去年的那個秋天，我有個從事免疫研究、名叫老張的朋友，差點(diǎn)因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室里的數(shù)據(jù)弄到陷入崩潰的境地。
在華東地區(qū)的那家生物科技公司中，擔(dān)任研發(fā)主管的老張，手頭有著一個關(guān)于細(xì)胞因子檢測此類方面的項(xiàng)目。那家公司的老板催促得十分緊迫，而急需報(bào)告的客戶滿心盼著結(jié)果。然而在連續(xù)三周的時(shí)間里，老張借助手中的ELISA檢測試劑盒所測出來的結(jié)果卻糟糕透頂，具體表現(xiàn)為，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)出很差的線性狀況，重復(fù)孔之間的CV值超出了15%，甚至就連陰性對照也出現(xiàn)了異常波動。
在那段日子里，他每日都對著電腦屏幕上呈現(xiàn)的OD值發(fā)呆，口中還念念有詞地說著“這板子難道是遭受了詛咒不成”。
我向他詢問究竟是怎么一回事，他這般說道： “并非是操作方面存在問題，已然更換了三個不同批次的樣本，將人為所造成的誤差給排除掉了，最終尋覓到根源是試劑盒自身的靈敏度不太足夠。低濃度的樣本完全沒辦法使差異體現(xiàn)出來，高濃度的樣本卻又極易出現(xiàn)飽和的狀況?！?。
他從手機(jī)里翻出存著的一張圖片，拿給我瞧：同一批樣本，使用A公司以及B公司的ELISA檢測試劑盒，一同去進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，A公司相應(yīng)的信號強(qiáng)度僅僅是B公司的二分之一，然而B公司的背景狀況更低。
你瞧，同樣是采用夾心法，有的試劑盒在抗體配對方面做得欠佳，特異性表現(xiàn)不佳，一旦非特異性結(jié)合增多，那么結(jié)果就全然混亂了。
有個稱作老張的講了這么回事，在這之前，他們是為了節(jié)省費(fèi)用，始終在用某家規(guī)模較小工廠所生產(chǎn)的 ELISA 檢測試劑盒，其單個產(chǎn)品的價(jià)格要比其他便宜幾十塊錢，然而，每一批次之間的差異大得實(shí)在是離譜。曾經(jīng)有一回，更換了一個不同的批號，就同一個標(biāo)準(zhǔn)品而言，其 OD 值一下子直接從 1.2 大幅下降到了 0.6，這樣一來，就意味著所有相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都必須得重新去做了。
人工成本、時(shí)間成本、樣本損耗，算下來反而更貴。
他作出了更換供應(yīng)商的決定，隨即著手大量查閱文獻(xiàn)，還向同行進(jìn)行詢問。有一位身處蘇州從事臨床診斷工作的朋友作出了推薦，稱有一家供應(yīng)商，他們實(shí)驗(yàn)室使用其產(chǎn)品接近一年之久，數(shù)據(jù)展現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。老張進(jìn)而申請了該產(chǎn)品的試用裝用于驗(yàn)證，采用的是自己的標(biāo)準(zhǔn)品。
他首次進(jìn)行跑板操作時(shí)，特意挑選了極具挑戰(zhàn)性的較難測量的低濃度點(diǎn)作為目標(biāo)，即5 pg/mL以及10 pg/mL這兩個數(shù)值。最終呈現(xiàn)的結(jié)果是，兩個重復(fù)孔之間所測得的CV值均處于5%范圍以內(nèi)，并且標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2成功達(dá)到了0.999這一水平。接著，他當(dāng)時(shí)便立刻給我發(fā)送了消息，其內(nèi)容為：“這ELISA檢測試劑盒的靈敏度具備可靠性，在低端進(jìn)行定量操作完全不存在任何問題?！?。
后續(xù)他再度開展了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的回收率處于95%至105%這個范圍之內(nèi)，這表明了基質(zhì)干擾是極小的。
老張講，真正促使他下定決心確定下來的乃是批次穩(wěn)定性測試，對于此穩(wěn)定性測試他把新批次的試劑盒跟三個月先前留樣予以對比，結(jié)果四個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的OD值偏差俱都處于10%以內(nèi)，他表示“對于ELISA檢測試劑盒來講，這般批間一致性已然是頗為不錯了?！?。
今年三月份的時(shí)候，老張所負(fù)責(zé)的那個項(xiàng)目，順利地經(jīng)由客戶驗(yàn)收通過了。他以微信的方式跟我講道：“如今回想起來，那個時(shí)候被那個價(jià)格低廉的試劑盒坑害得極為慘重，節(jié)省下來的錢全部投入到重復(fù)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中去了。”。
我向他詢問當(dāng)下所使用的是哪一家，他僅僅表述了這么一句話，你去查找一下從事 ELISA 檢測試劑盒的處于領(lǐng)先地位的著名品牌，尋覓那種進(jìn)行驗(yàn)證的數(shù)據(jù)是公開的、具備能夠支持定制配對功能的即可，不要僅僅著眼于價(jià)格。
針對選 ELISA 檢測試劑盒這事，關(guān)鍵有三條。一條是靈敏度足不足，一條是批間差大小，還有一條是特異性強(qiáng)不強(qiáng)。老張踩過的坑，好多實(shí)驗(yàn)室都在重復(fù)。先是看文獻(xiàn)他人用啥，接著申請?jiān)囉醚b自己跑一回標(biāo)準(zhǔn)曲線和回收率，最后把不同批號的數(shù)據(jù)作一下比對，心里就有底了。
文章寫到當(dāng)下，假設(shè)你近期正為ELISA檢測試劑盒的穩(wěn)定性而發(fā)愁，那么不妨如同老張那般，多耗費(fèi)兩周時(shí)間去做驗(yàn)證，這可比在數(shù)據(jù)里煎熬兩個月要實(shí)惠得多。
