上個(gè)月, 老張坐在實(shí)驗(yàn)室的凳椅之上, 凝視那計(jì)算機(jī)屏幕之上不停跳動(dòng)的數(shù)據(jù)曲線, 他的眉頭擰成了如同麻花股狀的樣子。他乃是我們這個(gè)圈子里頗有名氣的“實(shí)驗(yàn)狂人”, 于一家從事生物科技的公司里負(fù)責(zé)新藥研發(fā)的前期篩選相關(guān)工作。自三月最初時(shí)起, 他手里所負(fù)責(zé)的方案進(jìn)入了最為關(guān)鍵的階段, 需要不斷反復(fù)去驗(yàn)證一批候選化合物針對(duì)靶點(diǎn)酶活性的抑制真實(shí)效果。他曾經(jīng)跟我傾訴過(guò), 最為令人犯愁頭疼的并非是化合物本身這個(gè)東西, 而是進(jìn)行檢測(cè)的這個(gè)環(huán)節(jié)——數(shù)據(jù)出現(xiàn)波動(dòng)的幅度較大, 具備的重復(fù)性比較差, 最終結(jié)果呈現(xiàn)出來(lái)之時(shí)連他自己都不敢相信這是真的。
快要認(rèn)識(shí)老張十年了, 起始于大學(xué)時(shí)期, 他就具備凡事都要較個(gè)真的性格。他耗費(fèi)八年時(shí)間待在實(shí)驗(yàn)室里, 對(duì)于各類檢測(cè)的方法十分清楚, 然而這次竟然遭遇挫折。他選用傳統(tǒng)熒光法檢測(cè)試劑盒, 原本覺(jué)得駕輕就熟, 誰(shuí)知后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果連續(xù)三周都如同過(guò)山車般起伏不定——上午所測(cè)的 IC50 為 50 納摩爾, 下午更換一批試劑再次測(cè)量時(shí)就變?yōu)?120 納摩爾。老張撓著頭頂說(shuō): “要是把這結(jié)果拿給老板看, 肯定會(huì)被罵得千瘡百孔。”。
一直到四月中旬的時(shí)候, 有個(gè)在同行公司上班的朋友, 給他提了個(gè)醒, 說(shuō): “你去試試酶活性比色法檢測(cè)試劑盒, 我們這邊才剛換的, 它的穩(wěn)定性把熒光法甩出去好幾條街呢?！崩蠌埿睦飳⑿艑⒁? 畢竟比色法聽(tīng)起來(lái)貌似有點(diǎn)“老派”, 當(dāng)下大家不都是在追求高靈敏的熒光和發(fā)光法嗎? 不過(guò)他實(shí)在是被波動(dòng)的數(shù)據(jù)折磨得夠慘的, 于是決定死馬當(dāng)活馬醫(yī)。
他先是從供應(yīng)商那兒要了一份樣品, 拿到手予以細(xì)看說(shuō)明書(shū)。酶活性比色法檢測(cè)試劑盒的原理實(shí)際上并不復(fù)雜, 底物于酶的作用之下生成有色產(chǎn)物, 顏色深淺跟酶活性成正比例, 借助酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)讀取吸光度即可。老張講, 他最為擔(dān)心的是比色法靈敏度不足不夠, 畢竟他的樣品濃度跨度大, 從納摩爾直至微摩爾均有。但真正著手之后, 他發(fā)覺(jué)情況全然不一樣。
進(jìn)行首次正式實(shí)驗(yàn)時(shí), 他挑選了來(lái)自同一批次的試劑盒, 使用自身配制的標(biāo)準(zhǔn)品展開(kāi)了八次重復(fù)操作。結(jié)果呈現(xiàn)出來(lái)后, CV值（也就是變異系數(shù)）竟然僅僅只有3.2%。當(dāng)時(shí)老張?jiān)谖⑿派厦娼o我發(fā)送了一長(zhǎng)串的感嘆號(hào), 聲稱他投身這一行業(yè)這么多個(gè)年頭, 首次見(jiàn)識(shí)到比色法能夠?qū)⒅貜?fù)性達(dá)成這般程度。他隨后講道，這是源于酶活性比色法檢測(cè)試劑盒的底物具備良好穩(wěn)定性, 不會(huì)如同熒光底物那般易于出現(xiàn)光漂白的情況, 并且也不會(huì)受到pH以及溫度微小波動(dòng)的影響。
