“選對(duì)試劑盒, 那實(shí)驗(yàn)就成功了一半；要是選錯(cuò)試劑盒, 三個(gè)月可就白忙活了。”這話是我那位在中科院某所讀博的朋友老張, 在一次深夜大家圍坐擼串的時(shí)候, 一邊拍著桌子講出來的。那個(gè)時(shí)候, 他才剛從一段極其讓人崩潰的實(shí)驗(yàn)周期當(dāng)中艱難地爬出來, 他整個(gè)人呈現(xiàn)出來的狀態(tài), 就好似被ELISA反復(fù)沖洗了無數(shù)遍的酶標(biāo)板一般——是那種疲憊不堪的樣子, 看起來有些發(fā)白, 不過總算是有了那么一點(diǎn)點(diǎn)透亮的感覺。
在我們這個(gè)圈子里, 被公認(rèn)為“實(shí)驗(yàn)狂人”的是老張, 他從碩士開始到博四階段, 在免疫檢測(cè)這個(gè)方向深入鉆研了六年, 他的強(qiáng)項(xiàng)在于進(jìn)行細(xì)胞因子定量分析, 主要致力于炎癥通路研究, 簡(jiǎn)單來講, 就是每天都和科研ELISA試劑盒打交道, 他以前常常跟我們吹噓說: “我就算閉著眼睛也能夠把標(biāo)準(zhǔn)曲線跑直, R方低于0.99的那些都被算作廢品?！?。
但今年三月份，他遭遇了職業(yè)生涯里最慘烈的翻車。
那時(shí)節(jié), 他不久前承接了一項(xiàng)關(guān)聯(lián)巨噬細(xì)胞極化機(jī)制的嶄新課題, 此課題要求運(yùn)用具備高靈敏度的 ELISA 試劑盒, 去檢測(cè)極低濃度的 IL - 6 樣本以及用以對(duì)比的 TNF - α樣本。他為了使事功簡(jiǎn)便, 徑直就于先前曾有過合作往來的一家產(chǎn)品代理商那里, 訂購(gòu)了某一進(jìn)口品牌的相關(guān)貨品, 這貨品的單個(gè)價(jià)格并非低廉, 然而他思量著該品牌聲名遠(yuǎn)揚(yáng)、口碑頗佳, 想來應(yīng)當(dāng)不會(huì)出現(xiàn)差錯(cuò)。
完第一輪實(shí)驗(yàn)跑完, 標(biāo)準(zhǔn)曲線的板內(nèi)差異已抵達(dá)離譜的程度, 復(fù)孔CV值徑直飆升至25%以上。老張那時(shí)卻尚未慌張, 認(rèn)定或許是自身洗板不夠徹底, 于是再度配置了洗滌液, 對(duì)孵育時(shí)間作出調(diào)整, 而后再來一輪。第二輪, 第三輪, 然而數(shù)據(jù)依舊如同掙脫束縛的野馬, 全然無法付諸使用。
他前后耗費(fèi)了整整兩周時(shí)間, 白白浪費(fèi)了四塊板, 以及三十多份極為珍貴的臨床樣本, 甚至還投入了一批他自己辛辛苦苦攢了大半年才積攢起來的血清標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)費(fèi)向來就處于緊張狀況, 導(dǎo)師在看到相關(guān)消耗記錄之后, 直接在組會(huì)上點(diǎn)了名說道: “老張, 你的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是不是存在問題呀? ”。
科研ELISA試劑盒的質(zhì)量問題怎么查
那晚曾給我打電話的老張, 其聲音已然沙啞著說道: “我存有試劑盒本身存在問題的懷疑。”他咬牙切齒, 將剩余的一塊板予以拆開, 對(duì)不同批次的標(biāo)準(zhǔn)品以及檢測(cè)抗體展開對(duì)比, 最終發(fā)覺其中的頭緒——那批試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品濃度標(biāo)定顯著偏低, 并且捕獲抗體的包被并不均勻, 存在某些孔位幾乎未曾被包上的情況。
后來, 他去查閱了那個(gè)品牌下關(guān)于批次的報(bào)告, 結(jié)果發(fā)現(xiàn), 那批貨物所對(duì)應(yīng)的質(zhì)檢數(shù)據(jù), 本身是存在著處于邊緣地帶的問題的, 僅僅是代理商未曾主動(dòng)去進(jìn)行披露而已。而另一邊, 他在實(shí)施采購(gòu)行為之際, 根本就沒有產(chǎn)生想要去索要涉及批次的質(zhì)量控制報(bào)告這樣的想法。
這件事過后, 老張有了改變。他開始針對(duì)所有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的科研ELISA試劑盒展開“入廠檢驗(yàn)”。每回拿到一批新試劑盒, 首要之事并非上樣, 而是先去跑一條已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品, 以此驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍以及靈敏度是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。他還特意跟廠家索要了每一批次的COA認(rèn)證, 認(rèn)真核對(duì)批間差的數(shù)值。
