朋友老李的困境：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)總是不穩(wěn)定
就在緊接著過去的那個冬季，于北京昌平地區(qū)，任職于一家進(jìn)行生物技術(shù)相關(guān)研究與開發(fā)工作的公司里的我的那位叫老李的朋友，在一場聚餐活動期間，忽然向我傾訴起心中的苦惱來了。
他講那個由自己負(fù)責(zé)的酶活性檢測項(xiàng)目，連續(xù)兩個月數(shù)據(jù)波動極大，同一批樣品，早上檢測出來的結(jié)果與下午檢測出來的結(jié)果相差居然能達(dá)到30%，老板追問進(jìn)度之際，他只能鼓起勇氣說仍在對條件進(jìn)行優(yōu)化。
老李于這個行業(yè)從事了6年之久，最初是普通實(shí)驗(yàn)員，而后升至項(xiàng)目主管，按常理來講經(jīng)驗(yàn)并非稀缺。然而此次所遭遇的棘手狀況，致使他首次心生疑慮，自己是否在方法的選擇上出現(xiàn)了偏差。
酶活性比色法檢測試劑盒到底怎么用才靠譜
并非個例的是老李所面臨的困惑，許多實(shí)驗(yàn)室，在剛剛開始去接觸酶活性比色法檢測試劑盒之際，都會碰到相似問題。
核心緣由常常并非試劑盒自身存在問題，而是操作流程里的細(xì)節(jié)未達(dá)標(biāo)準(zhǔn)。像底物濃度，反應(yīng)時間，終止方式，甚至于酶標(biāo)儀的波長校準(zhǔn)，均會對最終吸光度讀數(shù)的精確性產(chǎn)生直接影響。
老李某時回想表示，他以前始終依照說明了的通用條件去做，然而卻遺漏了不同批次樣品里酶的實(shí)際活性區(qū)間差異。這表明，就算是采用同一個品牌、同一個貨號的試劑盒，也得依據(jù)樣本特性開展小范圍預(yù)實(shí)驗(yàn)去確定最佳反應(yīng)條件。
從懷疑試劑盒到重新信任的關(guān)鍵一步
老李開始對問題進(jìn)行排查。他首先把三家不同供應(yīng)商的酶活性比色法檢測試劑盒進(jìn)行了更換，結(jié)果發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)波動依然是存在的，并沒有明顯的改善。
此事致使他察覺到，問題或許并非存在于試劑盒自身，而是在自身的實(shí)驗(yàn)流程方面。于是乎，他耗費(fèi)了一周的時間，將每一步的操作都錄制下來以供回看，最終發(fā)覺乃是加樣之際手速不相同，致使反應(yīng)時間的起點(diǎn)出現(xiàn)了幾秒鐘的偏差。
針對酶活性檢測而言，幾秒鐘的時間差距完全能夠使初速度的測定結(jié)果發(fā)生改變，而酶活性比色法檢測試劑盒的原理，實(shí)際上是依據(jù)反應(yīng)初速度來推斷酶活力的，故而時間控制變成了決定成敗的關(guān)鍵變量。
優(yōu)化操作流程后的實(shí)際效果
老李對加樣順序做了調(diào)整，將一次性加入底物采用排槍來進(jìn)行，而且針對每塊96孔板各自嚴(yán)格把控反應(yīng)時間。他特意購置了一臺可編程的專門用于恒溫孵育的儀器，以此確保所有孔之中的溫度能夠達(dá)到完全一樣的狀態(tài)。
今年3月，他再度運(yùn)用同一批樣品開展驗(yàn)證測試。連續(xù)三天，每日三組再重復(fù)，組內(nèi)變異系數(shù)已從早些時候的15%降至3%以內(nèi)。老板瞧見數(shù)據(jù)后，當(dāng)日便批準(zhǔn)項(xiàng)目步入下一階段。
稱老李的說法表示道是這樣哦，現(xiàn)下只要是他每一回置身于進(jìn)行酶活性檢測這個狀況之中的之時，就必然會在正式開展實(shí)驗(yàn)之前去跑那么一回梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)操作喲呵，以此使得能夠去確認(rèn)一下線性范圍是不是合適恰當(dāng)?shù)难?。而這樣一種習(xí)慣，它是源于來自于他去年經(jīng)歷的那次痛苦的教訓(xùn)啦。
