一個實驗員朋友的困境
就在前些天, 我有個相識已久的老朋友老張, 他在一家生物科技公司擔(dān)任研發(fā)主管, 他給我撥通了電話, 那語氣之中盡是無奈之感。他講最近團(tuán)隊投身于一項有關(guān)腫瘤標(biāo)志物的課題, 為了去驗證一個全新的靶點, 他們耗費了一個月的時長全力以赴地做ELISA實驗, 然而最終出來的數(shù)據(jù)卻是雜亂到了極點 , 根本就沒辦法投入使用。老張長長地嘆了一口氣, 說道: “要是試劑盒選得不合適, 那這實驗真的就完全是白做, 全部都白費了?！薄?/p>
老張在這一行從事差不多快十年了, 按道理來講經(jīng)驗是豐富的, 然而這一回卻恰恰在科研使用的ELISA試劑盒的挑選購買方面失手了。他講, 最開始時是貪圖價錢便宜, 抉擇了一個雜牌的試劑盒, 結(jié)果出現(xiàn)特異性欠佳、背景過高的狀況, 而且重復(fù)性也是一塌糊涂。團(tuán)隊連著熬夜去工作加班, 最終得著的數(shù)據(jù)連他自己都不敢相信, 更不要說拿去發(fā)表文章了。
實驗重復(fù)性差怎么辦
老張跟我說, 實際上最令他覺得頭疼的并非一次失敗, 而是反復(fù)不斷地失敗。他們更換了好些種類的樣本了, 從血清換到細(xì)胞裂解液, 甚至于嘗試了不同批次的試劑盒, 然而每次跑出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線都是不一樣的。他甚至懷疑是不是自身的操作存在問題, 還特意對團(tuán)隊開展了一遍培訓(xùn)呢。
我向他詢問, 關(guān)于試劑盒的批間差以及批內(nèi)差, 他有沒有進(jìn)行過核對呢? 老張猛地一拍腦袋, 聲稱他壓根就沒留意過這些參數(shù)。隨后他認(rèn)真細(xì)致地查了一番, 竟然發(fā)覺之前所使用的那款試劑盒，連批間差的數(shù)據(jù)都未曾完整給出?？蒲蠩LISA試劑盒的關(guān)鍵要點在于穩(wěn)定性以及重復(fù)性, 要是連這兩個最基本的方面都無法確保，那么實驗結(jié)果就如同廢紙一般。
今年3月之際, 老張終是更換了另一家有著較好口碑的品牌, 特意挑選了那種能夠提供詳細(xì)批間差數(shù)據(jù)的試劑盒。而后, 第一次實驗便跑出了漂亮的S型曲線, 再三重復(fù)三次, CV值均處在5%以內(nèi)。他滿懷興奮地告知我: “這一步邁向正確方向了, 實驗重復(fù)性欠佳的問題一下子就得以解決了。”。
如何選擇科研ELISA試劑盒
老張現(xiàn)今見人就講, 挑選科研 ELISA 試劑盒時, 切勿僅依據(jù)價格來定, 得從好些關(guān)鍵要點著手。首要的是靈敏度, 就是你所要檢測的目標(biāo)蛋白濃度是高還是低, 要是含量極少, 普通的試劑盒根本無法察覺出來。他那時做那個腫瘤標(biāo)志物, 目標(biāo)蛋白身處血清當(dāng)中, 其濃度僅有幾個皮克每毫升, 普通的試劑盒檢測下限根本達(dá)不到那個水平。
其次, 存在著特異性這一情況。老張著重強(qiáng)調(diào), 某些試劑盒會向你宣稱具備高靈敏度。然而, 實際操作后, 卻涌現(xiàn)出一堆交叉反應(yīng), 背景噪音大到令人恐懼的程度, 他給出建議為一定要觀看廠家所提供的交叉反應(yīng)數(shù)據(jù), 特別是與同家族蛋白質(zhì)是否存在交叉。在今年4月初時, 他專門耗費一天時間, 將三個不同品牌的試劑盒說明書對照著去查看。重點關(guān)注的便是特異性那一欄。
接著說的是操作便捷程度, 老張講, 有一些科研ELISA試劑盒的步驟極為繁瑣, 光是洗板就得洗五次, 而且還得分好幾次去加樣, 這不但浪費時間, 并且還容易出差錯, 他后來挑選的那一款, 整個流程僅僅需要三個半小時, 采用一步法加樣, 極大地減少了人為誤差。
