我認(rèn)識一個(gè)做細(xì)胞培養(yǎng)的朋友
我存在一位名為老周的朋友, 于長三角地區(qū)的一家生物公司擔(dān)任研發(fā)主管一職, 其專門對細(xì)胞培養(yǎng)這個(gè)領(lǐng)域予以負(fù)責(zé)。他從事這一行業(yè)將近十年時(shí)間了, 從剛剛畢業(yè)之際于實(shí)驗(yàn)室里從事打雜事務(wù), 演變至如今帶領(lǐng)十來人的團(tuán)隊(duì), 算得上是在圈子當(dāng)中有著一定名氣的“細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)豐富之人”。然而你可知道呀? 就在去年的時(shí)候, 他差一點(diǎn)因?yàn)榧?xì)胞出現(xiàn)污染的問題而慘遭老板責(zé)罵直至面臨辭職的情況。
做細(xì)胞培養(yǎng)總是污染怎么辦？
主要從事干細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)的老周所在公司, 細(xì)胞培養(yǎng)乃是其最為核心的環(huán)節(jié)。去年夏天的時(shí)候, 他們承接了一個(gè)大客戶所下的訂單, 要去制作一批用于臨床前研究的間充質(zhì)干細(xì)胞。按道理來講, 老周團(tuán)隊(duì)的經(jīng)驗(yàn)已然足夠成熟了, 從培養(yǎng)基的配制一直到無菌操作, 每一個(gè)步驟都存在著SOP。
能奇怪的事情發(fā)生了呀 , 接連有三批細(xì)胞 , 它們各自在培養(yǎng)進(jìn)展到第五天那個(gè)時(shí)候 , 居然都出現(xiàn)了細(xì)菌污染的狀況。培養(yǎng)基由此變得渾濁起來 , pH值跟著下降了 , 細(xì)胞最終全部死掉了。老周在那段日子里 , 幾乎每天都在加班 , 對培養(yǎng)箱 、超凈臺 、血清批次進(jìn)行了排查 , 甚至還把整個(gè)實(shí)驗(yàn)室從頭到尾做了一番徹底的熏蒸消毒。
細(xì)胞培養(yǎng)污染源到底在哪？
到了2025年8月, 有個(gè)周末, 老周約我去喝酒, 他滿臉帶著愁容, 說著: “我實(shí)在想不明白, 所有的操作全部都是按照標(biāo)準(zhǔn)去進(jìn)行的, 而且耗材每一個(gè)也都是大牌子的, 可怎么就老是出現(xiàn)污染的情況呢? ”。
當(dāng)其時(shí), 我隨意地問了那么一句: “你對細(xì)胞培養(yǎng)的起始密度進(jìn)行過排查嗎, ”，“有的時(shí)候并非是污染情況, 而是細(xì)胞狀態(tài)欠佳所引發(fā)的假陽性現(xiàn)象?！?。
老周一愣, 說道這點(diǎn)他可沒有留意。隨后他返回去再次進(jìn)行復(fù)盤, 發(fā)覺近期因趕工期, 團(tuán)隊(duì)為了能產(chǎn)出更多數(shù)量, 將每瓶細(xì)胞的接種密度提升了差不多一倍。結(jié)果細(xì)胞在培養(yǎng)后期代謝產(chǎn)物出現(xiàn)堆積, 培養(yǎng)基變得發(fā)酸, 眼睛看上去好似被污染, 實(shí)際上是因細(xì)胞密度過高致使了凋亡, 細(xì)菌僅僅是繼發(fā)性感染。
怎樣避免細(xì)胞培養(yǎng)中的假陽性污染？
此發(fā)現(xiàn)令老周猛地一下子就醒悟過來了, 隨后其于團(tuán)隊(duì)內(nèi)部搞了一回專題培訓(xùn), 著重指出細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)程里頭絕對不可以僅僅只去看那些表面呈現(xiàn)出來的現(xiàn)象, 2025年9月之時(shí), 他們又承接了一批大同小異的訂單, 這次依照經(jīng)驗(yàn)密度來接種那是相當(dāng)嚴(yán)格的, 每瓶在細(xì)胞容納量上控制于2×10?個(gè)細(xì)胞/mL, 與此同時(shí)還提升了每日在顯微鏡之下觀察細(xì)胞形態(tài)的頻次。
在那批細(xì)胞培養(yǎng)期間, 進(jìn)展異常順?biāo)? 直至收獲階段時(shí), 細(xì)胞活力已然高于95% , 客戶驗(yàn)收環(huán)節(jié)一次性順利通過。后來老周對我講述, 在其歷經(jīng)諸多細(xì)胞培養(yǎng)工作的漫漫歲月里, 所領(lǐng)悟到最為深刻且長久的行事教訓(xùn)在于, 絕不可一味盲目地迷信既定規(guī)程, 還應(yīng)當(dāng)憑借實(shí)際狀況, 進(jìn)行靈活多變的適時(shí)調(diào)整。
細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)基配比該怎么調(diào)？
就實(shí)際情況而言，除開密度方面的問題之外, 老周還遭遇過另外一個(gè)極大的失誤。2025年3月的時(shí)候, 他們的公司引入了一種全新的無血清培養(yǎng)基, 宣稱能夠大幅度地提高細(xì)胞增殖的速度。老周遵照廠家所推薦的配方直接予以使用, 然而結(jié)果是細(xì)胞生長得極為迅速, 可是當(dāng)傳代至第三代的時(shí)候就開始出現(xiàn)分化的狀況, 干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)呈現(xiàn)出下降的態(tài)勢。