四月底的時(shí)候, 老張所負(fù)責(zé)的項(xiàng)目迎來(lái)了最為緊張的那個(gè)節(jié)點(diǎn), 這個(gè)節(jié)點(diǎn)就是老板要求他在五一假期到來(lái)之前提交一份完整的數(shù)據(jù)報(bào)告。當(dāng)時(shí)時(shí)間緊迫, 任務(wù)繁重, 他需要在三天的時(shí)間內(nèi)完成兩百多個(gè)樣品的檢測(cè)工作。要是采用原來(lái)的熒光法, 那么單次實(shí)驗(yàn)就得花費(fèi)四個(gè)小時(shí)的時(shí)間, 并且還需要頻繁地校準(zhǔn)儀器, 這樣根本就來(lái)不及完成任務(wù)。然而酶活性比色法檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)流程簡(jiǎn)單到讓他感到意外, 其流程為加樣、然后孵育, 最后讀板, 僅僅三步就能夠搞定, 一個(gè)96孔板從開(kāi)始一直到得出數(shù)據(jù)所花費(fèi)的時(shí)間不到九十分鐘。
鏖戰(zhàn)兩晝夜以迄, 老張按時(shí)呈上報(bào)告。數(shù)據(jù)之佳, 令其自身亦稍感恍惚, 陽(yáng)性對(duì)照之抑制率恒定于百分之九十五至百分之九十八間, 陰性對(duì)照之基線漂移幾可忽之不計(jì)。老板閱畢報(bào)告, 破天荒嘉許之, 且詢其何以得此成效。老張憨笑, 未多言, 然其后私下告我: “此酶活性比色法檢測(cè)試劑盒實(shí)乃為我省卻諸多心力, 數(shù)據(jù)穩(wěn)則底氣足?！?。
酶活性比色法檢測(cè)試劑盒到底準(zhǔn)不準(zhǔn)？
眾多人一聽(tīng)“比色法”這三個(gè)字, 其第一反應(yīng)便是“老古董”。老張先前亦是這般認(rèn)為, 覺(jué)得比色法靈敏度欠缺、抗干擾能力欠佳, 比不上熒光法以及化學(xué)發(fā)光法那般“高大上”。然而此次親身經(jīng)歷使之徹底改變看法。他向我解釋稱, 當(dāng)下的酶活性比色法檢測(cè)試劑盒歷經(jīng)了好幾輪技術(shù)迭代 , 底物選擇更為講究 , 緩沖體系也更為穩(wěn)定 , 諸多廠家甚至添加了抗氧化劑與螯合劑來(lái)排除金屬離子干擾。
舉自己所用品牌為例的老張, 在不同溫度, 也就是22°C、25°C、37°C的不同條件下, 又在不同pH, 即7.0、7.5、8.0的不同情形下, 做了交叉驗(yàn)證, 結(jié)果表明吸光度的變化幅度不超過(guò)5%。這表明即便實(shí)驗(yàn)條件存在輕微波動(dòng), 數(shù)據(jù)依舊可靠。他專門查閱了文獻(xiàn), 發(fā)覺(jué)諸多發(fā)表于SCI一區(qū)期刊上的酶動(dòng)力學(xué)研究, 運(yùn)用的正是這種方法。他深有感觸地說(shuō): “準(zhǔn)不準(zhǔn), 并非是查看方法的新舊, 而是看數(shù)據(jù)跟真實(shí)情況能否對(duì)得上?！薄?/p>
酶活性比色法檢測(cè)試劑盒怎么選，關(guān)鍵看這幾點(diǎn)
經(jīng)受過(guò)熒光法之坑的老張, 在選擇試劑盒這件事情上變得格外審慎。他自行歸納出了一套篩選標(biāo)準(zhǔn), 我在對(duì)其進(jìn)行整理之后, 將之分享給或許會(huì)遭遇相同困境的你。