科研ELISA試劑盒品牌怎么挑
在老張自己經(jīng)歷過走過彎路的情況之后, 如今對于品牌選擇顯得格外謹(jǐn)慎。他歸納出了一套屬于自己的辦法: 首先要看廠家是不是能給予完整的驗證的數(shù)據(jù), 譬如靈敏度、特異性、回收率、精密度這類指標(biāo)。要是連這些基礎(chǔ)的數(shù)據(jù)都沒辦法拿出來, 那就直接淘汰。
而后查看廠家的技術(shù)支撐情況。老張講, 曾有一回他碰到一個技術(shù)問題, 試劑盒的說明書所寫內(nèi)容不清晰, 他徑直打電話給廠家, 那邊的工程師竟然表示說不清楚, 讓他自行查閱文獻(xiàn)。這種服務(wù)態(tài)度, 他往后再也不會接觸。后來他更換的那個品牌, 技術(shù)支撐電話一撥就順暢接通, 工程師還會主動協(xié)助你剖析實驗步驟, 甚至幫你優(yōu)化樣本稀釋比例。
5月中旬的時候, 老張所在的團(tuán)隊, 要對一批臨床樣本進(jìn)行檢測, 當(dāng)時時間緊迫, 任務(wù)繁重, 張直接同廠家取得聯(lián)系, 當(dāng)天對方就安排了技術(shù)專員, 進(jìn)行遠(yuǎn)程的指導(dǎo)工作, 并且還提供了預(yù)實驗的免費樣品, 老張講道, 這樣的服務(wù)，即便花些錢也是有價值的, 畢竟實驗所需要的時間是消耗不起的。
科研ELISA試劑盒價格貴不貴
許多人會向老張詢問, 質(zhì)量優(yōu)良的科研 ELISA 試劑盒當(dāng)真是否昂貴。他所給出的回應(yīng)是: 價格高居不菲, 不過具備的價值值得肯定。他進(jìn)行了一番數(shù)據(jù)核算, 曾經(jīng)所使用的價格較為低廉的試劑盒, 一個 96 孔的板子所需金額僅為七八百塊, 然而進(jìn)行了四次相關(guān)操作, 卻沒有任何一次所獲取的數(shù)據(jù)能夠得以運用。白白耗費了時間、人力以及樣本, 綜合起來所產(chǎn)生的成本遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于一個價值兩千塊的質(zhì)量可靠的試劑盒。
目前老張在用著, 就是那個單盒價格大概在一千八左右的, 不過一次就成功嘿, 然后數(shù)據(jù)結(jié)果好看極, 投向各個途徑渠道的相關(guān)文章, 就連起初的審核都給順利通過。他講道, 節(jié)省錢財可不是像這般節(jié)省的, 在整個實驗所需花費成本當(dāng)中呀特別昂貴的部分, 最關(guān)鍵那便是你去重復(fù)進(jìn)行實驗所耗費的時間以及相關(guān)樣本。尤其是針對那些彌足珍貴的醫(yī)學(xué)臨床方面樣本, 一旦出現(xiàn)損耗那就永遠(yuǎn)沒辦法再次補(bǔ)充齊全。
在6月初那個時候, 他另行訂購了兩盒作為備用, 并且專門要求廠家發(fā)送了最新批次的驗證報告。他講, 價格并非關(guān)鍵所在, 關(guān)鍵之處在于是否能夠協(xié)助你將實驗給做出來。
科研ELISA試劑盒使用注意事項
如今的老張, 在操作 ELISA 實驗這件事上已然相當(dāng)熟練, 然而, 他依舊歸納出了幾條飽含深切慘痛經(jīng)歷的教訓(xùn), 對, 是血淋淋流淚又帶血的那種教訓(xùn)。首先要明確的是, 對于樣本而言, 務(wù)必要在早前就將其清理完善, 特別是血清樣本這一塊, 一旦出現(xiàn)溶血或者脂血的狀況, 必將十分顯著地對最終結(jié)果產(chǎn)生影響。他曾經(jīng)就因?qū)颖具M(jìn)行離心操作時, 程度未達(dá)到徹底的標(biāo)準(zhǔn), 進(jìn)而致使背景值有所偏高, 最終無奈之下只得再次采集血液。