他查閱了數(shù)量眾多的文獻(xiàn), 還與數(shù)位同行展開了交流, 進(jìn)而發(fā)現(xiàn)此種培養(yǎng)基的葡萄糖濃度偏高, 針對他們所使用的那一株細(xì)胞而言, 必須將谷氨酰胺的濃度從起初的2mM調(diào)整至4mM, 方可維持細(xì)胞的干性, 調(diào)整過后, 問題果真得到了解決。
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)血清到底該不該加？
現(xiàn)今諸多實(shí)驗(yàn)室都在推行無血清培養(yǎng), 然而老周講, 不能夠一概論之。將于2025年12月的時(shí)候, 他們給一家醫(yī)院送去一批用于免疫調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞, 那家醫(yī)院提出要求, 必須得使用含有胎牛血清的培養(yǎng)基。老周對兩批細(xì)胞做了對比, 發(fā)覺添加血清的那一批在促炎因子分泌能力方面的確是更強(qiáng)一些。
于是乎, 在二零二六年年初之際, 于公司所舉辦的技術(shù)會議當(dāng)中, 此人提出這樣的觀點(diǎn): 關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)方案的挑選這個(gè)行為, 必然是需要緊密結(jié)合最終將會應(yīng)用的場景情況, 以此來做出決定的。絕不能夠只因想要節(jié)省成本抑或是追逐流行趨勢, 進(jìn)而毫無依據(jù)地去改變培養(yǎng)所需要的條件。
細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染怎么查？
這是老周于近期半年著重予以關(guān)注的問題 , 在2026年2月 , 他們的一個(gè)合作實(shí)驗(yàn)室反饋稱 , 所收到的細(xì)胞樣品支原體檢測呈現(xiàn)為陽性 , 老周驚了一下 , 因?yàn)榘凑账麄兊某Ｒ?guī)檢測是每批次進(jìn)行抽檢 , 而結(jié)果呢就是這批恰好沒有被抽到。
他馬上開啟了那種一應(yīng)俱全流程的排查工作, 最終找尋出原來是放置液氮罐里的種子細(xì)胞, 在進(jìn)行凍存操作之前就已然存在著具有低載量特征的支原體污染狀況。而在此事過后, 老周強(qiáng)行規(guī)定: 所有進(jìn)入庫房里面的細(xì)胞都必然要進(jìn)行支原體PCR檢測這一系列舉措, 并且每一個(gè)季度都要針對液氮罐展開一次環(huán)境方面像抽取樣品那樣的操作。
細(xì)胞培養(yǎng)傳代次數(shù)控制在多少比較好？
老周所擁有的經(jīng)驗(yàn)是, 依據(jù)細(xì)胞類型存在差異, 傳代次數(shù)的上限會有著極大的不同, 像是他們時(shí)常采用的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞, 通常主張?jiān)赑5范圍以內(nèi)予以使用, 一旦超過P8便極易出現(xiàn)衰老狀況, 在2026年4月, 存在一位實(shí)習(xí)生為了貪圖省事這一目的, 將一批處于P6的細(xì)胞接下來又傳了三代之多, 最終在進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)的時(shí)候全然沒有任何效果。
老周制作了一張傳代次數(shù)的對照表, 把它張貼在每一個(gè)培養(yǎng)箱的旁邊, 并且明確規(guī)定, 不一樣細(xì)胞株的使用代數(shù)之上限。如今團(tuán)隊(duì)之中的每一個(gè)人都嚴(yán)格去執(zhí)行。
細(xì)胞培養(yǎng)中污染后該怎么徹底消毒？
上個(gè)月的時(shí)候, 在2026年5月期間, 老周的實(shí)驗(yàn)室出乎預(yù)料地發(fā)生了一回真菌污染。當(dāng)時(shí), 有一個(gè)培養(yǎng)皿長出了毛霉菌, 毛霉菌的孢子飄散到了整個(gè)培養(yǎng)箱之中。面對這種情況, 老周并沒有表現(xiàn)出慌張, 他依據(jù)以前所積累下來的經(jīng)驗(yàn), 先是關(guān)停了培養(yǎng)箱, 接著使用75%酒精擦拭了所有的內(nèi)壁, 隨后又用過氧乙酸進(jìn)行了8小時(shí)的熏蒸, 最后進(jìn)行了紫外線照射直至過夜。與此同時(shí), 他還把培養(yǎng)箱的HEPA過濾器換成了新的。三天過后重啟了培養(yǎng)箱, 之后連續(xù)進(jìn)行空白培養(yǎng)一周時(shí)間, 最終并沒有出現(xiàn)任何污染跡象。
寫在最后
常言說的老周, 從事細(xì)胞培養(yǎng)工作時(shí)覺得恰似養(yǎng)育孩子那般, 靠書本里知識并不足夠, 還得于日常操作期間積累經(jīng)驗(yàn)。如今他帶領(lǐng)新人之際, 頭一句話總會這般講: “別認(rèn)為無菌操作便足夠可以, 細(xì)胞培養(yǎng)里每個(gè)細(xì)節(jié)都興許決定成功或者失敗?！?。
要是你同樣在從事細(xì)胞培養(yǎng), 碰到過近似的污染狀況或者面對著細(xì)胞狀態(tài)欠佳的問題, 不妨掉轉(zhuǎn)頭去瞧瞧自身的操作流程, 很可能那些藏在平常習(xí)慣里的小細(xì)節(jié)就是癥結(jié)所在。