查看底物的特異性, 部分比色法試劑盒中的底物, 會(huì)遭受還原性如DTT、谷胱甘肽這類物質(zhì)的干擾, 進(jìn)而致使出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況。老張?jiān)谶M(jìn)行試用之前, 特地實(shí)施了干擾測(cè)試, 將常用的還原劑添加到反應(yīng)體系當(dāng)中, 結(jié)果他所選的這個(gè)品牌并未受到顯著的影響。
觀看檢測(cè)的窗口期, 比色法的線性范圍相當(dāng)關(guān)鍵, 要是這個(gè)范圍太過(guò)狹窄的話, 那些高濃度的樣品很容易就會(huì)達(dá)到飽和狀態(tài), 而對(duì)于低濃度的樣本卻又沒(méi)辦法檢測(cè)出來(lái), 老張所使用的那個(gè)試劑盒, 其線性范圍涵蓋了從0.1到100毫單位的酶活性, 大體上能夠覆蓋他所面臨的所有場(chǎng)景。
留意批間一致性情況。他一次性購(gòu)入三個(gè)批次的試劑盒, 于同一條件下開(kāi)展標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比工作, 三個(gè)批次的斜率差異未達(dá)8%。他對(duì)我講, 批間穩(wěn)定乃是進(jìn)行QC以及長(zhǎng)期追蹤實(shí)驗(yàn)的生命線, 稍有差池便會(huì)導(dǎo)致前功盡棄。
酶活性比色法檢測(cè)試劑盒會(huì)不會(huì)被其他方法淘汰？
五月中旬的時(shí)候, 老張前往參加了一場(chǎng)行業(yè)交流會(huì), 在交流會(huì)的席間, 老張跟幾個(gè)同行交流討論到了檢測(cè)方法的選擇問(wèn)題。當(dāng)時(shí), 有人提及, 當(dāng)下微流控以及電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)十分熱門, 那作為一種檢測(cè)方法的比色法, 會(huì)不會(huì)逐漸被邊緣化呢? 老張聽(tīng)到這話當(dāng)場(chǎng)便笑了, 他表示: “技術(shù)的確是在不斷更新的, 然而比色法所擁有的核心優(yōu)勢(shì), 也就是簡(jiǎn)單、穩(wěn)定以及成本低, 是其他方法在短期內(nèi)無(wú)法進(jìn)行替代的?！?。
他列舉了一個(gè)事例, 其所在的公司于去年購(gòu)置了最為新型的電化學(xué)檢測(cè)設(shè)備, 該設(shè)備的靈敏度確實(shí)堪稱頗高, 然而日常維護(hù)所需的成本以及耗材所產(chǎn)生的費(fèi)用卻增長(zhǎng)了數(shù)倍之多, 并且其操作極為繁雜, 培訓(xùn)一位新手能夠上手操作至少需要長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月的時(shí)間。而酶活性比色法檢測(cè)試劑盒, 實(shí)習(xí)生經(jīng)過(guò)半天的培訓(xùn)便能夠獨(dú)立進(jìn)行操作。老張進(jìn)行了一番成本核算: 采用熒光法, 單個(gè)檢測(cè)孔的成本大約處于八塊錢左右；采用比色法, 單個(gè)檢測(cè)孔的成本低于兩塊五毛錢。對(duì)于中小型的研發(fā)團(tuán)隊(duì)而言, 哪種方法性價(jià)比更高顯而易見(jiàn)。