選擇酶活性比色法檢測試劑盒的四個關(guān)注點(diǎn)
經(jīng)由此次經(jīng)歷，老李歸納出了幾條具備實(shí)用性的篩選標(biāo)準(zhǔn)。他講道，挑選試劑盒的時候，不可以僅僅依據(jù)價(jià)格來衡量，同樣也不可以僅僅憑借品牌名氣來判斷的。
其一，需查看試劑盒的線性檢測范圍，是否將你樣品的預(yù)估活性區(qū)間涵蓋，萬一你的樣品活性頗高或者極低，超出了線性范圍，那么結(jié)果將會失準(zhǔn)。
第二點(diǎn)，要注意力求試劑盒的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，具備良好酶催化活性并采用比色法的檢測試劑盒，批次之間的差異應(yīng)當(dāng)把控在5%以內(nèi)，老李當(dāng)下會要求供應(yīng)方給予三個批次的驗(yàn)證報(bào)告。
第三點(diǎn)，要查看試劑盒的終止液類型，有些終止液能夠改變最終顏色方面的穩(wěn)定性，要是無法在終止之后立馬進(jìn)行讀數(shù)，那就得去選擇顏色可以穩(wěn)定最少30分鐘的配方。
第四點(diǎn)，要考量試劑盒可不可以與你實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的酶標(biāo)儀型號相兼容。不同的儀器，其光徑長度不一樣，波長帶寬也存在差別，最好先去做一次交叉驗(yàn)證。
實(shí)驗(yàn)室之間看不見的差距往往就在這里
老李后來在行業(yè)交流之群里分享出了自身經(jīng)歷，結(jié)果發(fā)覺有好幾個同行都曾踩過仿佛類似的坑。
提到有某一位身處南京進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物檢測工作的女生講過，她們所在的實(shí)驗(yàn)室先前同樣運(yùn)用酶活性比色法檢測試劑盒來開展項(xiàng)目，可始終無法得出理想的數(shù)據(jù)，最終沒辦法只好更換成熒光法。然而老李持有這樣的看法，要是當(dāng)時能夠再多投入一些時間將比色法的條件探究明白，不一定就非得更換方法。
總歸比色法花費(fèi)更低，操作更為簡易，對設(shè)備的要求同樣不高。諸多中小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室，酶標(biāo)儀或許仍是幾年前的舊型號，處于這種情形下，掌握優(yōu)化比色法的運(yùn)用技巧相較于更換平臺更為實(shí)際。
一次踩坑換來的長期價(jià)值
當(dāng)下，由老李所負(fù)責(zé)的部門，已然將酶活性比色法檢測試劑盒的使用規(guī)范制作成了標(biāo)準(zhǔn)化文件，就在剛剛，新入職沒多久的同事，在入職后的首周，便要依據(jù)這個SOP去做三次模擬實(shí)驗(yàn)，只有在合格之后，方能夠接手正式樣品。
他講，在實(shí)驗(yàn)這個領(lǐng)域，好多時候并非是方法存在問題，而是進(jìn)行執(zhí)行操作的人沒有將細(xì)節(jié)嚴(yán)格地把控至精準(zhǔn)充分的程度。一種成熟的檢測辦法的背后，通常需要?dú)v經(jīng)幾十次甚至上百次的嘗試錯誤以及調(diào)整完善。
若你同樣運(yùn)用酶活性比色法檢測試劑盒，不妨回轉(zhuǎn)瞧瞧自身的操作流程。加樣時間是不是嚴(yán)格予以控制的？孵育溫度有沒有預(yù)先進(jìn)行預(yù)熱？讀數(shù)之前是否做了空白校正？這些要點(diǎn)當(dāng)中任何一個出現(xiàn)問題，數(shù)據(jù)都不會美觀。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不會騙人，但它只會告訴那些愿意深究的人答案。
