上個月, 老同學(xué)阿強(qiáng), 是我那個從事基因檢測研發(fā)工作的, 差一點(diǎn)就要被一個項(xiàng)目給逼到發(fā)瘋的狀態(tài)了。
阿強(qiáng)于一家生物科技公司工作了五年, 其主要負(fù)責(zé)腫瘤早篩產(chǎn)品的開發(fā), 他技術(shù)底子深厚, 平常話語不多, 然而做事極其較真, 去年年末, 公司承接了一個大訂單, 需開發(fā)一套針對結(jié)直腸癌的早期甲基化檢測方案, 客戶催促急切, 預(yù)算限制嚴(yán)格, 阿強(qiáng)帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)連續(xù)忙碌了兩個多月, 結(jié)果在關(guān)鍵環(huán)節(jié)停滯了, 那就是甲基化特異性PCR實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性始終無法達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
“你可曉得那種感覺不? 恰似你分明瞅見終點(diǎn)線了, 然而腿卻無法挪動?！卑?qiáng)于某天夜里給我打來電話, 那聲音之中充斥著滿滿的疲憊。他嘗試了市面上三款各異的試劑盒, 有的擴(kuò)增效率那般低, 有的非特異性信號過于強(qiáng), 還有的一批次的穩(wěn)定性差勁至使人崩潰。曾經(jīng)有一回, 針對同一批樣本, 上午與下午所跑出的結(jié)果相差近乎兩倍, 氣得他差點(diǎn)將移液器給摔了。
在那一段時期當(dāng)中, 阿強(qiáng)差不多每天都沉浸于實(shí)驗(yàn)室之內(nèi)。他全面查閱了國內(nèi)以及國外的文獻(xiàn)資料, 與好幾個供應(yīng)商的技術(shù)支持方面取得了聯(lián)絡(luò), 甚至于自己掏腰包購買了進(jìn)口的試劑盒用以進(jìn)行對比。然而, 問題依舊是存在著的: 甲基化特異性PCR對于引物以及探針的設(shè)計(jì)所提出的要求是極為高的, 普通試劑盒的靈敏度根本就無法滿足臨床樣本的檢測需要。
三月初作為一處轉(zhuǎn)折點(diǎn)出現(xiàn)了, 有關(guān)阿強(qiáng)在北京參與一場行業(yè)交流會, 于茶歇之際跟一位同行談及這個困境, 那位對方聽聞他的描述后, 直接猛地拍了一下大腿, 說道, 你早講述為何不提前說此事, 我們以前也碰到過這個坑, 隨后更換了一款專門進(jìn)行優(yōu)化的甲基化特異性PCR試劑盒, 如此一來問題便全部被解決掉了。
那阿強(qiáng), 是半信半疑著要了聯(lián)系方式。之后, 他回了去, 接著便迅速聯(lián)系了那家公司的技術(shù)團(tuán)隊(duì)。而對方, 并沒有急著去進(jìn)行產(chǎn)品推銷這么回事, 反倒是先讓阿強(qiáng)把背景樣本寄過去, 隨后用他們自己的試劑盒做了一輪預(yù)實(shí)驗(yàn)。又過了三天, 結(jié)果出來了。靈敏度提升了至少兩個數(shù)量級, 非特異性信號幾乎是零, 并且批次間的Ct值差異控制在0.5以內(nèi)。
阿強(qiáng)更意外的是, 那款試劑盒做了特殊處理, 采用其雙重淬滅技術(shù), 這種技術(shù)能有效抑制背景干擾, 同時在引物設(shè)計(jì)上, 通過優(yōu)化緩沖體系, 其已提高了對低豐度甲基化模板的捕獲效率。阿強(qiáng)后來跟我解釋, 這類似在喧鬧菜市場, 本來你僅能聽見身旁人言語, 但是這款試劑盒就像給裝了定向mic, 連角落討價還價聲都能清晰捕捉到。
在四月中旬之際, 阿強(qiáng)所帶領(lǐng)的團(tuán)隊(duì), 借助全新的試劑盒, 再次從頭到尾對所有驗(yàn)證樣本進(jìn)了行操作, 結(jié)果顯著令人感到振奮不已: 不僅特異性達(dá)到了99.2%, 而且最低檢測限降低到了0.1%的甲基化水平, 整個一從樣本處理開始一直到結(jié)果輸出的流程, 僅僅只用了不到四個小時的時間。最終項(xiàng)目順利地通過了內(nèi)部評審, 在客戶那邊也得到了高度評價。
在此之后, 阿強(qiáng)針對這件事來進(jìn)行復(fù)盤, 而后跟我講了這樣一句話, 其表示: “展開甲基化檢測, 其中的核心內(nèi)容就涉及三個字, 分別是——穩(wěn)、準(zhǔn)、快。所謂穩(wěn)指的是重復(fù)性, 而準(zhǔn)說的是特異性, 快所代表的則是效率。要是這三項(xiàng)之中缺少任何一個, 那么之前所投入的功夫就全都白費(fèi)了。”。
他講的這番話語, 使我憶起眾多從事搞研發(fā)的友人都共有的一種毛病, 那便是總是想著憑借自身硬是去扛住, 碰到技術(shù)方面的瓶頸之時, 也不愿意去更換工具。然而實(shí)際的情況卻是, 在甲基化特異性PCR這個領(lǐng)域范圍內(nèi), 試劑盒的挑選抉擇直接就決定了實(shí)驗(yàn)的成功與失敗。一款優(yōu)良的試劑盒, 能夠幫你節(jié)省下最少一半的調(diào)試所用時間, 更為關(guān)鍵重要的是,它能夠確保結(jié)果是經(jīng)得起仔細(xì)琢磨推敲的。
這會兒, 阿強(qiáng)的那個項(xiàng)目已然步入臨床驗(yàn)證時期, 成效比預(yù)想的還要好。他時不時會跟我說起: “要是早曉得當(dāng)初徑直選用對甲基化特異性PCR試劑盒, 怎會白白熬過那兩個月呢。”。
