你發(fā)生過(guò)這樣的事嗎: 買(mǎi)回一個(gè) ELISA 試劑盒, 然而實(shí)驗(yàn)做不成, 重復(fù)性欠佳, 數(shù)據(jù)完全沒(méi)法用了, 對(duì)? 別著急, 對(duì)于此事我結(jié)識(shí)一位叫做老張的朋友可以說(shuō)道說(shuō)道, 他往昔在生物公司工作有三年還多, 日常都在跟 ELISA 試劑盒打交道。他曾踩過(guò)的坑以及總結(jié)得出的經(jīng)驗(yàn), 我認(rèn)為是值得拿出來(lái)談?wù)撘环?。這篇文章并非很高深上檔次的理論內(nèi)容, 只是老張親身經(jīng)歷的實(shí)實(shí)在在的事情, 期望能夠讓你少走些冤枉路。
老張是誰(shuí)，他到底在干什么
老張今年三十剛過(guò)不多, 于一家規(guī)模處于中等狀態(tài)的生物科技公司擔(dān)任研發(fā)主管, 他所負(fù)責(zé)主導(dǎo)的項(xiàng)目主要在于開(kāi)展免疫檢測(cè)類產(chǎn)品的發(fā)展工作, 簡(jiǎn)單來(lái)講, 就是每日與形形色色的ELISA試劑盒進(jìn)行諸多接觸, 從原料的挑選甄別開(kāi)始, 到方法的優(yōu)化改進(jìn), 再到最終產(chǎn)品的驗(yàn)證, 他獨(dú)自承擔(dān)了七八個(gè)項(xiàng)目的相關(guān)任務(wù), 公司內(nèi)部的人員都稱呼他為“ELISA老手”, 可是老張自己講這個(gè)“老手”名號(hào), 是憑借無(wú)數(shù)回失敗的經(jīng)歷才得以換來(lái)的。
他開(kāi)始發(fā)現(xiàn)ELISA試劑盒不對(duì)勁
去年夏天的時(shí)候, 老張承接了一個(gè)新出現(xiàn)的項(xiàng)目, 這個(gè)項(xiàng)目要求檢測(cè)某一種細(xì)胞因子在小鼠血清里的含量, 該項(xiàng)目時(shí)間緊迫, 任務(wù)繁重, 公司的采購(gòu)部門(mén)貪圖省事, 直接尋覓了一家價(jià)格較為便宜的供應(yīng)商, 購(gòu)買(mǎi)了一整批ELISA試劑盒, 老張把試劑盒拿到手的時(shí)候沒(méi)有過(guò)多去思考, 依照既定步驟開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果第一批數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出來(lái)候, 他愣住了, 同樣的那些樣本, 遵循同一個(gè)操作流程, 做出來(lái)的結(jié)果有著很大的 fluctuate, 有些孔幾乎檢測(cè)不到信號(hào), 有些孔信號(hào)出奇地高了很多。
那幾天晚上, 老張聲稱自己睡眠狀況欠佳, 不斷反復(fù)核查實(shí)驗(yàn)步驟, 心中懷疑自身操作存在差錯(cuò)。他的同事勸其更換一批試劑盒進(jìn)行嘗試, 他卻強(qiáng)硬地回應(yīng)稱“不過(guò)就是ELISA試劑盒罷了, 理應(yīng)問(wèn)題不至于太大”。然而數(shù)據(jù)有著不容置疑的特性, 經(jīng)過(guò)連續(xù)三次的重復(fù)實(shí)驗(yàn), 結(jié)果始終處于不穩(wěn)定狀態(tài)。最終他得以明白, 此事并非僅僅關(guān)乎他個(gè)人的操作, 問(wèn)題的根源實(shí)則在于試劑盒本身。
他嘗試自己排查問(wèn)題
做事認(rèn)真的老張, 不甘心就這么放棄, 他開(kāi)始從頭梳理問(wèn)題可能出的地方, 是包被抗體濃度不對(duì)嗎, 還是酶標(biāo)抗體批次有差異, 又或者是洗板步驟不夠標(biāo)準(zhǔn), 他把每個(gè)環(huán)節(jié)都列出來(lái), 逐一排查。
那兩周, 他花了幾乎每天的時(shí)間待在實(shí)驗(yàn)室里。他先更換了不同批次的樣本去做對(duì)比, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)高背景干擾的情況特別嚴(yán)重。他接著又嘗試對(duì)孵育時(shí)間以及溫度進(jìn)行調(diào)整, 然而效果卻是微乎其微的。彼時(shí)老張跟我吐槽講: “感覺(jué)如同在黑暗當(dāng)中摸著墻去走路, 明明清楚墻就在那個(gè)地方, 可是卻愣是尋不到門(mén)?！薄?/p>
終于找到了關(guān)鍵原因
一日, 老張偶然翻到一本頗為冷門(mén)的技術(shù)手冊(cè), 手冊(cè)之中提及了ELISA試劑盒里酶標(biāo)抗體的穩(wěn)定性情況。他瞬間受到了提示。他趕忙將手中那批試劑盒的說(shuō)明書(shū)找出并仔細(xì)查看, 發(fā)覺(jué)此供應(yīng)商所提供的酶標(biāo)抗體效價(jià)標(biāo)注得含糊不清, 且并未給出詳盡的批次間一致性數(shù)據(jù)。
老張即刻去聯(lián)系供應(yīng)商, 那供應(yīng)商說(shuō)話吞吞吐吐, 號(hào)稱“或許是在運(yùn)輸進(jìn)程里保存方式不妥當(dāng), 致使抗體活性出現(xiàn)下降的狀況”。老張心里清楚, 這極有可能是生產(chǎn)環(huán)節(jié)自身就存有問(wèn)題。他拿定主意改換成另外一家供應(yīng)商。此次他變得機(jī)靈起來(lái), 在采購(gòu)之前先要了小 batches 試用的樣品, 而且要求對(duì)方給出完整的性能驗(yàn)證報(bào)告。