它說這話之際, 正手持一份某國(guó)內(nèi)品牌的光譜檢測(cè)報(bào)告, 神情認(rèn)真仿若做法醫(yī)鑒定, 其稱, 往昔曾覺此為小題大做, 如今方才明晰, 科研ELISA試劑盒這般事物, 哪怕差一個(gè)批號(hào), 結(jié)果也會(huì)天差地別。
怎么看科研ELISA試劑盒的交叉反應(yīng)性
五月之際, 老張?jiān)庥隽硗庖粋€(gè)坑, 他同時(shí)對(duì)樣本里的三種細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè), 所使用的是同一品牌的組合試劑盒, 結(jié)果發(fā)覺IL - 6與IL - 10的數(shù)據(jù)之間呈現(xiàn)出明顯的相互干擾情況, 在陽性樣本里IL - 10的讀數(shù)毫無緣由地偏高。
他耗費(fèi)了一整個(gè)星期來開展加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn), 之后才發(fā)覺竟是試劑盒中的檢測(cè)抗體, 對(duì)于同家族的別的細(xì)胞因子存有交叉反應(yīng)。那個(gè)品牌的產(chǎn)品說明書里頭僅僅列舉了三種常見的交叉反應(yīng)物, 然而實(shí)際檢測(cè)下來, 起碼還有四種未被標(biāo)注的干擾因子。
現(xiàn)在老張養(yǎng)成了這么一個(gè)習(xí)慣, 每次去看產(chǎn)品說明書之時(shí), 并非先去看靈敏度, 而是先去看“交叉反應(yīng)性”的那一欄。要是廠家所列出的測(cè)試物數(shù)量少于十種的話, 他就會(huì)直接打好一個(gè)問號(hào)的。他還會(huì)跟供應(yīng)商反復(fù)地去進(jìn)行確認(rèn), 說道: “你們有沒有做過這個(gè)血清基質(zhì)加標(biāo)回收? 回收率低于85%的那種我可是不會(huì)要的！”。
科研ELISA試劑盒的保存條件怎么把控
六月上旬的時(shí)候, 北京這兒開始熱起來了。老張所在實(shí)驗(yàn)室的冰箱, 由于老是開關(guān)門, 溫度出現(xiàn)了好幾次波動(dòng)情況。他有一批剛剛拿到的試劑盒, 按照說明書給定的要求, 必須得在2到8℃的環(huán)境下避光保存才行, 然而他卻發(fā)覺冰箱里靠近門的那個(gè)位置, 溫度計(jì)所顯示的溫度已然快要接近10℃了。
他馬上將那批試劑盒挪移至專門設(shè)置的恒溫冷藏柜當(dāng)中, 然而卻依舊心有疑慮, 隨后又借助一支溫度記錄探頭展開了連續(xù)三天的監(jiān)測(cè)工作, 以此來保證溫度的波動(dòng)處于±1℃范圍之內(nèi)。緊接著他為每個(gè)試劑盒的外包裝粘貼上了到貨日期以及開瓶日期, 對(duì)于超過三個(gè)月的直接作出“優(yōu)先使用”的標(biāo)記, 而超過六個(gè)月的則直接實(shí)行報(bào)廢處理。
好多人覺著試劑盒保質(zhì)期長(zhǎng)便隨意放置, 然而科研 ELISA 試劑盒的關(guān)鍵在于蛋白質(zhì), 一旦溫度出現(xiàn)波動(dòng), 其活性就會(huì)降低。你節(jié)省了那少許管理時(shí)間, 損失的卻是整板數(shù)據(jù)。”老張如今在實(shí)驗(yàn)室里定下了一個(gè)規(guī)矩: 試劑盒到貨以后, 務(wù)必由專人進(jìn)行驗(yàn)收、登記、入庫, 絕對(duì)不允許隨意往冰箱里一放就不管了。
怎么檢驗(yàn)科研ELISA試劑盒的線性范圍
那批出現(xiàn)問題的試劑盒退貨以后呢, 老張換了一家國(guó)產(chǎn)的供應(yīng)商, 他挑選了對(duì)方所主推的一款具有高靈敏度的試劑盒, 宣傳資料上面講檢測(cè)下限能夠達(dá)到0.5 pg/mL, 他心里存在著疑問, 自己去做了梯度稀釋驗(yàn)證。
他首先運(yùn)用自身的標(biāo)準(zhǔn)品, 做出了七點(diǎn)標(biāo)曲, 此七點(diǎn)標(biāo)曲是從1000 pg/mL開始, 逐步進(jìn)行稀釋, 一直稀釋到0.1 pg/mL。其結(jié)果呈現(xiàn)出, 在處于1到500 pg/mL的這個(gè)范圍之內(nèi), 曲線的線性狀況堪稱完美, R方的值為0.998。然而, 那些低于0.5 pg/mL的點(diǎn), 其吸光度根本就無法拉開差距, 與空白孔幾乎不存在區(qū)別。
