和老張認(rèn)識(shí)已經(jīng)有七年時(shí)間了, 他于一家弄生物技術(shù)的公司擔(dān)任研發(fā)主管一職, 主要承擔(dān)跟動(dòng)物細(xì)胞有關(guān)聯(lián)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目方面的工作, 到了去年年末的時(shí)候, 公司承接了一項(xiàng)全新課題事例, 做這個(gè)需要大量運(yùn)用兔原代細(xì)胞去構(gòu)建藥物篩選模型。老張?jiān)居X(jué)得這個(gè)事情并非難事, 畢竟他在細(xì)胞培養(yǎng)范疇摸爬滾打累計(jì)已經(jīng)有十幾年光陰了, 什么樣的大風(fēng)浪沒(méi)遭遇見(jiàn)識(shí)過(guò)呢。
然而, 問(wèn)題緊接著出現(xiàn)了。老張首先選用實(shí)驗(yàn)室自己培育的新西蘭大白兔, 然后依照常規(guī)方式分離原代細(xì)胞。首次操作期間, 他帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)從午后兩點(diǎn)奮力工作至晚上九點(diǎn), 實(shí)施解剖、精細(xì)剪碎、耐心消化以及過(guò)濾等步驟, 每一個(gè)環(huán)節(jié)都開(kāi)展得萬(wàn)分謹(jǐn)慎。可是翌日觀察顯微鏡時(shí), 活率僅僅勉強(qiáng)達(dá)到百分之六十, 并且貼壁速度遲緩得令人咋舌。老張表示, 那時(shí)他凝視著培養(yǎng)皿, 登時(shí)后背涼意彌漫。
兔原代細(xì)胞真的很難養(yǎng)嗎
后來(lái)老張跟我復(fù)盤, 講他小看低估了兔子來(lái)源的原代細(xì)胞的敏感度。相比小鼠的細(xì)胞, 或者大鼠的細(xì)胞而言, 兔子的組織在取材以及消化的過(guò)程當(dāng)中格外容易遭受損傷。他嘗試了三種各不相同的膠原酶濃度, 調(diào)整過(guò)消化時(shí)間, 甚至還更換了兩次培養(yǎng)基配方, 然而結(jié)果一直都不容樂(lè)觀不理想。有一批細(xì)胞養(yǎng)到第三天的時(shí)候就開(kāi)始飄浮起來(lái), 最終整盤都被扔掉舍棄, 那種挫敗感經(jīng)歷過(guò)原代培養(yǎng)的人都明白懂得。
那個(gè)階段老張近乎每天都加班直至凌晨, 他和我講, 他找遍了國(guó)內(nèi)以及國(guó)外的文獻(xiàn), 發(fā)覺(jué)兔原代細(xì)胞的資料實(shí)際上極為有限, 許多論文之中所寫(xiě)的步驟都屬于簡(jiǎn)化的, 實(shí)際去操作時(shí)細(xì)節(jié)存在很大差異, 好比消化溫度相差兩度, 細(xì)胞活率就可以降低一大部分, 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部進(jìn)行實(shí)驗(yàn)不少于二十次, 成功概率一直僅有三成上下。
自己分離還是買現(xiàn)成的
到了今年一月份, 老張課題的進(jìn)度已然嚴(yán)重滯后。公司領(lǐng)導(dǎo)催促得很緊, 他只好重新去思考方案。他自己從兔子身上分離原代細(xì)胞, 雖說(shuō)成本看上去較低, 然而時(shí)間成本卻過(guò)高, 并且批次之間的差異十分驚人。有一批細(xì)胞的活率為百分之八十, 而下一批_cell可能會(huì)直接降至百分之四十, 根本無(wú)法確保實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。
老張著手慎重思考直接去購(gòu)買商業(yè)化獲得的兔原代細(xì)胞這件事。起初的時(shí)候他也是懷有疑慮的, 認(rèn)為購(gòu)入的細(xì)胞是不是比不上憑借自己力量去分離出來(lái)的那般可靠的, 會(huì)不會(huì)已然缺失了某些原代獨(dú)有的特性。然而確實(shí)是不存在更為妥善的辦法了, 他據(jù)此做出決定提前進(jìn)行嘗試一批去看看呈現(xiàn)出來(lái)的效果如何吶。
采購(gòu)?fù)迷?xì)胞需要注意什么
之前老張?jiān)谶M(jìn)行采購(gòu)這個(gè)行為的前期提前做了數(shù)量不少的功課, 他跟我講述, 首先要去確認(rèn)細(xì)胞來(lái)源所出自的兔子品系以及年齡狀況, 這是因?yàn)椴煌废档募?xì)胞特性之間存在非常大的差別, 其次是細(xì)胞所具有的純度跟活率, 供應(yīng)商務(wù)必要提供質(zhì)檢報(bào)告, 另外還有一點(diǎn)尤其關(guān)鍵, 那指的就是運(yùn)輸方式, 原代細(xì)胞對(duì)于溫度以及時(shí)間是極其敏感的, 如果運(yùn)輸這個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)差錯(cuò)的話, 等到拿到手的時(shí)候或許就已經(jīng)成為沒(méi)有用的東西了。