換了新的ELISA試劑盒之后
到手新供應(yīng)商的ELISA試劑盒后, 老張做了一次預(yù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果使他松了一口氣, 背景干凈, 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性佳, 重復(fù)性與平行性均達(dá)預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)。他連續(xù)測(cè)試三批樣本, SD值跟CV值控制良好, 數(shù)據(jù)漂亮得讓他自己都忍不住多看幾遍。
老張后來(lái)跟我講, 以前一直覺(jué)著便宜等同于省錢(qián), 如今才弄清楚, 省下來(lái)這般一點(diǎn)錢(qián), 最終全都成了時(shí)間以及精力方面的浪費(fèi) , 這話, 我認(rèn)為眾多做實(shí)驗(yàn)的人士都會(huì)感慨頗深。
他總結(jié)了一套選盒子的方法
老張如今于團(tuán)隊(duì)里承擔(dān)ELISA試劑盒采購(gòu)評(píng)估工作, 他構(gòu)建了一套歸屬自己的篩選標(biāo)準(zhǔn)。其一, 他要求供應(yīng)商務(wù)必提供詳盡的批次信息, 涵蓋批間變異系數(shù)以及有效期內(nèi)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。其二, 他要查看試劑盒的抗體對(duì)有無(wú)歷經(jīng)嚴(yán)格的交叉反應(yīng)驗(yàn)證, 防止非特異性結(jié)合引發(fā)的背景干擾。其三, 他亦建議大家在開(kāi)展正式實(shí)驗(yàn)之前, 先用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品跑完整個(gè)流程, 確保試劑盒在自身的實(shí)驗(yàn)體系里是有效的。
他講道, ELISA試劑盒是否好用, 僅僅看宣傳材料是沒(méi)效用的, 必須得自己動(dòng)手去嘗試。一個(gè)真正值得信賴的試劑盒, 理應(yīng)能夠讓你在進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)之際, 就算閉著眼睛也均能操作完成得出結(jié)果, 而并非每一次都好似開(kāi)啟盲盒那般。
從個(gè)人經(jīng)驗(yàn)到團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)
這段經(jīng)歷被老張整理成了一份內(nèi)部培訓(xùn)資料, 并分享給了公司其他實(shí)驗(yàn)員, 現(xiàn)在他們團(tuán)隊(duì)存在個(gè)不成文規(guī)定, 即凡是新采購(gòu)的ELISA試劑盒, 都必須先歷經(jīng)兩周的試用測(cè)評(píng), 合格以后才能夠批量入庫(kù), 此方法盡管多耗費(fèi)了一些前期時(shí)間, 卻大幅提高了實(shí)驗(yàn)的成功率。
曾經(jīng)有一回, 公司舉行季度會(huì)議, 在那次會(huì)議當(dāng)中, 老張的老板對(duì)他予以表?yè)P(yáng), 聲稱他“借助一次經(jīng)歷挫折換得了公司一整年實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的提高”, 老張笑了笑, 跟我講說(shuō): “暫且從表面上來(lái)看, 好似是運(yùn)氣不錯(cuò), 然而實(shí)際上, 唯有我自己清楚, 那是經(jīng)由多少個(gè)無(wú)眠之夜才換取來(lái)的?！?。
最后想說(shuō)的
老張講完了故事, 沒(méi)錯(cuò)！我感覺(jué)到, 他所踩過(guò)的那些坑, 事實(shí)上, 好多搞實(shí)驗(yàn)的人都碰到過(guò)。ELISA試劑盒這玩意兒, 瞅著挺簡(jiǎn)單, 然而, 真正要做好做穩(wěn)它, 這里面的門(mén)道可真是特別多！從抗體對(duì)的搭配開(kāi)始, 一直到反應(yīng)體系的優(yōu)化, 每一個(gè)步驟, 都或許能夠決定數(shù)據(jù)的成?。∵x對(duì)一款靠譜的試劑盒, 可不單單能夠節(jié)省時(shí)間, 更是能夠讓你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)得起仔細(xì)的推敲！
要是你此刻也正因?yàn)镋LISA試劑盒老是接二連三地出現(xiàn)狀況而感到苦惱煩悶, 那不妨?xí)呵彝Ｏ率种兄滤妓饕幌? 是不是也應(yīng)當(dāng)如同老張那般, 轉(zhuǎn)換一種想法, 更換另一樣產(chǎn)品去嘗試一番呢? 某些情形下, 問(wèn)題并非出在你自身這里, 而是藏在那個(gè)盒子當(dāng)中。
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