需要嚴(yán)格把控孵育的時間以及溫度。老張所在的實驗室存有一臺恒溫箱, 此恒溫箱專門用以開展ELISA工作, 在每次進(jìn)行孵育之前, 他都會借助溫度計重新校準(zhǔn)一回。他表明, 如若相差一兩度, 那么結(jié)果極有可能相差出一倍。
要將洗板做到深入且完全徹底, 他尤為特別推薦那種具備自動化功能的洗板機(jī), 相比之下, 依靠人工手動進(jìn)行洗板的話, 容易有殘余留存, 進(jìn)而會對最終的顯色造成影響。倘若實驗室當(dāng)中沒有配備自動洗板機(jī), 那么就需要增加洗板的次數(shù), 而且最終一次拍板的時候一定要拍打至完全干燥。
剛進(jìn)入7月上旬之際, 老張專門于組會之中分享自身經(jīng)驗, 稱科研ELISA試劑盒善用便為神器, 不善用則是坑。他將自身所踩之坑與買家心得撰成文檔, 發(fā)至公司內(nèi)部群里, 隨后被其他部門輾轉(zhuǎn)傳閱。
科研ELISA試劑盒實驗結(jié)果怎么分析
實驗完成了, 數(shù)據(jù)進(jìn)行分析也是一門專門的學(xué)問。老張講道, 好多人拿到OD值就徑直去套標(biāo)準(zhǔn)曲線, 對于樣本稀釋倍數(shù)以及基質(zhì)效進(jìn)行應(yīng)忽略了。他給出建議, 務(wù)必得做樣本的加標(biāo)回收實驗, 以此驗證的基質(zhì)有沒有構(gòu)成干擾。要是回收率不會處于80%到120%這個范圍之間, 那么數(shù)據(jù)就必須要重新去展開審視。
他還講了, 標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合辦法也是相當(dāng)關(guān)鍵的。有的試劑盒提議采用四參數(shù)邏輯擬合, 有的則采用線性擬合，不能夠一概而論。老張當(dāng)下的習(xí)慣便是, 拿到數(shù)據(jù)先開展三次重復(fù), 接著查看CV值, 假設(shè)超過10%, 那就找尋原因重新做。
就在今年8月的時候, 老張的那篇論文, 終于是投遞出去了, 而審稿的人, 針對他所提供的ELISA數(shù)據(jù), 并沒有提出哪怕任何一點點的疑問。他講了, 這全部都是因為選對了科研ELISA試劑盒的緣故, 從最開始的源頭之處, 就確保了數(shù)據(jù)的可靠性。
科研ELISA試劑盒未來趨勢
老張近來在留意一些新技術(shù), 像高通量ELISA以及多重檢測試劑盒, 他講, 當(dāng)下科研ELISA試劑盒的發(fā)展趨向, 其一為靈敏度越發(fā)高, 可檢測至單細(xì)胞層面的蛋白分泌, 其二是自動化程度愈發(fā)高, 與機(jī)器人工作站相配合, 一天能夠運行幾百個樣本。
他又講了, 國內(nèi)部分廠家當(dāng)下做得也挺好, 驗證數(shù)據(jù)愈發(fā)規(guī)范, 服務(wù)同樣愈發(fā)周到。他給出建議, 在實驗室采購之際, 要多瞧那些具備自主知識產(chǎn)權(quán)以及完整驗證體系的品牌, 別老是盲目迷信進(jìn)口。
老張講, 從事做科研這個行當(dāng), 實驗工具便是你的武器。挑選對適合的用于科研的 ELISA 試劑盒, 這就好比是給自身著手的作實驗提供保險一般的效應(yīng)。目前他所擁有的經(jīng)驗是這樣的: 不要懼怕于花費錢財這一樁事, 不要貪圖方便省力, 要十分細(xì)致認(rèn)真謹(jǐn)慎觀看數(shù)據(jù), 要踏踏實實地用心去做對比, 如此一來, 你著手進(jìn)行的實驗, 其成功概率起碼能夠提升一半的幅度。