他手持?jǐn)?shù)據(jù), 與供應(yīng)商的技術(shù)支撐展開溝通, 對(duì)方予以承認(rèn), 稱: “我們所宣傳的0.5 pg/mL檢測(cè)下限, 乃是在優(yōu)化緩沖液體系的狀況下測(cè)出來的, 而在實(shí)際血清樣本環(huán)境當(dāng)中, 鑒于基質(zhì)效應(yīng), 你的檢測(cè)限的確會(huì)出現(xiàn)升高的情況?！薄?/p>
老張沒發(fā)怒生氣, 反倒認(rèn)為那個(gè)供應(yīng)商蠻誠(chéng)實(shí), 后來他跟對(duì)方一塊兒優(yōu)化了樣本稀釋比例, 將血清稀釋倍數(shù)從以前的兩倍改為四倍, 成功把實(shí)際檢測(cè)下限壓低到了1 pg/mL以下。
選擇科研用的ELISA試劑盒, 可不是僅僅只瞅宣傳頁上呈現(xiàn)的數(shù)字就行的。你得向廠家詢問多達(dá)三個(gè)問題呢: 檢測(cè)下限究竟是在何種基質(zhì)里面測(cè)量出來的? 批間差又是依據(jù)怎樣的標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行定義的? 加標(biāo)回收針對(duì)血清樣本有沒有開展過相關(guān)操作? 老張當(dāng)下每一回在進(jìn)行采購(gòu)之前, 都會(huì)把這些話語發(fā)送給供應(yīng)商。
科研ELISA試劑盒的批間一致性怎么保證
曾有這么個(gè)情況, 就在過去了的上個(gè)月期間, 老張所負(fù)責(zé)的課題已然行至收尾的階段, 此階段要求補(bǔ)充一批對(duì)比性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。老張打算用到與前三個(gè)月時(shí)間完全一樣的那同一批次的試劑盒, 然而呢, 那個(gè)最早的批次早就停止生產(chǎn)了。老張手中僅僅只剩下了最后兩塊板, 可不巧的是這個(gè)實(shí)驗(yàn)明確規(guī)定需要最少重復(fù)三次才行。
緊急狀況之下, 他與原供應(yīng)商取得聯(lián)系, 訴求是調(diào)取該批次留存的庫存物資, 供應(yīng)商將倉(cāng)庫搜尋了個(gè)遍后有所收獲, 僅僅搜尋到六塊板, 然而這數(shù)量并不充足, 不滿足需求, 老張于是轉(zhuǎn)換途徑, 將生產(chǎn)廠家聯(lián)系上, 廠家給出的回應(yīng)是能夠嘗試啟用同一批原料再次配制一批, 不過此過程需要走加急流程, 并且會(huì)有額外的收費(fèi)情況。
毅然咬咬牙的老張, 同意了, 還額外付了達(dá)三千塊之多的加急費(fèi)。等到拿到新批次后, 他在第一時(shí)間就做了平行比對(duì), 具體是: 用舊批次以及新批次去同時(shí)對(duì)同樣的質(zhì)控樣本展開檢測(cè)。最終呈現(xiàn)出的結(jié)果是, 兩條標(biāo)曲幾乎處于重合狀態(tài), R 方差值是小于 0.005 的。目睹如此情況, 他這才舒緩下了一口氣。
待往后著手開展大項(xiàng)目之際, 我必定會(huì)預(yù)先訂好充足數(shù)量的試劑盒, 哪怕多支出錢財(cái)去囤貨, 也決然不會(huì)上演中途出現(xiàn)物資短缺的狀況。他在跟我闡述這番話語之時(shí), 正往冰箱里頭放置剛到的一百二十塊板子, 每一塊板子之上均粘貼了手寫的批號(hào)以及日期標(biāo)簽。
現(xiàn)階段, 老張所在的實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中, 流傳著這樣一句話, 那就是“老張?zhí)暨x試劑盒, 相較于挑選女朋友而言, 更加嚴(yán)格”, 他本人聽到這句話之后, 并未惱怒, 反倒輕聲嘿嘿一笑, 說道: “女朋友能夠更換, 然而實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)沒法更換。要是你全身心投入做科研, 那就千萬別在試劑盒方面偷懶”。
把我問他的內(nèi)容換一下, 變成他問我, 折騰了這大半年, 最大的收獲究竟是什么, 我思索了一番, 講了一句令他印象格外深刻的話語: “往昔我認(rèn)定科研ELISA試劑盒僅僅是個(gè)工具, 無論誰家所生產(chǎn)的都能夠去使用。如今我總算弄清楚, 工具的優(yōu)劣狀況, 是以直接的方式去決定了你在這條道路上是全力沖刺還是遭遇翻車。挑選合適的盒子, 并非是在無端浪費(fèi)錢財(cái), 實(shí)則是在節(jié)省開支?！?。
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