數(shù)據(jù)一經(jīng)呈現(xiàn)，差異系數(shù)超出了15%。正常狀況下，ELISA檢測試劑盒的批內差異系數(shù)應當在10%以內，批間差異控制在15%以下都已然算是較為勉強的了。而他這批指標直接超額，根本不具備用來作為質控的條件。
而后，他更換了一家從事進口相關業(yè)務的ELISA檢測試劑盒，其價格較之前昂貴至將近一倍，然而，該試劑盒靈敏度是穩(wěn)定的，并且批間差異系數(shù)被控制在8%以內。王磊講道，有些錢財確實是不可以去節(jié)省的，特別是在對于檢測精度存在硬性要求的情形之時。
ELISA檢測試劑盒的交叉反應怎么排除？
今年三月的時候，王磊接手了一個新的項目，這個項目是要檢測血清當中某種特定的細胞因子的含量。他挑選了一款口碑還算不錯的 ELISA 檢測試劑盒，然后開始做實驗，可是做完實驗之后發(fā)現(xiàn)，陽性對照是能夠跑出來的，然而空白對照的吸光度卻偏高了。
經(jīng)過兩天的排查，他終于有了發(fā)現(xiàn)，血清里有一種與試劑盒里捕獲抗體結構相似的蛋白，二者發(fā)生了交叉反應。王磊表示，這是試劑盒設計方面出現(xiàn)的問題，使用者想要通過調整實驗條件解決這樣的問題是極為困難的。
他沒得辦法，唯有再次去尋覓供應商，特意索要了一份交叉反應驗證報告。這一回，他變得機靈起來，先是選用自身的樣本開展了預實驗，證實不存在非特異性結合情況，這才敢正式將樣本放置到設備上進行檢測。往后要是再挑選ELISA檢測試劑盒，他必定會先向對方詢問索要交叉反應數(shù)據(jù)，要是對方不給數(shù)據(jù)，那這些試劑盒他一律不會購買。
ELISA檢測試劑盒的穩(wěn)定性怎么判斷？
去年接近年末的時候，王磊所在的公司存有一批ELISA檢測試劑盒，放置于溫度為4度的冰箱之中，大約歷經(jīng)了三個月的時間。當他將其取出準備使用時，發(fā)覺標準品的吸光度值相比于新的批次降低了將近20%。
他查驗了說明書，說明書上標明的保質期是一年，然而卻并未書寫開封之后的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。王磊撥打了電話詢問技術支撐，對方說話吞吞吐吐，聲稱建議開封之后在一個月之內用完。他講當時就感覺自己被坑了，一批試劑盒價值上千塊錢，三個月的時間就報廢了三分之一。
其后他形成了習慣，每當購買ELISA檢測試劑盒時，必定于合同之中寫明，要求供應商給出加速穩(wěn)定性實驗數(shù)據(jù)。他還自行制作了一個記錄表，每次開封時都標注上日期，超過一個月的便嚴格予以廢棄不再使用。他講道，穩(wěn)定性這件事情，不能僅僅去看保質期，而是應當查看在實際使用條件之下的表現(xiàn)。
ELISA檢測試劑盒的操作步驟有沒有坑？
王磊曾進行夾心法 ELISA 操作，依照說明書來加樣、孵育、洗板，然而顯色之后背景卻格外深。他再三核查流程，最終發(fā)覺是洗板步驟里的緩沖液配方有誤。
原先的那款ELISA檢測試劑盒的要求是使用含有0.05%吐溫 - 20的洗液，然而公司倉庫所配備的卻是有著0.1%濃度的洗液。他把洗液換回正確的之后，背景馬上就降下來了。王磊講，像這種細節(jié)方面的問題是最為容易被大家忽略掉的，可恰恰它就是對實驗成敗起著決定性作用的關鍵所在。
他如今但凡拿到新的ELISA檢測試劑盒，就會率先將說明書由頭至尾誦讀三遍，把易于出錯的步驟標記出來。諸如孵育時間、溫度究竟是否嚴格，加樣順序有無特殊要求，顯色液是否需要避光。這些細微之處，要是有一時沒留意，整批數(shù)據(jù)便會作廢。
ELISA檢測試劑盒的儲存條件有多重要？
今年五月上旬，王磊所在公司實驗室的空調出現(xiàn)故障持續(xù)了好幾日，室內溫度攀升至三十度以上。他有一位同事未曾留意，將一批ELISA檢驗試劑盒置于室外長達一整晚。次日開展實驗時，標準曲線根本無法繪制出來。
王磊講，ELISA檢測試劑盒里頭的抗體以及酶都是蛋白質，在高溫的時候極易失活。他隨后特意購置了溫度記錄儀，放置于試劑盒的冰箱之中，每日去查看記錄。一旦超過八度便會報警，以此來保證儲存條件始終穩(wěn)定。
對于新人他也進行了提醒，強調在試劑盒運輸期間同樣需要留意，要是處于夏天發(fā)貨的情況，務必要添加冰袋，不然在路途上經(jīng)過兩天便有可能報廢。他表明，ELISA這類檢測試劑盒在從生產(chǎn)直至使用的整個階段，溫度的嚴控對于最終的檢測質量起著決定性作用。
他現(xiàn)在的總結
上個月，我和王磊一起用餐，王磊已然充分適應了新公司所具有的節(jié)奏。他說道，挑選ELISA檢測試劑盒，實際上總共就是包括四方面的事情：查看靈敏度，檢查交叉反應性，驗證穩(wěn)定性，把控操作的細節(jié)之處。其中任何一樣都絕對不可以省略，一旦省略那便是以自身的數(shù)據(jù)去進行玩笑般的對待。
他又講，當下國產(chǎn)試劑盒的進步速度十分迅速，然而重點在于要依據(jù)實際的需求去進行選擇。要是僅僅是開展批量篩查，對于靈敏度的要求并不高，那么國產(chǎn)的試劑盒性價比著實不錯。但要是涉及到臨床前研究或者質量控制方面，進口試劑盒的穩(wěn)定性會更可靠。不存在絕對的好與壞，只有是否合適之分。
倘若你認為這篇文章具備有用之處，那就有必要將其收藏起來。在后續(xù)挑選ELISA檢測試劑盒的階段，把它取出來加以對照，如此起碼能夠助力您躲開我朋友先前踩過的那些坑。