在交流會(huì)結(jié)束以后, 老張便跟好幾個(gè)同行相互留下了聯(lián)系方式。其中有一個(gè)從事抗體藥方面工作的朋友, 在回去之后, 也更換了酶活性比色法檢測(cè)試劑盒 , 在試用了一個(gè)星期以后, 給他發(fā)送消息講: “以往采用熒光法的時(shí)候, 老是會(huì)被細(xì)胞裂解液當(dāng)中的自發(fā)熒光所干擾 , 在換成比色法以后, 數(shù)據(jù)變得干凈多了 , 終于不用在半夜起床重新做實(shí)驗(yàn)了。”。
老張的酶活性比色法檢測(cè)試劑盒使用心得
昨天, 我前往老張的實(shí)驗(yàn)室, 目的是去找他一塊兒喝茶, 當(dāng)時(shí)他桌上正攤著剛剛做完的一批結(jié)果, 他伸手拿起一個(gè)試劑盒的包裝盒, 而后指著上面所標(biāo)注的參數(shù), 對(duì)著我說(shuō)道, 你瞧, 這個(gè)試劑的保存條件明確寫(xiě)著是4°C避光處, 有效期為十二個(gè)月, 那我去年購(gòu)買的那個(gè)批次, 直至如今仍在使用, 并且數(shù)據(jù)穩(wěn)定性絲毫沒(méi)有發(fā)生改變。
他特意著重提及操作方面的具體細(xì)節(jié), 比色法盡管較為簡(jiǎn)易, 然而在進(jìn)行加樣操作之際務(wù)必留意規(guī)避產(chǎn)生氣泡, 這是由于氣泡易于引發(fā)光散射現(xiàn)象出現(xiàn), 進(jìn)而對(duì)吸光度讀數(shù)造成影響。他向新手提出建議, 使用多道移液器通過(guò)分批的方式來(lái)加樣, 盡力維持每一個(gè)孔的反應(yīng)時(shí)間保持一致。除此之外, 他存有這樣的習(xí)慣, 即在每次開(kāi)展實(shí)驗(yàn)之前運(yùn)用新鮮配制而成的標(biāo)準(zhǔn)品去制作出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線, 以此確保所有的數(shù)據(jù)存在依據(jù)可供遵照。“切勿偷懶, 標(biāo)準(zhǔn)曲線乃是校準(zhǔn)流程中的關(guān)鍵所在, 省去這一步驟, 數(shù)據(jù)便決然毫無(wú)價(jià)值可言。”他輕抿了一口茶, 神情極為認(rèn)真地這般說(shuō)道。
老張最初被熒光法弄得焦頭爛額, 后來(lái)對(duì)酶活性比色法檢測(cè)試劑盒信心十足, 這期間他只用了不到兩個(gè)月時(shí)間。他跟我講, 做實(shí)驗(yàn)如同開(kāi)車, 路況良好時(shí)任何車都能行駛順暢, 可是碰到坑洼不平的爛路, 就能看出底盤(pán)是否穩(wěn)固了。如今的酶活性比色法檢測(cè)試劑盒, 底盤(pán)堅(jiān)實(shí), 操作簡(jiǎn)便, 數(shù)據(jù)穩(wěn)定, 對(duì)研發(fā)人員而言是最為靠譜的搭檔。
要是你同樣正為檢驗(yàn)數(shù)據(jù)不停波動(dòng)幅度大、反復(fù)出現(xiàn)規(guī)律性差而感到苦痛煩惱, 那不妨去嘗試一下老張?jiān)?jīng)走過(guò)的這條道路。有時(shí), 轉(zhuǎn)變一種思考的方向思路比一味固執(zhí)地鉆研新的方法手段更具實(shí)際效果作用。畢竟, 所開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)做得到底好不好呢, 并非取決于你動(dòng)用了多么昂貴價(jià)值高的技術(shù), 而是要看數(shù)據(jù)可不可以經(jīng)受得住嚴(yán)格細(xì)致的查問(wèn)考驗(yàn)。
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