老張對(duì)四五家供應(yīng)商做了對(duì)比, 最終選定了一家在行業(yè)當(dāng)中口碑還算可以的公司。他選擇這家存在幾個(gè)緣由: 其一, 對(duì)方清晰標(biāo)明了兔子的品種以及月齡, 其二, 給出了第三方流式鑒定純度的數(shù)據(jù), 其三, 承諾會(huì)進(jìn)行全程冷鏈運(yùn)輸, 送達(dá)之后兩小時(shí)之內(nèi)能夠檢測(cè)活率。
第一批兔原代細(xì)胞到了之后怎么樣
老張于二月十五號(hào)下午, 在實(shí)驗(yàn)室收到了一批數(shù)量為第一的貨物, 這批貨物的快遞箱外面包裹著用于冷藏的冰袋, 其內(nèi)部具備三層包裝, 當(dāng)打開(kāi)之后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞瓶處于沒(méi)有毀壞的完整狀態(tài), 接著老張依據(jù)說(shuō)明書(shū), 將細(xì)胞快速轉(zhuǎn)移至已經(jīng)預(yù)熱的培養(yǎng)基當(dāng)中, 并放置在有培養(yǎng)功能的箱子里靜止下來(lái)持續(xù)了二十分鐘。
那天夜里, 老張未歸家, 始終在實(shí)驗(yàn)室注視著這批細(xì)胞 , 兩小時(shí)之后, 他著手換液 , 四小時(shí)之后, 他觀察貼壁情形。令他詫異的是, 這批細(xì)胞的貼壁效率頗高 , 近乎百分之九十以上的細(xì)胞都已然全然鋪展開(kāi) , 形態(tài)齊一 , 折光性亦佳。老張給我發(fā)送了一張顯微鏡呈現(xiàn)的照片 , 稱這是他近兩個(gè)月以來(lái)目睹的最稱心意的一批細(xì)胞。
買來(lái)的細(xì)胞和自己養(yǎng)的有什么不同
老張?jiān)诤髞?lái), 把所買來(lái)的細(xì)胞, 與自己分離出來(lái)的細(xì)胞, 做了平行對(duì)比實(shí)驗(yàn), 在同樣的條件之下進(jìn)行培養(yǎng), 歷經(jīng)七天時(shí)間, 買來(lái)的細(xì)胞增殖曲線更具穩(wěn)定性, 在傳到第三代以后, 其形態(tài)也并未出現(xiàn)明顯的變化, 然而自己分離的那種細(xì)胞, 到了第三代的時(shí)候, 其就開(kāi)始出現(xiàn)空泡化以及生長(zhǎng)停滯的跡象。
他剖析了若干緣由, 其一存在是專門的別流程序予以完善以, 從摘選材料直至提純的時(shí)段范圍把控更為卓越 , 之所以其二是供應(yīng)方持有規(guī)范化的動(dòng)物管控措施, 兔子的康健情形與喂養(yǎng)條件是實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所隨意放養(yǎng)難以相提并論的 , 尤為強(qiáng)調(diào)的是最關(guān)鍵的一點(diǎn), 商業(yè)化單元在產(chǎn)出之前會(huì)施行嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量把控, 涵蓋支原體、細(xì)菌以及真菌檢驗(yàn), 這削減了諸多后續(xù)篩查的時(shí)間。
兔原代細(xì)胞為什么選這家
上次老張用這批細(xì)胞順利完成了后續(xù)課題實(shí)驗(yàn), 在數(shù)據(jù)補(bǔ)充完整之際, 即一月份提交了中期報(bào)告。上個(gè)月他告知我, 這批細(xì)胞的批間差異極小, 他又進(jìn)行了兩次復(fù)購(gòu), 且每次的活率都穩(wěn)定處于百分之八十五以上。
現(xiàn)今, 老張已然成為這家供應(yīng)商的頻繁光顧者。他講自己最深切的體會(huì)是, 針對(duì)科研這一事項(xiàng)而言, 存在一些資金確實(shí)是不可節(jié)省的。他自行開(kāi)展兔原代細(xì)胞的分離工作, 看似從中節(jié)省了采購(gòu)費(fèi)用, 然而, 算下來(lái)所浪費(fèi)的時(shí)間以及人力成本實(shí)際上更為高昂, 并且實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)高度令人提心吊膽。與其將精力消耗在分離工藝方面, 倒不如把專業(yè)性的事務(wù)交付給專業(yè)人士去進(jìn)行處理。
就在前天, 老張把我請(qǐng)去吃飯, 談?wù)摰竭@件事情之時(shí)，他面帶笑容說(shuō)道, 要是早曉得當(dāng)初就更早一點(diǎn)去買現(xiàn)成的, 那樣子也就不會(huì)平白無(wú)故地煎熬兩個(gè)月夜晚了。他如今在辦公室里面經(jīng)常放置的那一臺(tái)顯微鏡, 以往觀察自己培育的細(xì)胞老是感覺(jué)不太對(duì)勁, 現(xiàn)如今終于能夠全神貫注去看實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果了。
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